超高液相色譜-串聯質譜法測定雞肉中氟苯尼考殘留量的不確定度評定

單長海，李 翔，楊 周，龍 洋，胡 容，孫 輝

（國家富硒產品質量檢驗檢測中心，湖北恩施 445000）

氟苯尼考是一種畜禽動物專用的酰胺醇類的廣譜抗菌藥，治療畜禽動物的細菌性疾病，尤其對呼吸道系統感染和腸道感染療效顯著[1-2]。氟苯尼考具有一定的毒性，畜牧農產品中氟苯尼考累積到一定限量，會對人體造成危害[3-4]。《食品安全國家標準食品中獸藥最大殘留限量》（GB 31650—2019）規定，雞肉中氟苯尼考殘留限量小于100 μg·kg-1，是國家對農產品重點監督項目。《食品安全國家標準 動物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》（GB 31658.5—2021）自2022年2月1日起開始實施，是國家農產品安全監督抽檢指定的唯一檢測方法。在獸藥殘留的分析檢測工作中，由于試劑耗材質量等級的不同、檢測設備的精密度和靈敏度的不同對檢測結果產生一定的偏差，通過對標準方法進行測量不確定度分析并關注主要不確定度來源，能夠提高檢測結果的準確度[5-6]。本文依據GB 31658.5—2021、《化學分析中不確定度的評估指南》（CNAS—GL006：2019），對雞肉中氟苯尼考殘留量測定的不確定度進行評定，旨在為采用新標準進行檢測時找出關鍵控制環節并加以控制，以降低檢驗風險。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

雞肉樣品，市場采購。

氟苯尼考標準品（100.0 mg·L-1，上海安譜實驗科技股份有限公司，濃度不確定度U=3.0 mg·L-1）；乙腈、甲酸、正己烷、乙酸乙酯（色譜純，德國CNW公司）；實驗室用水為Milli-Q超純水，雞肉中氟苯尼定量分析質控樣（自制）。

Triple Quad 5500三重四級桿液相色譜-質譜聯用儀（美國ABSCIEX公司）；ST 40R離心機（美國Thermo Fisher公司）；Vac Elut SPS 24半自動固相萃取儀（美國Agilent Technologies公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 溶液配制以及樣品處理

標準溶液及內標配制：精密量取1.0 mL氟苯尼考標準溶液于10 mL容量瓶中，用乙腈定容，得到10 μg·mL-1氟苯尼考標準工作液；同樣方法制備100 ng·mL-1內 標 工 作 溶 液。 按 照 GB 31658.5—2021中8.3的方法制備得濃度分別為10 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1、200 ng·mL-1、500 ng·mL-1和1 000 ng·mL-1的校準工作溶液。

樣品處理按GB 31658.5—2021中8.1、8.2、8.3的方法處理，色譜和質譜條件按照8.4的條件設置。

1.2.2 數學模型的建立

根據測量方法建立雞肉中氟苯尼考殘留量定量分析的數學模型為

式中：X為雞肉中氟苯尼考含量，μg·kg-1；c為試樣溶液中氟苯尼考濃度，μg·L-1；m為供試試料質量，g；v為試樣定容體積，mL。

2 結果與分析

2.1 不確定度來源的識別

根據GB 31658.5—2021標準方法的測量過程和測量模型，影響雞肉中氟苯尼考定量分析的不確定度來源有：①樣品稱量引入的不確定度urel(a)；②氟苯尼考標準物質濃度的準確性引入的不確定度urel(c)；③校準曲線擬合引入的不確定度urel(q)；④檢測方法重復性引入的不確定度urel(r)；⑤檢測方法加標回收率引入的不確定度urel(h)。由于檢測方法加標回收率引入的不確定度包含了提取凈化過程引入的不確定度，因此在評定過程中忽略了提取凈化過程引入的不確定度。

2.2 不確定度測量

2.2.1 樣品稱量引入的不確定度urel(a)

