肺癌患者M(jìn)ASP-2、NKG2D水平與病理生理特征的相關(guān)性

連竹霞，連竹生，孫嵐英

1. 河南省榮軍醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科（河南新鄉(xiāng) 453000）

2. 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腫瘤科（河南新鄉(xiāng) 453000）

肺癌是全球男性癌癥死亡的主要原因，也是女性癌癥死亡的第二大原因。我國2015 年的監(jiān)測數(shù)據(jù)顯示，肺癌發(fā)病率、死亡率分別達(dá)到 35.23/10萬、27.93/10 萬，5 年生存率僅16.1%[1]。提高肺癌5 年生存率的關(guān)鍵在于早發(fā)現(xiàn)、早診斷。傳統(tǒng)肺癌血清標(biāo)志物在監(jiān)測療效及評估預(yù)后方面有較大幫助，但是對早期肺癌及各期肺癌的總體診斷價值有限。補(bǔ)體系統(tǒng)是先天免疫系統(tǒng)的一部分，在調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫中起著重要作用，補(bǔ)體系統(tǒng)有三種激活途徑，其中甘露糖結(jié)合凝集素（mannanbinding lectin，MBL）途徑不依賴于抗體即可激活補(bǔ)體系統(tǒng)[2]。甘露糖結(jié)合凝集素相關(guān)絲氨酸蛋白酶（mannan-binding lectin associated serine proteases，MASP）為激活MBL 相關(guān)的絲氨酸蛋白酶，一旦與受體結(jié)合，MBL 就會募集MASP 并啟動補(bǔ)體激活[3]。補(bǔ)體系統(tǒng)十分復(fù)雜，它可以通過促進(jìn)炎癥和調(diào)節(jié)免疫抑制途徑來促進(jìn)多種癌癥的進(jìn)展。NKG2D 是表達(dá)于自然殺傷（natural killer，NK）細(xì)胞表面的主要激活受體，研究認(rèn)為NKG2D活性在早期腫瘤檢測起著重要作用，但隨著腫瘤的進(jìn)展其作用逐漸減弱[4]。目前MASP-2 和NKG2D 在肺癌中的臨床應(yīng)用價值尚缺乏研究，本研究旨在發(fā)掘MASP-2 和NKG2D 與肺癌的關(guān)系，以期為肺癌的早期診斷提供一定參考。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選擇2018 年8 月—2021 年4 月河南省榮軍醫(yī)院的104 例肺癌患者作為研究對象（肺癌組）、同期健康體檢者68 例作為對照（對照組）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)組織病理學(xué)明確診斷為肺癌；②尚未接受手術(shù)及放化療等治療；③無其它嚴(yán)重原發(fā)疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其它惡性腫瘤者；②臨床資料不全者；③患有精神疾病、意識不清晰，無法配合研究者；④孕婦、哺乳期婦女。本研究參與患者均知情同意，研究獲得河南省榮軍醫(yī)院審批通過（20210328）。

1.2 檢測方法

所有研究對象均抽取清晨空腹肘靜脈血5 mL，分作兩份，一份離心取上清液用ELISA 法檢測MASP-2。 使用550 型微孔酶標(biāo)儀（日本Bio-Rad 公司）于450 nm、630 nm 和450 nm 條件下讀取吸光度值，試劑盒來自美國Snata cruz 公司。另一份用EDTA-K2抗凝，用Ficoll-Hypaque密度離心法分離外周血單個核細(xì)胞，使用EPICS XL 流式細(xì)胞儀（美國BD 公司）檢測NK 細(xì)胞上的NKG2D，并用EXPO32ADCXL4 Color 軟件分析。

1.3 統(tǒng)計分析

采用SPSS 23.0 統(tǒng)計軟件，正態(tài)分布的計量資料以（±s）表示，采用獨立樣本t檢驗，非正態(tài)分布的計量資料以中位數(shù)和四分位數(shù)[M（P25，P75）]表示，采用非參數(shù)檢驗。計數(shù)資料以率表示，組間比較用χ2或Fisher 精確檢驗。繪制受試者工作特征曲線（ROC）分析各指標(biāo)對肺癌發(fā)生的預(yù)測效能，采用Logit 回歸模型分析MASP-2、NKG2D 與肺癌的相關(guān)性。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

