外界因素對仔豬腹瀉大腸桿菌生長的影響

談福利 方光遠 張萍 張智敏 陳俊紅 蔣加進

摘? 要：為了更好地預防和控制仔豬腹瀉大腸桿菌病，通過更有效的措施殺滅仔豬腹瀉大腸桿菌，本試驗通過采用不同的物理因素（溫度、pH、滲透壓和培養時間）、化學因素（乙醇、甲醛、新潔爾滅和復合碘）和抗生素（鏈霉素、慶大霉素、頭孢曲松和頭孢噻呋），對仔豬腹瀉大腸桿菌進行生長影響試驗。通過獲得不同外界因素對仔豬腹瀉大腸桿菌生長影響的試驗數據，分析各種外界因素對仔豬腹瀉大腸桿菌生長的影響，為有效控制仔豬腹瀉大腸桿菌病提供理論依據。

關鍵詞：仔豬腹瀉大腸桿菌；外界因素；生長

仔豬腹瀉大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌引起仔豬發生腹瀉的一種急性腸道傳染病，常見的有仔豬黃痢、仔豬白痢和斷奶仔豬水腫病[1]。該病在我國許多地區的豬場都有發生，是危害仔豬的重要傳染病之一[2]。據資料統計，我國仔豬死亡率在15％～25％，0～2周齡仔豬的死亡率為26％，2～4周齡仔豬的死亡率為16％，因斷奶引發腹瀉而導致的死亡數占總死亡數的49％，主要是由大腸桿菌導致的[3]。大腸桿菌為革蘭陰性無芽孢的直桿菌，大小? ? ? ? 0.4-0.7 μm×2-3 μm，兩端鈍圓，散在或成對 [4]。

為了更好地預防和控制仔豬腹瀉大腸桿菌病，通過更有效的措施殺滅仔豬腹瀉大腸桿菌，本試驗分別將仔豬腹瀉大腸桿菌在不同物理因素、化學因素、抗生素條件下進行培養，通過生長情況對仔豬腹瀉大腸桿菌的生長特性進行研究，了解該菌的抵抗力。

1? 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細菌菌種

大腸桿菌分離自南京某豬場20日齡腹瀉仔豬的糞便，凍干保存。取凍干菌種接種到SS瓊脂平板上進行培養，挑取典型菌落接種到5 mL無菌營養肉湯中，置于37 ℃恒溫培養箱中培養24 h后待檢測。

1.1.2 培養基

SS瓊脂培養基、營養肉湯由本校獸醫微生物實驗室自行配制。

1.1.3 試劑

濃鹽酸、3％新潔爾滅、40％甲醛、無水乙醇、復合碘（含碘1％）、鏈霉素、慶大霉素、頭孢曲松、頭孢噻呋、氯化鈉等試劑。

1.2 方法

1.2.1 物理因素對仔豬腹瀉大腸桿菌生長的影響

取5支裝有5 mL滅菌營養肉湯的試管，編號1～5，分別接種10 μL仔豬腹瀉大腸桿菌菌液。然后分別放于溫度為33 ℃、35 ℃、37 ℃、39 ℃、41 ℃的恒溫培養箱內培養24 h后取出，用分光光度計檢測上述各試管的透光率并記錄。其他物理因素如pH、滲透壓和培養時間操作方法與上述溫度操作相同。

1.2.2 化學因素對仔豬腹瀉大腸桿菌生長的影響

取7支100 mL的無菌的三角燒瓶，編號1～7。用滅菌營養肉湯在三角燒瓶中依次配制成乙醇濃度為0.001％、0.01％、0.1％、1％、5％、10％、50％的營養肉湯。然后分別移取三角燒瓶中5 mL溶液至7支無菌試管中并編號1～7，分別接種10 μL仔豬腹瀉大腸桿菌菌液，然后將7支試管放于37 ℃恒溫培養箱中培養24 h后取出，用分光光度計分別檢測上述各試管的透光率并記錄。其他化學因素如甲醛、新潔爾滅和復合碘操作與上述乙醇操作相同。