（1）天平允差引入的不確定度u(a1)。根據《電子天平校準規程》（JJG 1036—2008），使用0.001 g分度的天平，稱樣量在2 g（±0.02 g）時最大允許誤差為±0.005 g，供試品稱樣按照均勻分布，則樣品稱樣時由電子天平允許誤差引入的標準不確定度為

（2）天平重復性引入的不確定度u(b)。根據電子天平校準證書得天平重復性引入的不確定度為u(b)=0.003 g。

（3）樣品稱樣引入的相對標準不確定度urel(a)。樣品稱量按2.00 g計算，稱量引起的相對標準不確定度為

2.2.2 氟苯尼考標準物質濃度的準確性引入的不確定度urel(c)

氟苯尼考標準物質證書給出的濃度為100.0 mg·L-1，不確定度為3.0 mg·L-1。氟苯尼考標準物質濃度的準確性引入的不確定度為

2.2.3 校準曲線擬合引入的不確定度urel(q)

校準曲線以氟苯尼考標準溶液配制的濃度和儀器分析得到的峰面積見表1，擬合線性方程為Y=0.181X+0.379 1，R2=0.999 9，其中斜率a=0.181，截距b=0.379 1，測量樣品的次數p=2，標準曲線測量次數n=6，被測供試品溶液濃度均值c=152 ng·mL-1，配制標準溶液理論平均值c=310 ng·mL-1。計算校準曲線的殘差S2為

表1 校準曲線的標準溶液濃度及峰面積統計表

校準曲線擬合引入的標準不確定度為

校準曲線擬合引入的相對標準不確定度為

2.2.4 檢測方法重復性測定引入的不確定度urel(r)

稱取雞肉樣品10份，按1.2.1的方法進行檢測，測定雞肉中氟苯尼考含量。雞肉中氟苯尼考含量 檢 測 結 果xi分 別 為 76.3 μg·kg-1、78.2 μg·kg-1、75.6 μg·kg-1、72.1 μg·kg-1、70.6 μg·kg-1、75.6 μg·kg-1、78.9 μg·kg-1、77.2 μg·kg-1、73.6 μg·kg-1和 75.2 μg·kg-1，均值X=75.3 μg·kg-1，按公式計算標準偏差S為

檢測方法重復性引入的標準不確定度u(r)為

檢測方法重復性引入的相對標準不確定度為

2.2.5 檢測方法回收率引入的不確定度urel(h)

稱取雞肉樣品，按照樣品中氟苯尼考含量分別為 50 μg·kg-1、100 μg·kg-1、200 μg·kg-1水平進行加標，每個水平按照3個平行樣進行稱樣加標處理，按照1.2.1的方法進行回收率測定。9個樣品的加標回收率分別為88.7%、89.6%、90.5%、92.2%、90.5%、95.6%、94.5%、96.4%和94.6%。方法回收率的平均值x為92.5%，計算相對標準偏差S為

檢測方法回收率引入的標準不確定度為

檢測方法回收率引入的相對標準不確定度為

2.2.6 合成不確定度urel

通過測定過程的不確定度來源分析，該方法的相對合成不確定度urel為

本次測定的雞肉中氟苯尼考含量的平均值x為75.3 μg·kg-1，則本次雞肉中氟苯尼考測定的合成不確定度uc為

2.2.7 擴展不確定度U

按照CNAS-GL006：2018，選擇95%置信水平時，包含因子k=2，則測量結果的擴展不確定度U為

因此，按照GB 31658.5—2021方法測定雞肉中氟苯尼考的結果為（75.3±6.4） μg·kg-1。

3 結論

本研究依據GB 31658.5—2021標準，對雞肉中氟苯尼考殘留量測量過程中的不確定度來源進行了分析，對測量不確定度分量進行評定，發現對檢測結果準確度影響最主要的因素為標準曲線擬合，而校準曲線擬合與人員操作檢測熟練程度和儀器性能有關。因此，在檢測過程中，需要對人員檢測能力和儀器維護保養進行定期監控，以降低檢驗風險。