匹拉米洞半定量檢測法與雙抗體夾心法檢測糞便隱血的比較*

陳 劍,張大蓮,張 毅,周 利,葉 丹

(玉溪市人民醫院 1.檢驗科 2.呼吸科,云南 玉溪 653100)

糞便隱血是一項常規的實驗室檢查項目,主要是檢查胃腸道有無出血,并且對消化道腫瘤也有一定的預警作用。目前采用的糞便隱血檢測方法主要有化學法和免疫法兩類。兩類方法各有優缺點,本文選擇化學法中的匹拉米洞半定量檢測法(Fecal Occult Blood pyramidon semi-quantitative method,FOBpsm)和免疫法中的免疫雙抗體夾心法檢測(Immune Fecal Occult Blood,IFOB)進行比較,分析如下。

1 材料與方法

1.1 材料

收集本院512例消化科病人糞便;已知血紅蛋白濃度為100mg/mL的抗凝血2mL。

1.2 試劑

匹拉米洞半定量檢測法采用國內某公司生產的匹拉米洞半定量檢測法(FOBpsm)試劑盒;雙抗體夾心法采用國內某股份有限公司生產的大便隱血(IFOB)檢測試劑盒。

1.3 兩種檢測方法操作

對512例標本每份分為兩份,分別進行FOBpsm和IFOB試驗。

1.4 檢測范圍

測定將Hb結果100mg/mL的抗凝血用生理鹽水分別稀釋10倍、100倍、500倍、1000倍、2000倍、4000倍、5000倍、10000倍、20000倍、50000倍、100000倍、200000倍,制備成100mg/mL、10mg/mL、1mg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、20μg/mL、10μg/mL、5μg/mL、2μg/mL、1 μg/mL、0.5μg/mL的紅細胞懸液,并用兩種方法進行檢測。

1.5 方法

在隱血陰性的正常糞便中加入一定數量的動物血、菠菜、鐵劑、鉍劑,同時在隱血陽性的糞便標本中加入大量維生素C干擾物質,并同時用兩種方法進行檢測。

2 統計分析

2.1 兩種方法檢測糞便結果

FOBpsm檢測糞便隱血的陽性率為44.1%,IFOB的陽性率為77.5%,P<0.005,差異具有統計學意義,詳見表1。

表1 FOBpsm和IFOB檢測糞便隱血結果

2.2 兩種方法的檢測血紅蛋白上下限比較結果FOBpsm紅細胞懸液Hb的最低濃度為:20μg/mL,最高濃度超過100mg/mL時仍能準確顯示強陽性。IFOB紅細胞懸液Hb的最低濃度為:1μg/mL,最高檢測濃度為10mg/mL,見表2。

表2 FOBpsm和IFOB檢測Hb上下限結果比較

2.3 兩種方法檢測血紅蛋白抗干擾結果

IFOB加入各種干擾物質的糞便標本時均能準確排除干擾,FOBpsm則出現假陽性或假陰性結果,見表3。

表3 FOBpsm和IFOB抗干擾結果比較

3 討論

引起消化道出血的原因有很多,常見的原因有消化性潰瘍、急性胃腸炎、食管胃底靜脈曲張破裂、消化道腫瘤,等等。尤其是結直腸癌,發病率已躍居全球惡性腫瘤第三位[1]。糞便隱血試驗可對微量血紅蛋白進行檢測,以明確患者是否存在消化道出血,且具有便捷、廉價的優勢,適合高危人群進行反復檢測[2]。特別是在消化道出血早期,出血量不多時,往往糞便外觀無改變,肉眼不能分辨是非已經存在出血,所以,糞便隱血檢測的靈敏度和特異性顯得尤為重要[3]。

目前糞便隱血的檢測的方法分為化學法和免疫法兩大類。由表1可以看出FOBpsm檢測Hb陽性率為77.5%,IFOB陽性率為90%。差異具有統計學意義。而從表2檢測上下限對比中可以看出 FOBpsm在紅細胞懸液Hb濃度降到25μg/mL時顯色變淡接近消失,20μg/mL就完全顯現不出來了。IFOB在2 μg/mL仍能準確顯示隱血陽性,在1μg/mL時顯色才徹底消失。但是在10mg/mL以上高濃度時,FOBpsm準確顯示強陽性,而IFOB因為鉤狀效應而出現了假陰性。同時,在表1中,也有18例患者標本中含有大量Hb產生了鉤狀效應從而出現假陰性,在用FOBpsm復查才準確顯示強陽性結果。由此可見,IFOB的陽性檢測閾值明顯低于FOBpsm,相較于FOBpsm具有更好的診斷效能[4,5]。FOBpsm則具有更高的檢測值上限。

從表3抗干擾能力結果顯示中可以看出,FOBpsm由于方法學的原因,較易受到各種因素的干擾。該方法依賴于簡單的氧化反應,食物及藥品中的動物血紅蛋白和過氧化物酶易導致假陽性結果。抗氧化劑(如維生素C)影響氧化過程,產生假陰性結果。因此FOBpsm是一種靈敏度低而且非特異性的檢測方法[6,7]。

IFOB通過標記的Hb單克隆抗體與糞便中的Hb結合形成復合物,從而在纖維膜上顯示陰性或陽性,利用了人血紅蛋白抗原抗體反應的原理進行檢測。檢測結果不受飲食、藥物等影響,抗干擾能力明顯優于FOBpsm,對于糞便隱血的檢查來說,盡早提示消化道出血更為重要。因此,IFOB更加適用于人群篩查[8]。

綜上所述,FOBpsm操作簡便,快速,顯色穩定而且可以根據顏色深淺判定糞便隱血的程度,但是因方法學的限制,靈敏度沒有IFOB高,易受到飲食及藥物的影響。IFOB靈敏度足夠高,特異性強,不受飲食及藥物的影響,同時也具有操作簡便,快速的特點,但是在胃腸道大量出血,糞便中Hb含量較大時,會出現鉤狀效應,必須特別小心。近年來,IFOB憑借良好的靈敏度與特異性,優異的抗干擾能力,在很大程度上已經取代了FOBpsm,尤其對結直腸腫瘤的早期篩查方式占據了主導地位[9]。但在糞便隱血個體化檢測普及之前,化學法與免疫法相結合,互相彌補方法學的不足,才能跟好的提高檢測的準確性。