初診系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清Smad特異性E3泛素蛋白連接酶1及Smad1水平分析

王妍，周淑紅，2，張凱，梁劉娜，陳英，楊曉蓉，郭莉江

1 甘肅中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院（甘肅省人民醫(yī)院），蘭州 730000；2 甘肅省人民醫(yī)院免疫風(fēng)濕科；3 河西學(xué)院附屬?gòu)堃慈嗣襻t(yī)院老年病科

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種以自身抗體（如抗dsDNA、抗sm 抗體等）存在為特征的自身免疫性疾病，可導(dǎo)致免疫復(fù)合物的形成和多器官炎癥反應(yīng)［1］。狼瘡腎炎是SLE 累及腎臟引起的免疫復(fù)合物沉積型腎小球腎炎。半數(shù)以上的SLE患者有腎臟受累［2］，從病理學(xué)角度看，狼瘡腎炎的發(fā)病率近100%［3］。Smad 特 異 性E3 泛 素 蛋 白 連 接 酶1（Smurf1）位于染色體7Q22.1，是神經(jīng)前體細(xì)胞發(fā)育下調(diào)表達(dá)因子4家族成員之一，在許多組織中表達(dá)，參與調(diào)節(jié)不同的生理過(guò)程［4］。泛素化異常可導(dǎo)致免疫系統(tǒng)紊亂及炎癥反應(yīng)的發(fā)生。有研究表明，Smurf1通過(guò)增強(qiáng)泛素化和促進(jìn)蛋白酶體降解信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活子1（STAT1）使干擾素信號(hào)失控而導(dǎo)致自身免疫性疾病［5］。Smurf1 在腫瘤壞死因子α（TNF-α）誘導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化發(fā)展中起關(guān)鍵作用，參與腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)展［6］。Smad1 蛋白是骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）/Smads 信號(hào)通路中的重要分子之一，BMP 信號(hào)通路在造血過(guò)程、免疫調(diào)節(jié)過(guò)程及血液系統(tǒng)疾病、自身免疫疾病、感染的發(fā)生中發(fā)揮調(diào)控作用［7］。Smurf1 是BMP 信號(hào)通路中Smad1 和Smad5的E3 泛素連接酶，通過(guò)泛素化和降解Smad1/5 來(lái)調(diào)節(jié)骨形成［5］。上述研究提示，Smurf1 與Smad1 有著密切的聯(lián)系。但是對(duì)于Smurf1、Smad1 與SLE 疾病過(guò)程的關(guān)系，目前研究甚少。因此，本研究通過(guò)觀察初診SLE 患者血清Smurf1、Smad1 水平變化，探討Smurf1、Smad1 水平與SLE 臨床表現(xiàn)、炎癥反應(yīng)指標(biāo)及自身抗體水平等資料的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇2020 年6 月—2021 年4 月于甘肅省人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科治療的初診SLE 患者36 例納入病例組，患者均為女性，年齡16 ～ 61（35.6 ± 12.3）歲；診斷符合2019年歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟/美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)SLE 分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)［8］；初次發(fā)病，未接受治療；血液系統(tǒng)受累（WBC＜4.0×109/L和/或Hb＜110 g/L、PLT＜100×109/L）29 例，腎臟系統(tǒng)受累22例（持續(xù)性尿蛋白超過(guò)0.5 g/24 h或尿蛋白+++以上和/或血尿、管型尿，伴或不伴血清肌酐升高）。選擇同期健康體檢者36 例納入對(duì)照組，年齡25 ～ 52（41.4 ± 9.2）歲，均為女性，均無(wú)風(fēng)濕免疫性疾病、心血管疾病、血液系統(tǒng)疾病、代謝性疾病、惡性腫瘤、感染性疾病、肝腎功能不全等病史。兩組研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)。本研究獲醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理審查批號(hào)2020-169）。

1.2 血清Smurf1、Smad1 檢測(cè) 取兩組清晨空腹血，抽取約2 mL 靜脈血于枸櫞酸抗凝管中，使血液與抗凝劑充分混勻，2 h 內(nèi)以3 000 g 離心10 min，在超凈工作臺(tái)中用移液槍吸取上清至無(wú)菌EP管內(nèi)，做好標(biāo)記，凍存于-80 ℃冰箱中。采用ELISA 法檢測(cè)血清中的Smurf1、Smad1，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)操作步驟完成。

