麝香壯骨膏質量標準的探究

蔡亞婷，雷王嘯，于金燕

（東阿阿華醫療科技有限公司，山東 聊城 252000）

0 引言

麝香壯骨膏能夠起到活血、止痛和消炎的作用。早期，該藥物的質量標準主要被收錄在衛健委所頒布的藥品標準中。2006 年，食品藥品監管局頒布了全新標準，新標準對原處方進行了調整，同時新增了包括薄層檢查在內的內容?？紤]到新標準仍存在一定的缺陷，有關人員決定對該藥品的質量標準進行更加系統且深入的探究，希望能夠使質量標準得到完善，為藥品功效與質量提供保障。

1 研究背景

作為以當歸、白芷和蒼術為原藥材，加入樟腦、冰片等藥物所制備橡膠貼膏，麝香壯骨膏具有消炎和鎮痛的效果，可用來緩解扭傷、挫傷和關節痛，還有其他原因引起的肌肉酸痛[1]。關于該藥物的標準主要有兩個，一個是由衛健委所頒布的藥品標準，另一個是由食品藥品監管局所頒布的藥品標準。其中，前者只寫明了藥物性狀鑒別依據、貼膏劑檢查項目，后者在此基礎上新增了薄層檢查、氣相色譜鑒別和成分含量測定等內容。在本項目中，研究人員計劃通過TLC 鑒別蒼術、白芷還有當歸，通過GC 測定冰片及樟腦含量，通過HPLC 確定鹽酸苯海拉明濃度。

2 實驗方案

2.1 前期準備

2.1.1 實驗儀器研究開始前，先要準備以下儀器：梅特勒公司生產的電子天平、氣相色譜儀、對流烘干箱、超純水儀。

2.1.2 實驗試劑

本項目需要用到以下試劑：白芷藥材、蒼術素對照品、當歸藥材、歐前胡素、萘、冰片、樟腦、鹽酸苯海拉明、色譜純的甲醇和乙酸乙酯、超純水、由不同供貨商所提供麝香壯骨膏10 份。

2.2 鑒別TLC

2.2.1 TLC 介紹

TLC 要求先將固定相均勻涂抹在塑料、鋁基片或是玻璃板的表面，等到固定相點樣并展開，再對不同物質的比移植進行分析，從而確定藥物成分和雜質含量[2]。作為能夠快速分離成分并進行定量分析的技術，TLC已在藥物測定等領域得到廣泛運用，其優點主要體現在以下方面：首先，操作難度低，可快速顯色。其次，展開速度快，通常能夠在15～20min 內完成展開。最后，分辨率高，既能夠分離0.01μg 左右的樣品，又可以分離500mg 以上的樣品。當然，該方法也存在著明顯的不足，即無法被用來分離生物高分子，這點需要有所了解。

2.2.2 鑒別方法

（1）白芷。

實驗開始前，需要制備供試品溶液，做法如下：取2片樣品，將蓋襯去除并剪成小塊，將樣品放入50mL 的甲醇溶液中，進行1h 的水浴回流，過濾并蒸干濾液，向盛有殘渣的容器內倒入1mL 甲醇溶液，殘渣完全溶解后備用。取適量對照品，加入甲醇溶液，獲得對照品溶液，保證溶液所含對照品濃度為0.5mg/mL[3]。再取1g 白芷對照藥材，并將其轉移到提前準備好的容器內，向容器中倒入20mL 甲醇溶液，進行30min 的超聲處理，隨后，過濾并蒸干濾液，加入1mL 的甲醇溶液，確保殘渣完全溶解。最后一步，對照處方制備陰性溶液及樣品。利用薄層色譜法測定樣品，吸取提前制備的3 種溶液，將溶液滴加到硅膠G 板表面，加入由乙酸乙酯和正己烷所制備的展開劑（二者質量比為1:3），待其完全展開，盡快取出并晾干，通過365nm 的紫外光燈進行檢視，發現供試品所出現熒光斑點的顏色、位置和對照藥材、對照品完全相同，另外，陰性對照未受到干擾。

（2）蒼術。

先制備供試品溶液，再取適量蒼術素對照品并加入甲醇溶液，獲得濃度為1mg/mL 的對照品溶液，隨后，嚴格按照處方要求制備陰性溶液及樣品，通過薄層色譜法進行測定，晾干樣品后，在其表面均勻噴10%濃度的硫酸乙醇，均勻加熱樣品，直至樣品表面出現清晰的斑點，再利用紫外光燈觀察樣品。檢視發現，供試品熒光斑點顏色、位置和對照品完全相同，且陰性對照未受到干擾。

