2020—2022 年臨沂市河東區雞新城疫免疫抗體監測與分析

王秀英

(臨沂市河東區畜牧發展促進中心，山東臨沂 276000）

新城疫(Infection with Newcastledisease virus，newcastle disease，ND)，俗稱“雞瘟”，是由新城疫病毒引起禽的一種急性、敗血性、高度接觸性傳染病。該病主要以高熱、呼吸困難、神經紊亂、下痢、黏膜和漿膜出血為特征，具有較高的發病率和死亡率，是危害養禽業的主要傳染病之一。新城疫一年四季均可發生，春秋季發病率相對較高，且感染不分日齡，各年齡段的雞均易感。該病傳播速度快，雞場內一旦發生本病，可于4～5d 內波及全群，嚴重威脅雞群健康，造成巨大的經濟損失。國家新城疫防治指導意見(2017—2020 年）規定，各地要繼續對雞實施全面免疫，根據當地實際和監測情況對其他家禽開展免疫，及時制定實施新城疫免疫方案，做好免疫效果評價。

1 材料與方法

1.1 實驗樣品

2020—2022 年從河東區各街道鄉鎮(芝麻墩街道、梅家埠街道、相公街道、太平街道、湯頭街道、鳳凰嶺街道、朝陽街道、八湖鎮、湯河鎮、鄭旺鎮）等縣區采集樣品中，選取采樣記錄完整、分類清楚的樣品，共計2135 份。樣品采集方法是采用雞翅下靜脈采血，室溫靜置自然凝固后，再經1800r/min 離心5～8min，分離血清得到。

1.2 實驗儀器

恒溫培養箱、分析天平、高壓滅菌器、超純水機、燒杯、量筒、玻璃棒、96 孔血凝板、冰箱、離心機、微量振蕩器、微量移液器 (20～100μL）、8 道微量移液器(20～100μL）、微量吸頭(200μL、1mL）、一次性注射器、一次性手套、加液槽等。

1.3 實驗用試劑的配制備

PBS 緩沖液的配制：稱取NaCl 8g、Na2HPO43.582g、NaH2PO41.561g，加超純水定容至1000mL，然后調節pH 值至7.2，備用。

1%雞紅細胞懸液的制備：無菌取3.8%的枸櫞酸鈉溶液，從非免疫雞翅下靜脈無菌采血，然后用適量的PBS 緩沖液稀釋后以3000r/min 離心5～10min，棄去上清液，按上述方法重復洗滌三次，然后用PBS 緩沖液配制成1%的紅細胞懸液，備用[1]。1%紅細胞制備好后，置于2～8℃冰箱保存，使用時充分混勻。

雞新城疫血凝抑制試驗抗原：抗原規格為2.0mL/瓶，試驗時將使用劑量的抗原無菌吸出現配現用，使用抗原專用稀釋液稀釋，剩余抗原放回冰箱保存。

1.4 實驗方法

1.4.1 檢驗依據

按照農業部《新城疫診斷技術規范》 (GB/T 16550-2020）所規定方法進行[2]。

1.4.2 檢測方法

血凝(HA）試驗：在96 孔V 型微量反應板中，每孔加入25μL PBS 緩沖液，為了準確起見，做兩排重復孔。第1 孔加入25μL 配制好的抗原，依次做25μL 倍比稀釋至第11 孔棄去(如此抗原的稀釋倍數分別為21、22、23……211），第12 孔不加抗原為紅細胞對照；每孔依次加入25μL PBS 緩沖液；然后每孔加入25 μL 1% (V/V）雞紅細胞懸液，微量振蕩1min 混合均勻，室溫下靜置30min，觀察記錄結果。

結果判斷方法，將96 孔板傾斜45° 觀察，觀察到沿著傾斜面向下呈線狀流動的為紅細胞沉淀，表示紅細胞未被病毒凝集或者未完全被病毒凝集；如果傾斜后紅細胞不流動，平鋪在孔底凝成均勻薄層，說明紅細胞被病毒凝集，做好試驗結果記錄。

血凝試驗：首先配制4 單位抗原，4 單位抗原即一個血凝單位的稀釋度的4 倍濃度。以能完全凝集的抗原最高稀釋倍數作為終點，該倍數除以4 即為含有4 單位的抗原稀釋倍數。按該倍數用抗原專用稀釋液稀釋，抗原現配現用。

對抗原每孔加入25 μL PBS 緩沖液：第1 孔加入25 μL 血清，再反應板中將血清作橫向倍比稀釋至第10 孔(如此血清的稀釋倍數分別為21、22、23……210），第11 孔與12 孔空白；第1～10孔分和12 孔別加入25 μL 的4 單位抗原，11 孔不加作為紅細胞沉淀對照孔；混勻后室溫下靜置20min；每孔加入25 μL 1% (V/V）雞紅細胞懸液，混勻后室溫下靜置30min。當對照組的紅細胞出現較為明顯形狀時即可進行結果判斷。

1.4.3 試驗結果判定

能夠使4 單位抗原凝集雞紅細胞的作用完全被抑制的血清最高稀釋倍數，稱為該血清的抗體效價，以2 的指數表示。第11 孔不含抗原，為紅細胞對照，第12 孔不含血清為抗原對照。結果判定，第11 孔紅細胞對照孔全部沉降，第12孔抗原對照孔全部凝集，該試驗成立。被檢雞血清HI 效價≤1∶4 判為陰性；血凝≥1∶16 時判為陽性，抗體合格；血凝=1∶8 時，認為可疑，需要重檢一次。

