高效液相色譜儀檢測器進展及其在藥物分析中的應用

翟 義 陳尚坤

(吉林省松原市食品藥品檢驗所 吉林 松原 138000)

社會經濟的快速發展，促使我國的醫療水平不斷提升，臨床重視研究開發新的檢測技術，以期進一步提升醫療水平、拓寬醫學領域。高效液相色譜法屬于一種有機化合物分析技術，具有檢測耗時短、分析速度較快、分離效率較高等特點，是目前藥物分析的常用手段，有利于快速檢測和分析藥物成分，了解藥物代謝情況，明確藥物質量，具有較高的臨床應用價值[1]。近些年來，隨著現代西藥學及中醫藥學的發展和完善，加上患病人數的增加，促使藥物在臨床的應用范圍擴大，隨之而來的藥物安全問題成為臨床關注的重點。故臨床重視高效液相色譜法檢測器的研究是非常必要的，有利于確保臨床用藥的安全性。對此，本文就高效液相色譜儀檢測器進展及其在藥物分析中的應用效果作一綜述，詳細報告如下。

1 概述高效液相色譜儀

高效液相色譜法在上個世紀六七十年代首次出現，其屬于一種現代化分析方法，因具有較高的敏感度以及良好的分離度而被廣泛用于藥物分析和化工生產等領域。高效液相色譜法是在經典色譜法的基礎上發展而來，其參照了氣相色譜的工作原理，并將流動相改為高壓輸送[2]。高效液相色譜法的色譜柱是借助特殊的方法使用小粒徑填充而成，相較于經典液相色譜，高效液相色譜法色譜柱的效果大大提升，且色譜柱后連接敏感度極高的檢測器，能夠連續檢測流出物，提高檢測效果[3]。高效液相色譜儀主要包括五個部分，分別是色譜柱、色譜泵及控制器、檢測器、進樣器、數據處理及控制。高效液相色譜儀的分離原理為：在一個物理過程中，流動相帶領著等待被分析的化合物及其他共存物質通過色譜柱，由于不同物質在固定相上的停留時間存在主體差異，使得出峰時間不同，利用此差異完成分離，隨后將分離的成分通過檢測器進行檢測，最終檢測出各種化合物的濃度，并對化合物進行分析[4]。

2 闡述評估高效液相色譜儀檢測器質量的指標

檢測器作為高效液相色譜儀的重要組成部分，其質量的好壞將直接影響分析結果的準確性和敏感度，因此，檢測人員需要全面了解高效液相色譜儀檢測器的結構，掌握檢測器的使用方法，從而提高檢測效率和檢測準確率。另外，檢測人員在日常工作中，還需要重視高效液相色譜儀檢測器的保養和維護，避免因儀器質量而出現檢測誤差，延長檢測器的使用壽命。現階段，臨床評估高效液相色譜儀檢測器質量的指標有：①噪音：主要是指在沒有樣品時，檢測器的最大輸出信號；②信噪比；③靈敏度；④漂移：是指檢測器在一段時間內響應值的變化情況；⑤最小檢測限：是指當樣品出現兩倍或三倍的噪音信號時的濃度：⑥線性動態范圍：是指最大線性相應與最小檢出限之比[5]。值得注意的是，最小檢測限并不僅僅是評估檢測器質量的指標，而且還是衡量整個色譜系統的指標，是一個包括色譜系統在內的綜合性指標，信噪比也是一樣的。

3 分析高效液相色譜儀檢測器的種類及其在藥物分析中的應用效果

隨著臨床對高效液相色譜法的深入研究，目前已研制出多種高效液相色譜儀檢測器，并在臨床廣泛應用，在藥物分析中發揮著重要的作用。

3.1紫外線檢測器

在高效液相色譜法的臨床應用過程中，紫外線檢測器是最為常用的檢測器，當樣品組分通過流通池時吸收特定波長的紫外線，發生透過強弱的變化，從而獲取濃度-時間曲線[6]。相較于其他檢測器，紫外線檢測器的敏感度較好，但只適用于能夠吸收紫外線波長的組分。上個世紀八十年代，研制出一種新型的紫外線檢測器，即二極管陣列檢測器，利用二極管陣列檢測器能夠獲取樣品的色譜圖、每個色譜圖組分的吸收光譜，其中色譜圖用于定量分析，光譜圖用于定性分析。陳玲等[7]在一項研究中，利用高效液相色譜-二極管陣列檢測器檢測人體血漿中美羅培南的濃度，結果顯示在濃度為0.515μg/ml～103.1μg/ml的美羅培南的線性關系兩阿紅，美羅培南的定量下限為0.515μg/ml。由此看出，高效液相色譜-二極管陣列檢測器的敏感度較高，定量準確，用于藥物分析的效果確切，可用于監測人體內藥物濃度，根據檢測結果及時調整藥物方案，提高臨床用藥的安全性。