（3）當歸。

先制備供試品溶液，再取1g 對照藥材，將藥材浸入20mL 的甲醇溶液中，進行30min 的加熱回流，隨后，過濾并蒸干濾液，用1mL 的甲醇溶液溶解殘渣，獲得對照溶液。嚴格按照處方要求制備陰性溶液及樣品。通過薄層色譜法對當歸含量進行測定，具體測定步驟如下：①吸取提前制備的3 種溶液，保證每種溶液的吸取量均為5μL。②將不同溶液滴到同一塊硅膠G 板的表面。③加入由甲酸、乙醚和石油醚所制備的展開劑（三者質量比為0.1:1:5），待其展開盡快取出并晾干。④利用紫外光燈進行檢視。檢視結果表明，供試品所出現熒光斑點的顏色、位置和對照藥材完全一致，同時陰性對照沒有受到干擾，測定結果具有實際意義。

2.3 測定含量

2.3.1 GC 介紹

GC 法是指以氣體為移動相對指定物質進行測定的方法，按照固定相可將其分成氣液色譜法、氣固色譜法。該方法的優勢和不足均十分明顯，優勢為分離及分析速度快，可將分析樣品的時長控制在20min 以內。僅需要用到少量樣品，便能夠得出相應的結論，且測定靈敏性良好。具有理想的分離性與選擇性。適用范圍廣，既能夠分析揮發有機物、氣體，還可以分析固體和沸點較高的物質。其不足則體現為在定性分析過程中，通常需要先對比已知數據和色譜峰，才能得出相應的結論。定量分析期間，往往要校正測定所輸出信號，才能確保最終結果與實際情況相符。

在本項目中，研究人員決定通過GC 法測定產品所含冰片及樟腦的濃度。其中，色譜柱為毛細管柱，進樣溫度始終維持在220℃左右，23min 內，柱溫可控制在150℃左右，流速能夠達到1mL/min 以上。檢測器選用FID，運行溫度為250℃。除特殊情況外，進樣量均為2μL，對應分流比則為15:1[4]。

2.3.2 制備不同溶液

（1）內標溶液。

稱取適量萘，加入一定量乙酸乙酯，確保所制備溶液的萘濃度為5mg/mL。

（2）供試品溶液。

稱取170cm2產品，將蓋襯去除并剪成長條，將條狀樣品轉移到燒瓶內（燒瓶容量為250mL），向燒瓶內倒入100mL 潔凈水，利用揮發油測定法進行測定，測定期間向測定器內勻速傾倒潔凈水，待溶液溢流到燒瓶內，盡快加入2mL 甲苯，隨后，進行為期3h 的加熱回流，溶液徹底冷卻后，再將測定器內溶液轉移到提前準備好的分液漏斗內，確保有機溶劑層完全分離。向容量為25mL 的量瓶內倒入5mL 預制內標溶液，使用乙酸乙酯充分沖洗測定器、分液漏斗還有冷凝管，將洗滌液統一轉移到量瓶內并加入適量乙酸乙酯進行定容，量瓶內溶液達到25mL 后，將其充分搖勻即可。

（3）對照品貯備液。

稱取適量冰片和樟腦，將對照品放入乙酸乙酯中，確保其能夠完全溶解，且所得到混合液的濃度分別是5.27mg/mL 及5.47mg/mL。

2.3.3 開展相關實驗

（1）適用性。

稱取適量內標溶液、對照品貯備液，向溶液內加入一定量的乙酸乙酯，確保稀釋后溶液濃度滿足研究要求。隨后，吸取適量供試品溶液、稀釋后溶液并進樣，如實記錄樣品色譜。分析色譜圖能夠發現，樣品所含冰片等成分均滿足基線分離的要求，同時各成分的分離度都能夠達到1.5 以上，由此可見，上述方法具備良好的適用性，利用該方法進行檢測所得出結果與實際情況相符。

（2）精密性。

隨機取1 組對照品溶液并進行6 次進樣處理，記錄每次進樣后的內標峰、其他峰面積，計算其比值。結果表明，本項目所采取研究方法具有良好的精密性。

（3）穩定性。

先確定測定所用供試品溶液，在12h 時間內，每隔2h 進行一次進樣，如實記錄每次進樣后的峰面積。結果表明，12h 內供試品溶液具有良好的穩定性。

（4）重復性。

取3 份樣品，制備供試品溶液并完成進樣測定，對內標峰、其他峰面積的比值進行計算。

（5）回收性。

取3 份平行樣品，每份樣品均為90cm2，將蓋襯去除并剪成長條，隨后，將條狀樣品轉移到燒瓶內（燒瓶容量為250mL），確保所制備溶液的冰片、樟腦濃度分別是10.85mg/mL 以及8.95mg/mL。待上述工作告一段落，盡快對供試品溶液進行制備并測定不同成分含量，具體做法如下：取2 份平行樣品，按照上述方法對實驗所需供試品溶液進行制備，計算樣品冰片和樟腦的含量，并根據測定結果確定回收率。