2 結果與分析

河東區2020—2022 年新城疫免疫抗體檢測結果顯示，2020—2022 年合格率分別為88.71%、91.04%、94.99%，平均合格率為91.66% (見表1）。其中2020 年最低為88.71%，但也超過了國家農業部規定的70%的標準。分析上述數據可見，通過每年春秋兩次全面免疫，河東區新城疫抗體趨于穩定，合格率超出了國家標準，總體來說免疫效果可以，并有逐年升高的趨勢。

表1 2020—2022 年河東區新城疫免疫抗體合格率

2020—2022 年春、秋季節的血清樣品進行檢測對比，其中春季樣品786 份，秋季樣品922份，共計1708 份。由表1 可知，從2020—2022年春季抗體合格率分別為92.07%、92.30%、95.97%，平均合格率為93.51%。由表1 可知，秋季抗體合格率分別為89.54%、90.74%、92.84%，平均合格率為91.11%。分析以上數據可知，被檢春季和秋季樣品數量不同，合格數也有差別，但是雞群春季免疫抗體平均合格率差異不明顯，均達到了90%以上的水平，春季略高于秋季。

2020—2022 年共采集血清樣品2135 份，涉及規模場12 個，樣品數為1537 份，散養戶23戶，樣品數為598 份。由表1 可知，規模場新城疫免疫抗體合格率為95.71%，散養戶抗體合格率較低為81.27%，規模場和散養場平均抗體合格率為91.66%。散養戶合格率相對規模場較低，平均合格率低14.5%。由此可見，規模場對新城疫的免疫足夠重視，免疫效果較好，散養戶需要規范新城疫免疫程序，加強免疫，進一步提高雞群對新城疫病毒的抵抗能力，避免疾病的暴發。

由表1 可知，2020—2022 年種雞場抗體合格率處于較高的水平，分別為98.10%、98.89%、99.24%，平均合格率為98.78%。由此可見，河東區種雞場新城疫免疫抗體處于較高的水平，基本做到了免疫無疫。

3 討論

通過分析檢測數據可以發現，雖然各養殖場、各散養戶經過新城疫疫苗免疫，雖然雞群的抗體合格率處于較高水平，但仍然存在少量抗體較低的個體，從而導致免疫失敗的現象發生，這也增加了新城疫暴發的風險。分析原因可能由以下幾種：第一，雛雞的母源抗體的影響，由于種雞的免疫抗體水平存在個體差異，從而新孵出的雛雞的母源抗體水平也有高有低。母源抗體高的雛雞進行新城疫首免時，會被母源抗體中和掉，不能產生有效的免疫應答。母源抗體低的雛雞，又按照常規來進行首免，那么在收到強度侵入時，可能導致新城疫疫情的發生[3,4]。第二，疫苗保存和運輸存在問題。有的防疫員在預防注射的過程中無冷藏設備，部分養殖戶沒有按要求注射，造成疫苗效價降低或者失效。另外可能免疫接種時，注射劑量不足，免疫密度偏低，或不按免疫程序免疫，都會造成免疫失敗[5]。第三，免疫抑制問題，雞場中非傳染性因素和傳染性因素(一些免疫抑制病的影響如：雞傳染性法氏囊病、雞馬立克氏病、雞傳染性貧血、禽白血病以及網狀內皮細胞增殖癥等）都會對新城疫的免疫形成免疫抑制。另外應激因素、日糧中缺乏某種維生素，飼料中霉菌毒素含量高等多種因素也可導致免疫抑制[6]。

此外，從業者的飼養管理水平、飼養密度、衛生條件、消毒頻次及飼料的質量等都會影響雞群的健康以及機體的免疫功能，從而造成機體的抗體水平和抗體持續時間不均勻。當新城疫病毒侵襲時，一般抗體水平低的雞會先發病，隨后在較短時間內傳播給其他雞群。

4 改進措施

目前評價新城疫疫苗免疫效果的重要依據仍然是抗體水平的監測，抗體滴度是指導疫病防治工作的重要指標。結合本次調查分析結果，河東區養雞業新城疫的防控應該采取以下措施：首先提高從業者的綜合素質以及對新城疫病毒的深入了解，讓廣大養殖場戶深刻的認識到新城疫病毒防控的緊迫性及持續做好流行病學調查與抗體水平監測等工作的重要性。提高養殖場的應急處置能力，從而把風險和損失降至最低。其次，要制定科學規范的免疫程序，根據抗體水平監測結果及時更新和調整相應的免疫程序，盡可能提高疫苗的免疫效果。最后，加強飼養管理，飼料補給方面，以滿足長勢營養需求為主，注意補充硒元素和各種維生素，確保不同階段的雞的營養需求。同時要注意飼養環境的管理，加強通風管理，確保舍內空氣清潔衛生，注意防控各類不良應急，可嘗試用電解多維等，達到抗應激的目的[7]。另外，規模雞場盡量做到全進全出，對于雞場新城疫防控來說也是一項十分有效的舉措。

5 小結

通過對2020—2022 年河東區雞新城疫免疫抗體合格率、不同高發季節抗體合格率、規模場和散養戶以及種雞場的免疫抗體水平監測及分析來看，養雞場戶經過每年春秋兩次新城疫的全面免疫，免疫抗體合格率雖有高有低，但基本處于較高水平，超過了國家農業部規定的70%以上的標準[8]。另外從規模場和散養戶的對比數據來看，規模場抗體合格率高出散養場14.5%，可見規模場免疫工作做得更加細致到位，散養戶雖然養殖條件方面相對差，但也應該強化思想認識，做到規范免疫，盡量提高抗風險能力。從河東區種雞場抗體合格率來看三年來穩定在98%以上，基本做到了免疫無疫。