納入的104 例肺癌患者中，男性61 例（58.65%）、女性43 例（41.35%），平均年齡（58.21±6.25）歲，平均腫瘤直徑（3.23±1.06）cm，組織類型以非小細(xì)胞肺癌為主（69.23%）。對照組中，男性40 例（58.82%）、女性28 例（41.18%），平均年齡（57.64±6.08）歲。肺癌組和對照組的一般資料詳見表1。

表1 納入研究對象的一般資料Table 1. Basic characteristics of included participants

2.2 MASP-2、NKG2D水平比較

肺癌組MASP-2 顯著高于對照組（424.55 vs.221.48，P＜0.001），但NKG2D 水平明顯低于對照組（74.42 vs. 84.23，P＜0.001）。Spearman等級相關(guān)分析顯示，MASP-2、NKG2D 水平在肺癌中呈中度相關(guān)（r=0.554，P＜0.05）。

2.3 不同特征患者 MASP-2、NKG2D水平比較

MASP-2 水平在非小細(xì)胞肺癌、Ⅲ-Ⅳ期、中高分化、有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者中明顯高于小細(xì)胞肺癌、Ⅰ-Ⅱ期、低分化、無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者（P＜0.05）。NKG2D 在Ⅲ-Ⅳ期、中高分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者中明顯低于Ⅰ-Ⅱ期、低分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者（P＜0.05），詳見表2。

表2 不同肺癌病理生理特征患者 MASP-2、NKG2D水平比較[M（P25，P75）]Table 2. Comparison of MASP-2 and NKG2D levels in patients with different pathophysiological characteristics of lung cancer[M（P25，P75）]

2.4 MASP-2、NKG2D對肺癌發(fā)生的預(yù)測效能

ROC 分析顯示，MASP-2 預(yù)測肺癌發(fā)生的曲線下面積（AUC）為0.648[95%CI（0.526，0.984），P=0.024）]，最 佳 診斷界 值 為416.24 ng/mL。NKG2D 預(yù)測肺癌發(fā)生的AUC 為0.628[95%CI（0.517，1.023），P=0.036]，最佳診斷界值為76.38 pg/mL。 將MASP-2、NKG2D 擬合成聯(lián)合指標(biāo)，以MASP-2、NKG2D 為自變量，肺癌是否發(fā)生作為因變量，進(jìn)行Logit 回歸分析，模型公式為Logit(P) =0.265+0.123×MASP-2+0.084×NKG2D，其中MASP-2 的回歸系數(shù)為0.123，并且呈現(xiàn)出0.05 水平的顯著性，意味著MASP-2 會對肺癌的發(fā)生與否產(chǎn)生顯著的正向關(guān)系，NKG2D 的回歸系數(shù)為0.084，并且也呈現(xiàn)出0.05 水平的顯著性，表明NKG2D會對肺癌的發(fā)生產(chǎn)生顯著正向關(guān)系。二者聯(lián)合預(yù)測肺癌發(fā)生的AUC 為0.723[95%CI（0.634，0.947），P=0.011]，聯(lián)合檢測時的敏感度和特異度均高于單一診斷，具體見表3。

表3 MASP-2、NKG2D及二者聯(lián)合診斷肺癌的診斷效能Table 3. Diagnostic efficacy of MASP-2, NKG2D and their combination in lung cancer diagnosis