1.2.3 抗生素對仔豬腹瀉大腸桿菌生長的影響

取5支100 mL的潔凈滅菌的三角燒瓶，編號1～5。用滅菌營養肉湯在三角燒瓶中依次配制成鏈霉素濃度為0.1 μg/mL、1 μg/mL、10 μg/mL、? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?100 μg/mL、1 000 μg/mL。分別移取三角燒瓶中5 mL溶液至7支無菌試管中并編號1～5，并各接種10 μL仔豬腹瀉大腸桿菌菌液，然后將5支試管放于37 ℃恒溫培養箱中培養24 h后取出，用分光光度計檢測各試管的透光率并記錄。其他抗生素如慶大霉素、頭孢曲松和頭孢噻呋操作與上述鏈霉素操作相同。

2? 結果與分析

2.1 物理因素對仔豬腹瀉大腸桿菌生長的影響

2.1.1 溫度對仔豬腹瀉大腸桿菌生長的影響

通過表1可以看出，在不同溫度下，透光率各不相同，33～37 ℃透光率不斷下降，表明試管內大腸桿菌大量生長繁殖，即33～37 ℃利于大腸桿菌的生長；37～41 ℃時，透光率上升，表明大腸桿菌數量減少，即溫度太高不利于大腸桿菌的生長。

2.1.2 pH對仔豬腹瀉大腸桿菌生長的影響

通過表2可以看出，pH 4～5以及pH 9～10時試管的透光率接近于100％，說明仔豬腹瀉大腸桿菌在強酸、強堿條件下生長繁殖差，對強酸、強堿敏感；pH 5～7時，透光率越來越低，說明該菌生長繁殖變旺盛，試管內大腸桿菌數量變多；pH 7～9時，透光率越來越高，說明仔豬腹瀉大腸桿菌生長繁殖能力變弱。

2.1.3 滲透壓對仔豬腹瀉大腸桿菌生長的影響

通過表3可以看出，滲透壓越高，透光率越高，即細菌數量越少；滲透壓越低，透光率越低，即細菌繁殖數量越大。

2.1.4 培養時間對仔豬腹瀉大腸桿菌生長的影響

通過表4可以看出，隨著培養時間的增加，透光率越來越低，且3～6 h變化明顯，說明細菌生長繁殖數量越來越多。6～24 h變化不明顯。

2.2 化學因素對仔豬腹瀉大腸桿菌生長的影響

2.2.1 乙醇對仔豬腹瀉大腸桿菌生長的影響

通過表5可以看出，乙醇濃度為5％～50％時，變化不明顯且透光率接近100％，即不利于大腸桿菌生長；濃度為1％～5％時透光率變化劇烈；濃度為0.001％～1％時透光率變化不明顯。

2.2.2 甲醛對仔豬腹瀉大腸桿菌生長的影響

通過表6可以看出，甲醛濃度為0.01％～1％時，透光率變化不明顯且較高，即不利于仔豬腹瀉大腸桿菌的生長；濃度為0.001％～0.01％時透光率變化趨勢較大；濃度為0.000 1％～0.001％時，透光率變化不明顯，且透光率較低，即大腸桿菌生長旺盛。

2.2.3 新潔爾滅對仔豬腹瀉大腸桿菌生長的影響

通過表7可以看出，隨著新潔爾滅濃度逐步升高，透光率也逐步升高，即仔豬腹瀉大腸桿菌生長繁殖數量越來越少。

2.2.4 復合碘對仔豬腹瀉大腸桿菌生長的影響

通過表8可以看出，復合碘濃度為0.1％～0.5％時，透光率較高，且變化不明顯，即仔豬腹瀉大腸桿菌生長較差；濃度為0.01％～0.1％時，透光率變化明顯，變化趨勢大；濃度為0.001％～0.01％時，透光率變化不明顯，且透光率較低，說明大腸桿菌生長旺盛。

2.3 抗生素對仔豬腹瀉大腸桿菌生長的影響

2.3.1 鏈霉素對仔豬腹瀉大腸桿菌生長的影響

通過表9可以看出，隨著鏈霉素濃度的升高，透光率升高，即大腸桿菌生長繁殖能力變差。

2.3.2 慶大霉素對仔豬腹瀉大腸桿菌生長的影響

通過表10可以看出，慶大霉素濃度在10～1 000 μg/mL時，透光率變化不大， 接近100％；濃度為1～10 μg/mL時，透光率變化趨勢大；濃度為0.1～1 μg/mL時，透光率變化不大，且透光率較低。

