結核分枝桿菌DNA及RNA檢測在結核病中的診斷價值*

陳江燕,王 霖,馬志強,王曉燕,毛紅艷,李瓊秀

(昆明市第三人民醫院/云南省傳染性疾病臨床醫學中心 檢驗科,云南 昆明 650301)

結核病是由結核分枝桿菌(mycobacterium tuberculoss,MTB)感染引起的慢性傳染病[1],在全球22個結核病流行嚴重的國家中,我國疫情不容樂觀,其發病人數約為每年130萬左右,占全球發病率的14.3%,位居第2位[2,3]。目前檢測結核菌的金標準是傳統的羅氏培養,但其培養周期長、操作復雜,且存在不同程度地準確性較低、靈敏度差、周期長、特異性不高等問題[4,5]。因此需要一種簡便快捷且靈敏度高、特異性強且能在臨床中廣泛普及的檢測技術為輔助臨床上結核病的早期診斷,對結核病患者的治療預防具有重要意義[6]。本研究回顧性分析了昆明市第三人民醫院診治的1168例結核病患者實驗室資料,通過采用DNA和RNA實時熒光核酸恒溫擴增檢測技術,探討結核菌DNA和RNA檢測在結核病中的診斷價值,現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年1月-2021年6月于本院接收治療的結核病確診病例1168例,其中男性591例,女性577例;年齡7～88歲,中位年齡44(29,57)歲。納入標準:(1)確診按照《肺結核診斷標準》(WS288-2017)[7];(2)經結核菌痰涂片及痰培養檢查確診為結核病。排除標準:(1)非結核菌病;(2)其它感染性及自身免疫性疾病;(3)合并重要器官疾病及嚴重高血壓患者等。

1.2 儀器與試劑 主要儀器

結核桿菌DNA和RNA檢測儀:天隆TL-988型;試劑:DNA檢測試劑:結核菌復合群核酸檢測試劑盒熒光PCR法,RNA檢測的試劑:TB-SAT結核菌檢測試劑盒RNA恒溫擴增。

1.3 檢測方法

實驗室檢測:將采集的患者標本置于無菌容器內密封送檢,按照實驗室操作步驟進行液化、核酸提取、PCR擴增等反應程序完成。結果判讀標準:MTB-DNA陽性判斷:FAM通道檢測Ct值≤38.0為陽性,否則為陰性;MTB-RNA陽性判斷:Ct值≤35為陽性,35

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 結核菌DNA及RNA檢測情況

表1 結核菌DNA及RNA檢測情況[n(%)]

2.2 不同類型標本DNA和RNA檢測情況

不同類型標本中痰液DNA和RNA及DNA+RNA檢測陽性最高,分別為335、170、142例,陽性率分別為55.74%、57.24%、60.43%;腦脊液DNA和RNA及DNA+RNA檢測陽性最低,分別為1、0、0例,陽性率分別為0.17%、0%、0%;見表2、圖1。

表2 不同類型標本DNA和RNA檢測陽性情況[n(%)]

圖1 不同類型標本MTB-DNA和MTB-RNA檢測陽性情況

2.3 不同年齡標本DNA 和RNA檢測情況

不同年齡組中,21～30歲組DNA檢測陽性最高,為133例,陽性率22.13%;41～50歲組RNA及DNA+RNA檢測陽性最高,分別為67、62例,陽性率分別為22.56%、25.96%;10≤歲組DNA和RNA及DNA+RNA檢測陽性最低,分別為4、2、2例,陽性率分別為0.67%、0.66%、0.85%,見表3。

表3 不同年齡標本DNA和RNA檢測陽性情況[n(%)]

圖2 不同年齡標本MTB-DNA和MTB-RNA檢測陽性情況

3 討論

目前診斷結核病的方法有影像學檢查、細菌學、免疫學檢測等,結核病確診的金標準是痰液中檢出結核菌。結核病發病率較高,但其發現率卻僅有40%左右,對于結核患者的快速診斷是結核防控的重要措施,而常規檢測很難達到快速診斷的效果[8]。近年來,熒光定量PCR技術因其快速、高效的診斷被逐漸應用到結核的檢測中,其可間接檢出痰液標本中結核菌含量,也能鑒別結核菌和非結核菌,因此得到了大量普及。同時恒溫擴增(SAT)技術檢測不僅檢測標本中結核菌存在情況,還能鑒定結核菌活性,因此可用于活動性肺結核的檢測及診斷[9,10]。

本研究通過對1168例研究對象標本進行實驗室檢測,結果發現結核菌DNA檢測陽性率遠高于RNA檢測,可能是因為DNA雙鏈較RNA單鏈穩定,不易被降解,同時在RNA恒溫擴增中RNA逆轉錄成cDNA,通過多聚酶等作用又形成新的RNA,雖然兩種檢測的狀態同樣一直持續進行,但RNA存在于活的結核菌中,這也可能是其陽性率低于DNA檢測的原因[11,12]。在不同類型的標本中,痰液檢出率較最高,這也與以往的研究結果相一致[6]。本研究結果還顯示,結核菌DNA檢測陽性率女性高于男性,可能的原因有結核病發病率的差異在不同性別中可能與傳播動力學的因素有關,且細胞免疫、糖皮質激素、社會經濟因素和文化因素等方面的差異可能都與其有一定的相關性[13]。在不同年齡段中中青年組DNA和RNA陽性檢出比例最高、最常見,這可能與青年的免疫功能狀態有關,也可能與青年發病時易出現菌血癥或血行播散性結核病有關。

綜上所述,結核菌DNA和RNA檢測在結核病患者的不同類型標本和各年齡段的檢出率均有差異,對患者結核菌檢測方法及標本的選擇有參考價值,減少誤診和漏檢,可推廣應用于結核病的實驗室診斷工作中。