產(chǎn)前基因檢測(cè)在同型地中海貧血基因攜帶者中應(yīng)用價(jià)值分析

黎雪華，董錦蓮，周偉敏

高州市婦幼保健院婦保科，廣東 高州 525200

地中海貧血（簡(jiǎn)稱地貧）屬于一種慢性溶血性疾病，由珠蛋白合成障礙所致，是常見(jiàn)的單基因遺傳病。地貧患者臨床癥狀輕重不一，患者可能無(wú)癥狀表現(xiàn)，也可能會(huì)造成嚴(yán)重貧血，對(duì)患者的內(nèi)分泌系統(tǒng)及肝臟、心臟等進(jìn)行損害［1］。依據(jù)珠蛋白受損程度，可分為α-地貧、β-地貧兩種，其中重型α-地貧在宮內(nèi)便會(huì)由于嚴(yán)重貧血導(dǎo)致胎兒水腫，造成死胎、流產(chǎn)或出生后不久死亡［2］。重型β-地貧于出生后3～6個(gè)月發(fā)病，多數(shù)在5歲前死亡，即使存活也需要定期進(jìn)行輸血治療［3-4］。地貧的發(fā)生會(huì)給患者家庭及社會(huì)帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，增加患者心理負(fù)擔(dān)，已經(jīng)成為我國(guó)一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題，妊娠合并地貧可能會(huì)增加低出生體重、早產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局。目前地貧尚無(wú)根治性方法，故對(duì)同型地貧基因攜帶者夫婦進(jìn)行產(chǎn)前診斷，這對(duì)預(yù)防重型地貧患兒的出生、提高人口質(zhì)量具有重要影響［5］。鑒于此，本研究將分析產(chǎn)前基因檢測(cè)在同型地貧基因攜帶者中應(yīng)用價(jià)值，為預(yù)防地貧提供科學(xué)依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019年4月—2021年4月高州市婦幼保健院進(jìn)行優(yōu)生優(yōu)育咨詢或產(chǎn)生檢查的孕婦及配偶，采用血常規(guī)、血紅蛋白電泳進(jìn)行篩查，針對(duì)98對(duì)疑似為陽(yáng)性地貧基因攜帶者夫婦進(jìn)行基因診斷，其中78對(duì)夫婦雙方均為α-地貧基因攜帶者，16對(duì)均為β-地貧基因攜帶者，4對(duì)為復(fù)合α、β-地貧基因攜帶者。孕婦年齡20～43歲，平均年齡（29.74±2.06）歲；孕周11～26周，平均孕周（17.13±1.15）周；體質(zhì)量指數(shù)（BMI）18.2～30.5 kg/m2，平均BMI（25.81±2.03）kg/m2；受教育年限2～17年，平均受教育年限（11.03±2.59）年。本研究獲醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①夫婦雙方簽署知情同意書(shū)。②夫婦為同型地中海貧血。③孕婦均為單胎妊娠。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并貧血、心臟病、高血壓、糖尿病等疾病。②行為異常，患有精神疾病，或認(rèn)知功能、言語(yǔ)功能障礙，無(wú)法積極配合臨床診治。

1.3 方法

1.3.1 樣本采集采用乙二胺四乙酸二鉀采血管（規(guī)格為3mL），負(fù)壓抽取丈夫前臂靜脈血2mL×1管，共計(jì)2mL，保存于-80℃冰箱備用；同時(shí)在孕婦抽取羊水前，采用乙二胺四乙酸二鉀采血管從孕婦前臂負(fù)壓抽取2mL；同時(shí)對(duì)羊水進(jìn)行抽取20 m L，以對(duì)基因進(jìn)行檢測(cè)，并分析胎兒染色體核型。

1.3.2 基因檢測(cè)外周血基因組的提取采用全自動(dòng)核酸提取儀（Lab-Aid824型，廈門致善生物科技股份有限公司提供），依據(jù)DNA提取試劑盒（廣東凱普生物科技股份有限公司提供）說(shuō)明書(shū)進(jìn)行羊水基因組提取；α-地貧缺失型、α-地貧突變型和β-地貧基因檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自深圳亞能生物技術(shù)有限公司，α-地貧基因診斷：采用單管多重Gap-PCR技術(shù)對(duì)α-珠蛋白基因缺失型--、-α3.7、-α4.2、--THAI進(jìn)行檢測(cè)；采用聚合酶鏈反應(yīng)—反向斑點(diǎn)雜交法（PCR-RDB）技術(shù)測(cè)定α-珠蛋白基因突變型αCS、αQS、αWS；β-地貧基因診斷：采用PCR-RDB技術(shù)檢測(cè)我國(guó)常見(jiàn)的17種β-珠蛋白基因突變型。

1.4 評(píng)價(jià)指標(biāo)

分析基因檢測(cè)結(jié)果及胎兒染色體核型結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 分析基因檢測(cè)結(jié)果

78對(duì)α-地貧基因攜帶者基因檢測(cè)中-SEA/αα占比最高為38.46%，--SEA/--SEA占比次之為16.67%；16對(duì)β-地貧基因攜帶者基因檢測(cè)中CD17（A→T）/N占比最高為25.00%，CD17（A→T）/CD17（A→T）、CD26（GAG＞AAG）/N、N/N占比次之，均為12.50%；4對(duì)復(fù)合α-、β-地貧基因攜帶者中重型、中間型各1例，輕型2例，見(jiàn)表1、表2、表3。