2.3.3 頭孢曲松對仔豬腹瀉大腸桿菌生長的影響

通過表11可以看出，頭孢曲松濃度在30～3 000 μg/mL時，透光率變化不大，接近100％，說明該濃度的抗生素對大腸桿菌生長有抑制作用；濃度為3～30 μg/mL時，透光率變化趨勢大；濃度為0.3～3 μg/mL時，透光率變化不大，且透光率較低。

2.3.4 頭孢噻呋對仔豬腹瀉大腸桿菌生長的影響

通過表12可以看出，總體上隨著頭孢噻呋濃度的升高，透光率升高，即大腸桿菌生長繁殖數量變少。試驗結果表明，頭孢噻呋的濃度為30～3 000 μg/mL時能對大腸桿菌的生長繁殖形成有效抑制，濃度為0.3～3 μg/mL時也對大腸桿菌的繁殖起到一定的抑制作用。

3? 討論

3.1 物理因素

本試驗結果表明，仔豬腹瀉大腸桿菌在37 ℃左右生長最旺盛，溫度過高、過低都不利于生長。在pH為7時生長最旺盛，其他酸堿度下大腸桿菌的生長繁殖能力都變弱，強酸、強堿條件下不能生長。黃飛羽[5]等發現pH對腸桿菌科的肺炎克雷伯菌的生長影響較大，且pH為7.2時細菌生長繁殖最旺盛。我們的試驗結果與黃飛羽等的研究結果一致。王立超[6]等通過研究溫度、光照和pH對光合細菌生長的影響發現，光合細菌生長的最適pH為7.0，這與我們的試驗結果也相符。本試驗結果表明，隨著滲透壓增高，仔豬腹瀉大腸桿菌生長繁殖也呈明顯的下降趨勢；培養時間越長，大腸桿菌繁殖越多，0～6 h時繁殖速度較快，6 h后生長繁殖趨勢降低。因此防控仔豬腹瀉大腸桿菌病時，可采用高溫、強酸、強堿殺滅環境中的致病性仔豬腹瀉大腸桿菌。

3.2 化學因素

本試驗結果表明，乙醇濃度介于5％～50％時能有效抑制仔豬腹瀉大腸桿菌的生長，濃度低于1％時僅能輕微抑制大腸桿菌的生長繁殖。王慧琴[7]等通過改變物理、化學因素觀察對細菌生長的影響，發現乙醇根本不能抑制細菌生長，這與我們的研究結果不同，但她沒有說明乙醇的濃度。本試驗結果表明，甲醛在濃度為0.01％～1％時能有效抑制仔豬腹瀉大腸桿菌的生長，透光率接近100％；濃度低于0.001％時僅能輕微抑制大腸桿菌的生長繁殖。朱國霞[8]等采用4種殺菌消毒劑來觀察對硝化細菌生長的影響，發現加入甲醛24 h后對硝化細菌具有一定的抑制作用，這與我們的試驗結果一致。本試驗結果表明，復合碘在濃度為0.5％時可有效抑制仔豬腹瀉大腸桿菌的生長，李偉英[9]等證明消毒劑氯可有效滅活并抑制細菌的生長，這也與我們的試驗結果相符。臨床防控時可采用濃度為5％～50％的乙醇溶液、0.01％～0.1％的甲醛溶液、0.5％的復合碘溶液來抑制和殺滅仔豬腹瀉大腸桿菌的生長繁殖。

3.3 抗生素

本試驗結果表明，鏈霉素在濃度為0.1～? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?1 000 μg/mL時僅能輕微抑制仔豬腹瀉大腸桿菌的生長。慶大霉素在濃度為10～1 000 μg/mL時能有效抑制仔豬腹瀉大腸桿菌的生長繁殖。頭孢曲松在含量為300～3 000 μg/mL時能有效抑制仔豬腹瀉大腸桿菌的生長繁殖。頭孢噻呋在濃度為30～3 000 μg/mL時能有效抑制仔豬腹瀉大腸桿菌的生長繁殖，濃度為0.3～ 3 μg/mL時能抑制大部分細菌生長繁殖。本試驗結果表明可采用10～1 000 μg/mL的慶大霉素、300～3 000 μg/mL的頭孢曲松、30～3 000 μg/mL的頭孢噻呋來治療仔豬腹瀉大腸桿菌病，同時要注意輪換用藥和不要隨便停藥[10]。

參考文獻

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