3 結果討論

3.1 鑒別TLC

市面上常見的蒼術主要分為北蒼術、茅蒼術兩類，雖然兩種蒼術均含有蒼術酮以及蒼術素，但蒼術素濃度偏低，極易出現檢測結果為零的情況。分析薄層色譜可知，本次抽檢樣品中，共有7 組樣品有明顯的蒼術素斑點，而剩余樣品并沒有出現斑點，為解決該問題，研究人員決定調整點樣量，將點樣量增加到10μL，對比經過調整的樣品和蒼術樣品能夠發現，增加點樣量后，仍有2 組樣品沒有出現斑點，剩余1 組樣品則出現了和偽品蒼術相同的蒼術素斑點，由此可見，蒼術素斑點顏色主要取決于投料量、飲片質量和生產工藝[5]。

分析白芷薄層可知，僅有1 組樣品沒有出現和對照組相同的斑點，剩余樣品均有黃色斑點，這表示本次抽檢樣品中有9 組樣品滿足生產要求。在這9 組樣品中，有1 組樣品和其他樣品存在明顯區別，還有2 組樣品存在斑點顏色偏淺的情況，導致該情況出現的原因是不同供貨商的原料質量、投料標準以及所采用生產工藝均有所不同。

3.2 測定含量

3.2.1 鹽酸苯海拉明

麝香壯骨膏產品所含鹽酸苯海拉明能夠抑制患者的過敏反應[6]。本項目中，研究人員選擇按照法定標準，對不同樣品所含該物質濃度進行測定，測定所用方法為HPLC，即將液體作為流動相，通過輸液系統將不同流動相注入對應色譜柱，待柱內成分完全分離，再利用檢測器完成后續檢測。該方法具有一廣四高的特點，一廣是指適用范圍廣，四高則是指效能高、靈敏性高、高壓以及高速。結果表明，研究所抽取樣品該成分的濃度均在0.0013～0.101mg/cm2，平均濃度是0.051mg/cm2。由此可見，不同供貨商所提供產品的鹽酸苯拉海明濃度均有所不同，少數供貨商所提供產品成分并不符合處方要求?？紤]到該物質極易受到外界因素影響，長期處在熱、光和濕的環境下，有較大概率發生氧化降解反應，進而析出二苯酮，在生產期間，供貨商應嚴格控制該成分的用量，除特殊情況外，其濃度均處在0.048～0.07mg/cm2。本次抽檢樣品中，共有6 組樣品不符合該要求。

3.2.2 揮發成分

麝香壯骨膏含有多種揮發油類成分，既包括本文所討論的冰片、樟腦，同時還有水楊酸甲酯和薄荷腦，上述成分均能夠起到消炎、鎮痛的作用。本文所提出方法可同時測定不同揮發成分濃度，其中，樣品冰片濃度處于0.091～0.334mg/cm2，平均濃度是0.193mg/cm2，樣品樟腦濃度則處在0.075～0.307mg/cm2，對應平均值是0.166mg/cm2。

由此可見，不同供貨商所提供產品的揮發成分含量不盡相同，產品功效和質量也存在明顯差別。生產期間，應對投料量嚴格控制，根據實際情況調整生產工藝，盡量避免揮發成分由于加熱而隨著溶媒蒸發。如果條件允許，應加大對揮發成分加以控制的力度，在改善產品質量的同時，使各供貨商所提供產品所表現出穩定性及均一性達到預期[7]。法定標準明確指出，樟腦含量不得低于0.12mg/cm2，其含量限度值能夠達到投料的40%左右，對應冰片含量同樣應當達到0.12mg/cm2或以上。本次抽檢樣品中，共有2 組樣品的樟腦含量不符合要求，1 組樣品的冰片含量不符合要求。

4 結語

麝香壯骨膏所采取檢驗標準相對簡單，既無法達到檢驗要求，又無法起到控制產品質量的作用。鑒于此，研究人員決定參考現行檢驗標準，對產品所含蒼術、鹽酸苯拉海明等成分進行鑒定，結果表明，該方法能夠有效控制產品質量，確保產品發揮出應有功效，可以大范圍推廣。