表1 78對(duì)α-地貧基因攜帶者基因檢測(cè)結(jié)果

表2 16對(duì)β-地貧基因攜帶者基因檢測(cè)結(jié)果

表3 4對(duì)復(fù)合α-、β-地貧基因攜帶者基因檢測(cè)結(jié)果

2.2 分析胎兒染色體核型

98例胎兒染色體核型分析結(jié)果顯示有11例染色體正常變異，1例add（13）（p13），86例46，XN；98對(duì)夫婦均進(jìn)行優(yōu)生遺傳咨詢，其中18例重型地貧患兒均進(jìn)行引產(chǎn)。

3 討論

地貧在地中海地區(qū)國(guó)家，諸如土耳其、意大利及希臘等，較為常見(jiàn)。在我國(guó)，地貧是長(zhǎng)江以南的地區(qū)較為常見(jiàn)的遺傳病，地貧基因攜帶者約占世界人口總數(shù)的4.8%，已成為危害人類健康的常見(jiàn)溶血性疾病。地貧作為常見(jiàn)的遺傳性溶血性貧血病，近年來(lái)地貧發(fā)生率不斷上升，已成為影響人類健康的重要原因。地貧可分為α型、β型兩種，依據(jù)臨床癥狀及其基因型可分為重型、中間型及輕型，其中重型地貧為致死性疾病，重型地貧患兒的出生會(huì)給家庭帶來(lái)嚴(yán)重的精神負(fù)擔(dān)及經(jīng)濟(jì)壓力，對(duì)人口質(zhì)量構(gòu)成嚴(yán)重威脅［6］。同時(shí)重型地貧缺乏有效治療方法，故于產(chǎn)前診斷，并選擇性終止妊娠以減少重型地貧患兒的出生，為防控地貧的重點(diǎn)所在［7-8］。輕型地貧患者無(wú)典型臨床表現(xiàn)，僅需定期復(fù)查及密切觀察即可，對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育、智力及壽命無(wú)明顯影響。中間型地貧患者貧血程度不一，包括中間型β-地貧、血紅蛋白H病，治療方法較多［9］。

地貧屬于常染色體隱性遺傳病，其遺傳方式符合孟德?tīng)柖桑驄D雙方同為地貧基因攜帶者，則生育重型地貧患兒的概率約為25%，若一方為地貧基因攜帶者，則生育子女成為地貧基因攜帶者概率約為50%［10-11］。本研究結(jié)果顯示，同型地貧基因攜帶者中α-、β-地貧基因型分別以--SEA、CD17（A→T）為主，且重型地貧具有較高的檢出率，同時(shí)在對(duì)同型地中海貧血基因攜帶者進(jìn)行基因檢測(cè)的同時(shí)，需要對(duì)有無(wú)其他遺傳病進(jìn)行觀察。目前針對(duì)進(jìn)行優(yōu)生優(yōu)育咨詢或產(chǎn)生檢查的孕婦及配偶，首先通過(guò)血常規(guī)、血紅蛋白電泳進(jìn)行地貧篩查，針對(duì)疑似為陽(yáng)性地貧基因攜帶者需要進(jìn)行基因診斷，診斷為同型地貧攜帶者的夫婦可在臨床醫(yī)生指導(dǎo)下進(jìn)行產(chǎn)前診斷及遺傳咨詢，以避免重型地貧患兒的出生。妊娠合并地貧極易導(dǎo)致低出生體重低或早產(chǎn)的發(fā)生，中重型地貧胎兒極易出現(xiàn)貧血，導(dǎo)致胎兒宮內(nèi)缺氧、宮內(nèi)窘迫，增加低體重患兒的發(fā)生，增加剖宮產(chǎn)率［12-13］。攜帶者篩查、基因診斷、遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷是預(yù)防重型地貧的有效措施。臨床上需要加強(qiáng)對(duì)地貧孕婦的健康教育，促使孕婦能夠深入了解并正確認(rèn)識(shí)地貧對(duì)妊娠結(jié)局的不良影響，促使孕婦圍產(chǎn)保健意識(shí)得以提高，提高胎兒地貧產(chǎn)前診斷的依從性。產(chǎn)前診斷是實(shí)現(xiàn)地貧預(yù)防目標(biāo)的最后屏障，開(kāi)展地貧產(chǎn)前篩查及診斷對(duì)減輕家庭及社會(huì)負(fù)擔(dān)、提高人口素質(zhì)具有重要作用，尤其需要重視對(duì)重型地貧的產(chǎn)前診斷，在發(fā)現(xiàn)重型地貧胎兒時(shí)，需要對(duì)孕婦及其家屬做好相關(guān)遺傳指導(dǎo)，基于孕婦及其家屬知情與自愿原則，對(duì)重型地貧胎兒采取干預(yù)措施［14-15］。但本次研究中納入樣本量小，且未對(duì)妊娠結(jié)局及新生兒指標(biāo)進(jìn)行分析，可能會(huì)對(duì)研究結(jié)果準(zhǔn)確性造成一定影響，還有待臨床深入分析研究，以進(jìn)一步分析產(chǎn)前基因檢測(cè)在同型地中海貧血基因攜帶者中應(yīng)用價(jià)值，為同型地中海貧血基因攜帶者的產(chǎn)前診斷工作的實(shí)施及圍生期保健提供確切參考，為提升地貧的防治水平助力。

綜上所述，在同型地貧基因攜帶者中進(jìn)行產(chǎn)前基因檢測(cè)能夠防止重型地貧患兒的出生，其中α、β-地貧基因型分別以--SEA、CD17（A→T）為主，需要依據(jù)產(chǎn)前基因檢測(cè)結(jié)果為孕婦及其家屬提供有效的遺傳咨詢。