基于液質聯用技術分析雀梅藤化學成分

蒙雪雁，王成海

（1.廣西中醫藥大學藥學院，南寧 530200；2.廣東省東莞國藥集團常平醫藥公司，廣東東莞 523560）

雀梅藤［Sageretia thea（Osbeck）Johnst.］屬于鼠李科（Rhamnaceae）雀梅藤屬（Sageretia），別名雀梅刺、對節刺、碎米子、刺楊梅等［1］。雀梅藤主要分布于西南及江蘇、安徽、浙江、江西、福建、臺灣、湖北、湖南、廣東、廣西等地，其藥用化學成分主要為黃酮及其苷類、糖苷類、有機酸類、酯類、蒽醌類、萜類、植物甾醇、天然色素、木脂素和新木脂素等［2］。其地下部分具有行氣化痰、祛風除濕的功效，主治咳嗽、胃痛、哮喘、鶴膝風、水腫等病癥［3］。本研究通過超高液相色譜-串聯四級桿飛行時間質譜（UPLC-QTOF-MS/MS）技術對雀梅藤根水提物的化學成分進行定性分析，為雀梅藤的藥效物質基礎的闡明提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器

Sciex X500R Q-TOF 型液質聯用儀（配有ESI 源和Sciex OS 數據處理軟件），美國Sciex 公司；Waters Acquity Arc 超高效液相色譜儀（四元泵、自動進樣器、柱溫箱、2998PDA 檢測器、Waters 工作站），沃特世科技（上海）有限公司；SB-800DTD 型超聲波清洗機，寧波新芝生物科技股份有限公司；SQP 型十萬分之一電子分析天平，賽多利斯科學儀器有限公司。

1.2 材料

本研究所用雀梅藤藥材采集于廣西南寧；乙腈（HPLC 級，德國Merck 集團）；甲酸（LC/MS 級，賽默飛）；甲醇（分析純，成都市科隆化學品有限公司）；水為去離子水。

1.3 方法

1.3.1 色譜及質譜檢測條件 色譜條件，色譜柱為Thermo scientific Accucore C18 柱（100 mm×2.1 mm，2.6 μmol/L）；流動相為乙腈-0.1%甲酸水，梯度洗脫，0～1 min，5%乙腈；1～5 min，5%～27%乙腈；5～15 min，27%～70%乙腈；15～18 min，70%～95%乙腈；18～20 min，95%～5%乙腈；體積流量0.4 mL/min；柱溫40.0 ℃；進樣量3 μL。

質譜條件，電噴霧電離源（ESI），正、負離子模式，掃描范圍（m/z）100～2 000；碰撞能量35 eV；離子源溫度為600 ℃；噴霧電壓5 500 V。通過一級質譜信息確定精確相對分子質量，二級質譜獲得裂解信息，搜索數據庫和查閱文獻推測化合物的結構式。

1.3.2 供試品溶液的制備 取干燥雀梅藤根部粗粉210 g，用8 倍量水回流提取3 次，每次2.5 h。合并提取液過濾并用旋轉蒸發儀減壓濃縮，后除去殘余水份，得到凍干的提取物13.82 g，得率為6.58 %。取適量提取物溶于甲醇，配制成1 mg/mL 樣品溶液，用0.22 μm 濾膜過濾，裝于液相小瓶內，待用。

2 結果與分析

采用UPLC-Q-TOF-MS/ MS 對雀梅藤進行分析，選擇正、負離子模式分別對供試品溶液進行掃描，總離子流見圖1、圖2。通過SCIX OS 數據處理系統查找質譜響應較高的成分的精確相對分子質量，與天然產物高分辨質譜數據庫（Natural procducts HR- MSMS 2.0）進行比對，獲得候選化合物，通過二級碎片離子及母離子可能的斷裂規律來確定其結構。結果表明，從雀梅藤中鑒定出43 個化學成分，各化學成分的保留時間、質譜信息見表1。通過UPLC-Q-TOF-MS/MS 聯用技術，并通過對比參考文獻對雀梅藤的化學成分進行了初步鑒定，發現雀梅藤中所含化學成分可分為有機酸、黃酮及其他3 大類。

圖1 雀梅藤正離子TIC

圖2 雀梅藤負離子TIC

表1 雀梅藤化學成分的UPLC-Q-TOF-MS/MS 鑒定結果

續表

2.1 有機酸類化合物質譜解析

雀梅藤有機酸成分較多，該類成分的二級質譜裂解特征通常易失去H2O、CO、CO2、CH2等中性碎片。有機酸類中的兒茶素及其衍生物是抑制環加氧酶-1 的有效抑制劑，是抑制癌癥的天然重要活性成分之一［42］。以化合物兒茶素為例，其在正離子模式下的準分子離子峰為291.086 6，tR為6.34，二級質譜中存在的離子碎片主要為93.034 5。表1 中鑒定得到離子碎片（m/z）主要為119.051 4、139.039 8、147.045 0、165.055 4，根據其裂解規律與文獻［30］對照基本吻合，推測化合物30 為兒茶素，可能的斷裂途徑見圖3。

圖3 兒茶素可能的裂解途徑

2.2 黃酮及異黃酮類化合物質譜解析

黃酮類化合物是中草藥常見的有效成分之一，雀梅藤中含有較多的黃酮及異黃酮類成分。黃酮類成分能夠減輕關節炎程度，保護關節組織，滑膜增生，血管翳形成，軟骨破壞和骨侵蝕改善關節組織關節翳形成，炎性細胞浸潤和骨侵蝕［43］。以異槲皮素為例，其在負離子模式下的準分子離子峰為463.124 8，tR為4.69，二級質譜中存在的離子碎片主要為151.002 8、271.024 5、301.135 9。根據其化學結構和二級碎片信息，其裂解規律與文獻［24］對照基本吻合，推測化合物23 為異槲皮素，可能的質譜裂解途徑見圖4。

圖4 異槲皮素可能的裂解途徑

3 小結

本研究鑒別出的有機酸類化合物如兒茶素、綠原酸、水楊酸等都具有良好的藥理活性。據文獻報道，有機酸類中的水楊酸及其衍生物是COX-2 活性的有效抑制劑，是抗炎的天然重要活性成分之一［44］。水楊酸顯著降低C57Bl/6DIO 小鼠網膜脂肪組織中的11β-HSD1 mRNA，其在腸系膜脂肪中具有相似的趨勢（P=0.057）。在C57Bl/6 DIO 小鼠的腸系膜脂肪中，水楊酸也降低了11β-HSD1 酶的活性［45］。本研究通過UHPLC-Q-TOF-MS/MS 分析，鑒定出雀梅藤地下部分潛在的主要成分，并查閱相關報道了解這些化合物的主要藥理活性，發現確實存在抗炎活性成分，與雀梅藤傳統藥理作用一致。