大麥茶中總黃酮提取方法的對比研究

梁喜玲，申艷華，劉 忭，康 婕

（1. 陜西省產品質量監督檢驗研究院，陜西 西安 710048；2. 潞安職業技術學院，山西 長治 046204）

0 引言

大麥，別名牟麥、飯麥、赤膊麥，營養成分較為豐富，與小麥近似，但膳食纖維含量較高。禾本科，也是我國主要種植物之一，在我國的種植資源十分豐富, 大麥的用途相當廣泛，可作為糧食工業和食品工業的重要原料[1]，然而相對于其他國家，我國對大麥的研究還十分薄弱，現代研究表明，大麥含有大麥芽堿、黃酮、多糖、多酚類化合物等多種活性成分[1]。大麥中黃酮類化合物的開發和利用，也日益引起廣泛的關注。黃酮類化合物，是一大類天然產物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分[2]，因其具有獨特的化學結構而對人體產生重要的生理、生化作用，有較明顯的保健功能。因此，黃酮類化合物在醫藥、食品領域具有較大的應用價值，其開發和利用也日益引起廣泛關注。

有關大麥茶中黃酮類物質的相關研究報道相對較少，季晨忻等人[3]報道過關于大麥茶總黃酮提取的最佳條件。研究不同的提取方法[4]中大麥總黃酮提取量的差異，確定適合于提取大麥總黃酮的可行性方法，為其開發利用提供參考依據。

1 試劑與儀器

1.1 樣本、試劑及儀器與設備

樣本為安徽亳州地區產的大麥，購自當地市場，稱取200 g 粉碎，過60 目篩得到測試試樣；試驗方法中所涉及到的常規試劑，均為分析純。

電熱恒溫水浴鍋、ATL-224 型電子天平、T9CS 型紫外-可見分光光度計、KQ-500E 型超聲波振蕩器、各類玻璃儀器等。

1.2 樣本的提取方法

1.2.1 乙醇回流法

稱取1.00 g 大麥茶粉加入70%的乙醇溶液30 mL，在80 ℃下回流提取總黃酮1 h，減壓抽濾。重復抽提3 次，將濾液合并蒸餾濃縮，用體積分數為70%的乙醇溶液定容于25 mL 容量瓶中，得到提取液。

1.2.2 甲醇超聲波提取法

稱取1.00 g 大麥茶粉加入體積分數為70%的甲醇溶液30 mL，在超聲波振蕩器中振搖1 h 減壓抽濾。重復抽提3 次，濾液合并蒸餾濃縮，用體積分數為70%的乙醇溶液定容于25 mL 的容量瓶中，得到提取液。

1.2.3 酸堿溶液提取法

稱取1.00 g 大麥茶粉加入100 mL 蒸餾水煮至沸騰，邊攪拌邊緩慢滴加氫氧化鈣水溶液調節體系的pH 值為8～9，微沸0.5 h 左右，趁熱抽濾。濾渣重復上述操作2 次，合并濾液，在65±5 ℃下用鹽酸溶液調節pH 值為5.0，靜置24 h 后過濾。將濾渣和濾紙一同放入燒杯中，加入體積分數為70%的乙醇溶液30 mL 靜置3 h，抽濾，將濾液濃縮，用體積分數為70%的乙醇溶液定容至25 mL 容量瓶中，得到提取液。

1.2.4 熱水提取法

稱取樣本1.00 g 于玻璃容器中，加入100 mL 蒸餾水，在95 ℃下用水浴恒溫振蕩器浸提6 h，抽濾，加熱蒸餾濃縮，用體積分數為70%的乙醇溶液定容至25 mL 容量瓶中，得到提取液。

1.3 加標回收率試驗

以酸堿溶液提取法中的樣本為對象研究加標回收率試驗，在已測得總黃酮含量的基礎上，加入一定體積的蘆丁對照品儲備液（質量濃度為1 mg/mL），在相同的條件下同時測定樣本，加標樣本，將測定值與添加量進行比較，考查加標回收率的情況。

1.4 精密度試驗

以酸堿溶液提取法中的總黃酮含量作為研究對象，考查精密度試驗。4 組總黃酮抽提液在相同的條件下，按照標準曲線的方法測試其含量。

2 試驗方法

2.1 標準使用液的配制

稱取蘆丁對照品50 mg 置于50 mL 容量瓶中，加入體積分數為70%的乙醇溶液振搖溶解并定容，作為對照品儲備液。精密吸取10 mL 上述對照品儲備液，置于50 mL 容量瓶中，加入體積分數為70%的乙醇溶液，振搖溶解，定容至刻度，作為蘆丁對照品使用液。

2.2 標準曲線的制備

分別移取一定體積的使用溶液（0，1，2，3，4，5，6 mL） 置于25 mL 帶刻度的玻璃比色管中，加水定容至6 mL，各加入質量分數為5%的亞硝酸鈉溶液和質量分數為10%的硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，靜置6 min，然后加入氫氧化鈉溶液10 mL，加水定容搖勻靜置15 min。參照國標方法，將紫外-可見分光光度計的波長設定為510 nm 測定吸光度，標準曲線的橫坐標為質量濃度，縱坐標為吸光度，繪制標準曲線圖（見圖1），所擬合的標準曲線線性方程為Y= 0.325 8X-0.003 6（R2=0.999），線性良好，可以采用。

蘆丁溶液的標準曲線圖見圖1。

圖1 蘆丁溶液的標準曲線圖

2.3 樣本的測定

每種抽提方法平行做4 組，移取2 mL 提取液，完全參照標準曲線溶液的制備方法操作，然后測定吸光度，根據國標中的公式計算總黃酮的含量。

3 結果與分析

3.1 不同提取方法下大麥茶樣本總黃酮含量的測定結果

采用4 種不同的提取方法對大麥茶樣本中總黃酮的含量進行了測定，每種方法平行提取4 組，結果保留至小數點后2 位。

不同提取方法中大麥茶總黃酮提取含量見表1。

表1 不同提取方法中大麥茶總黃酮提取含量/ %

由表1 可知，不同提取方法提取大麥茶總黃酮含量排序為酸堿溶液提取法＞乙醇回流法＞甲醇超聲波提取法＞熱水浸提法；RSD 值均較小，表明重復性較好。

3.2 加標回收驗證試驗結果

加標回收率試驗見表2。

表2 加標回收率試驗

在表2 中，是酸堿溶液提取法中的第1 組樣本的加標回收試驗結果。由表2 可知，樣本的加標回收率較高，回收率結果為92.11%～96.01%，相對標準偏差為1.98%，值相對較小，由加標回收率試驗結果可看出，該方法可靠性和準確度均較高。

3.3 精密度試驗結果

精密度試驗結果見表3。

表3 精密度試驗結果

由表3 可知，對酸堿溶液提取法中的樣本測定4 次平行試驗的結果進行分析，總黃酮含量平均值為4.59 g/100 g，相對標準偏差為1.48%，在國標規定的范圍內，表明該方法的精密度較好，可以滿足檢測要求。

4 結論

通過對市售大麥茶中總黃酮的4 種提取方法的含量進行對比，發現乙醇回流法準確度與精密度較高，測定結果準確、可信，為最佳提取方法，平均含量為4.48 g/100 g，該操作方法簡單、提取含量高、耗時較短、溶劑乙醇無毒無害，對于總黃酮的提取具有實際參考價值。結果表明，大麥茶中總黃酮含量較為可觀，后期可以對乙醇回流提取法做進一步的優化，大麥總黃酮是一種值得去開發利用的植物資源。