3 討論

補(bǔ)體系統(tǒng)作為先天免疫反應(yīng)的重要組成部分，具有識別并呈遞抗原、連接先天免疫與適應(yīng)性免疫、免疫監(jiān)視、趨化炎癥細(xì)胞在炎癥部位聚集等復(fù)雜功能。該系統(tǒng)的關(guān)鍵成分是絲氨酸蛋白酶，它們通常以酶原形式存在于血液循環(huán)中，直到連續(xù)裂解和活化。補(bǔ)體激活可以通過三種不同但相互關(guān)聯(lián)的途徑觸發(fā)：經(jīng)典途徑、凝集素途徑和替代途徑，然后這三種途徑匯合為共同末端途徑。當(dāng)經(jīng)典或凝集素途徑被激活時，會形成C3轉(zhuǎn)化酶C4bC2a，它由補(bǔ)體因子C4 和C2 的裂解形式組成。凝集素途徑的激活第一個蛋白水解步驟是MASP-1 的自動激活，然后激活MASP-2。這2 種酶都可以切割C2，但C4 只能被MASP-2切割。因此，MASP-2 在C4bC2a 酶復(fù)合物的形成中起著重要作用[5-6]。以往多認(rèn)為補(bǔ)體系統(tǒng)具有抗腫瘤效應(yīng)，然而近10 年的研究卻表明補(bǔ)體系統(tǒng)激活對腫瘤生長和轉(zhuǎn)移具有促進(jìn)作用[4]。本研究結(jié)果顯示，肺癌患者血清MASP-2 水平較健康人群明顯提高，表明MASP-2 參與了肺癌的發(fā)生發(fā)展過程，與已有的研究結(jié)果相一致[7-9]。MASP-2與肺癌的一些病理生理特征具有相關(guān)性，TNM 分期越高、分化程度越好、有轉(zhuǎn)移的肺癌患者血清MASP-2 水平越高。在肺癌中非小細(xì)胞肺癌占絕大多數(shù)，小細(xì)胞肺癌相對少見，但卻具有侵襲性強(qiáng)、易早期轉(zhuǎn)移、易耐藥、易復(fù)發(fā)等特點。與非小細(xì)胞肺癌比較，小細(xì)胞肺癌患者的血清MASP-2 水平更低，這與小細(xì)胞肺癌的惡性特征有一致性。這提示MASP-2 在肺癌的發(fā)生、進(jìn)展中發(fā)揮重要作用，且對非小細(xì)胞肺癌和小細(xì)胞肺癌具有一定的鑒別作用，或許可為臨床診斷和鑒別診斷提供一定的參考價值。

NK 細(xì)胞是先天免疫系統(tǒng)的組成部分，可通過NK 細(xì)胞受體及其各自配體在靶細(xì)胞上的相互作用傳遞的抑制和激活信號之間的平衡來調(diào)節(jié)對靶細(xì)胞的反應(yīng)性，在早期惡性轉(zhuǎn)化中發(fā)揮重要作用。NK 細(xì)胞激活信號由應(yīng)激誘導(dǎo)的配體傳遞，由腫瘤本身表達(dá)，NKG2D 受體與這些配體結(jié)合，產(chǎn)生激活信號[10]。NKG2D 可識別多個配體以啟動針對應(yīng)激、轉(zhuǎn)化或感染細(xì)胞的先天免疫反應(yīng)。機(jī)體免疫功能的強(qiáng)弱既取決于NK 細(xì)胞數(shù)量，也取決于活化性受體的表達(dá)。目前公認(rèn)活化性受體NKG2D 在抗腫瘤免疫應(yīng)答中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，其水平高低在很大程度上決定了NK 細(xì)胞免疫應(yīng)答的強(qiáng)弱[11]。本研究結(jié)果顯示，肺癌患者的NKG2D 水平明顯低于健康者，提示肺癌患者的NK 細(xì)胞殺傷能力受到抑制，腫瘤細(xì)胞可逃避NK 細(xì)胞的作用并增殖。TNM 分期越高、分化程度越高、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者的外周血NKG2D 水平越低，NKG2D 與肺癌病理生理特征之間的相關(guān)性均提示其可能參與了肺癌的發(fā)生發(fā)展[12-13]。NKG2D 與MASP-2 之間呈正相關(guān)，二者可能協(xié)同參與肺癌的發(fā)生。NKG2D 預(yù)測肺癌發(fā)生的AUC 為0.628，稍低于MASP-2。然而二者聯(lián)合預(yù)測肺癌發(fā)生的AUC 可達(dá)到0.723，聯(lián)合檢測對肺癌預(yù)測的意義更大。

綜上所述，MASP-2 和NKG2D 可能參與了肺癌的發(fā)生發(fā)展，對肺癌的發(fā)生具有一定預(yù)測價值，可在一定程度上幫助臨床醫(yī)生評估腫瘤的惡性程度以及制定治療策略，有望成為肺癌新的腫瘤標(biāo)志物。未來仍需更多大樣本研究進(jìn)一步證實MASP-2、NKG2D 對肺癌的臨床診斷及鑒別診斷、療效監(jiān)測及預(yù)后評估的價值，以助力肺癌的精準(zhǔn)治療。