3.2蒸發光散射檢測器

蒸發光散射檢測器在上個世紀九十年代首次出現，其通過利用流動相與受檢物質之間蒸汽壓的差異性，在流動相揮發除去易揮發性組分粒子后，對于不易揮發性組分粒子，能夠從激光光源中發出的光受到散射，利用硅光二極管標記受到散射的光信號，并通過信號輸出，輸出時分為霧化、蒸發以及檢測三個階段[8]。相較于其他檢測器，蒸發光散射檢測器可以檢測不含發色團的化合物，并且揮發性低于流動相的物質都可以進行檢測，有效拓寬了高效液相色譜法在藥物分析中的檢測范圍。王瑩等[9]在研究中對比分析了高效液相色譜-蒸發光散射檢測器與電噴霧檢測器在注射用益氣復脈中糖成分測定中的應用價值，結果顯示上述兩種方法都能準確測定注射用益氣復脈中的4種含糖量，明確注射用益氣復脈中包含果糖、葡萄糖、麥芽糖以及蔗糖。由此看出，蒸發光散射檢測器用于藥物分析的效果良好，有利于準確檢測藥物中的糖類、高級脂肪酸及甘油三酯等，幫助醫務人員了解藥物成分，避免出現用藥錯誤。

3.3化學發光檢測器

化學發光檢測器是近些年來常用的高效液相色譜儀檢測器，具有高敏感性、高選擇性等特點，其設備比較簡單。由于化學發光檢測器自身可以發光，無需光源，故檢測價格便宜，臨床應用前景廣闊。化學發光檢測器將流出色譜柱的組分與發光試劑混合后產生化學發光反應，光輻射可以借助光導纖維進行傳輸，利用光電倍增管進行檢測，從而獲取檢測信號。相較于其他檢測器，化學發光檢測器的線性范圍較寬，敏感度高，且重復性良好，適用于復方制劑的分析。黃敏文等[10]在研究中使用高效液相色譜-脈沖安培電化學檢測器法測定硫酸新霉素，結果顯示電化學發光檢測器可以發現硫酸新霉素的活性組分。由此看出，化學發光檢測器用于藥物分析的效果顯著，有利于了解藥物成分，明確藥物定量。

3.4質譜檢測器

質譜檢測器是一種新型的高效液相色譜儀檢測器，其在靈敏度、通用性及選擇性等方面的優點突出，近些年來已發展成為一種高度自動化的分析方法，并廣泛用于各個領域。隨著各種軟離子化技術的發展，促使高效液相色譜-質譜檢測器快速發展，在中醫藥研究中發揮著重要作用。姜春鳳等[11]在一項研究中，利用超高效液相色譜-串聯質譜檢測器分析了柴胡郁金香顆粒在抑郁癥大鼠體內的藥代動力學，該方法的檢測耗時短、檢測速度快、檢測結果準確，可快速明確柴胡郁金香顆粒中9個成分在抑郁癥大鼠體內的藥代動力學。范先煜等[12]研究表明超高效液相色譜-串聯質譜檢測器的準確性和精密度良好，敏感度較高，操作方便，可以快速檢測人血漿中伊立替康及其主要代謝產物的濃度。由此看出，質譜檢測器用于藥物分析的效果確切，適用于治療藥物監測，提高藥物安全性。

3.5核磁共振檢測器

高效液相色譜-核磁共振檢測器的歷史發展較長久，其在上個世紀八十年代初期就已經開始研究，然而，因核磁共振檢測器的敏感度較低下，加上氘代試劑的價格昂貴、溶劑信號對樣品的干擾等，導致高效液相色譜-核磁共振檢測器的發展比較緩慢。近些年來，隨著核磁共振技術的快速發展，磁場強度的不斷提升，使得高效液相色譜-核磁共振檢測器在臨床廣泛應用。陳航等[13]研究表明，核磁共振檢測器能夠快速檢測氯唑沙宗的未知成分，督促原料生產單位嚴格把控藥材質量，保證氯唑沙宗臨床用藥的安全性。王跨陡等[14]研究表明，核磁共振檢測器可以快速鑒別樣品中的麻黃堿和偽麻黃堿，測定樣品中麻黃堿和偽麻黃堿的含量。由此可知，核磁共振檢測器用于藥物分析的效果顯著，有利于快速檢測藥品的成分，明確藥品中的雜質，督促藥物生產廠家嚴格把控原材料質量，提高藥物的安全性。

3.6示差折光檢測器

示差折光檢測器是高效液相色法的檢測儀器之一，其通過利用流動相與組分之間折射率的差異來進行檢測，獲取信號。雖然示差折光檢測器是一種通用型檢測器，且對多數物質的敏感度較低，但對少數物質的敏感度較高，比如糖類，主要用于藥物的糖類分析[15]。

4 小結

綜上所述，高效液相色譜法是臨床常用的有機化合物分析技術，具有分離速度快、敏感度高、操作簡單、耗時短等優點，目前已用于藥物分析和化工生產等領域。隨著臨床對高效液相色譜法的深入研究，已研發出多種檢測器，比如紫外線檢測器、蒸發光散射檢測器、化學發光檢測器、質譜檢測器、核磁共振檢測器以及示差折光檢測器等，不同檢測器的適用范圍存在差異，臨床需結合具體情況選擇合適的檢測器，不斷提高藥物分析效果。