1.3 臨床資料收集 收集病例組實(shí)驗(yàn)室檢查資料，包括炎癥相關(guān)指標(biāo)［C 反應(yīng)蛋白（CRP）、白細(xì)胞介素（IL）6、紅細(xì)胞沉降率（ESR）］、血常規(guī)指標(biāo)（WBC、Hb、PLT）、腎功能指標(biāo)（血肌酐、尿素氮）、免疫功能指標(biāo)（補(bǔ)體C3、C4和免疫球蛋白IgG、IgA、IgM）、自身抗體指標(biāo)（抗核抗體、抗dsDNA 抗體、抗Sm 抗體、抗SSA、抗SSB）。根據(jù)疾病活動(dòng)指數(shù)（SLEDAI）對(duì)SLE患者疾病活動(dòng)度程度進(jìn)行評(píng)分，＞14 分為重度、10 ～ 14分為中度、＜10分為輕度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料采用Shapiro-Wilk 法檢驗(yàn)正態(tài)性，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Pearson 直線相關(guān)分析法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清Smad1、Smurf1 水平比較 病例組血清Smurf1、Smad1水平分別為（44.49 ± 3.62）、（24.66 ± 1.31）ng/mL，對(duì)照組分別為（40.39 ± 6.33）、（22.62 ± 2.70）ng/mL。病例組血清Smurf1、Smad1水平高于對(duì)照組（P均＜0.05）。

2.2 病例組血清Smurf1、Smad1 與疾病活動(dòng)指數(shù)、炎癥指標(biāo)、血常規(guī)指標(biāo)、腎功能指標(biāo)、免疫功能指標(biāo)的相關(guān)性 病例組血清Smurf1、Smad1 與SLEDAI 評(píng)分、CRP、IL-6、ESR、WBC、Hb、血肌酐、尿素氮、補(bǔ)體C4、IgG、IgA、IgM均無(wú)相關(guān)性，血清Smurf1與補(bǔ)體C3、PLT呈負(fù)相關(guān)（r分別為-0.529、-0.625，P均＜0.05），與血清Smad1 呈正相關(guān)（r=0.719，P＜0.05）；血清Smad1與PLT呈負(fù)相關(guān)（r=-0.673，P＜0.05）。

2.3 不同器官受累情況及自身抗體水平的SLE 患者血清Smurf1、Smad1 水平比較 血液系統(tǒng)受累的SLE患者血清Smurf1水平高于無(wú)血液系統(tǒng)受累者（P＜0.05）。詳見(jiàn)表1。

表1 不同器官受累情況及自身抗體水平的SLE患者血清Smurf1、Smad1水平比較（ng/mL，± s）

表1 不同器官受累情況及自身抗體水平的SLE患者血清Smurf1、Smad1水平比較（ng/mL，± s）

注：與無(wú)血液系統(tǒng)受累者相比，*P＜0.05。

臨床資料抗dsDNA 陽(yáng)性 陰性抗Sm 陽(yáng)性 陰性抗SSA 陽(yáng)性 陰性抗SSB 陽(yáng)性 陰性血液系統(tǒng)受累 有 無(wú)腎臟受累 有 無(wú)尿蛋白 陽(yáng)性 陰性n Smurf1 Smad1 18 18 43.93 ± 4.04 45.05 ± 3.32 24.76 ± 1.78 24.56 ± 0.68 11 25 43.57 ± 4.52 44.91 ± 3.29 24.50 ± 1.72 24.74 ± 1.17 27 9 44.39 ± 3.85 44.78 ± 3.31 24.71 ± 1.47 24.43 ± 0.72 9 27 42.14 ± 3.80 45.27 ± 3.35 24.98 ± 1.29 23.73 ± 0.95 29 7 45.48 ± 3.19*40.21 ± 1.78 24.73 ± 1.29 24.37 ± 1.27 22 14 44.49 ± 3.24 44.48 ± 4.51 24.85 ± 1.42 24.35 ± 1.15 24.95 ± 1.49 24.16 ± 1.10 16 20 45.33 ± 3.53 43.79 ± 4.43

3 討論

SLE 的多器官損傷是由自身抗體和免疫復(fù)合物介導(dǎo)的免疫性反應(yīng)失調(diào)所致。輔助性T細(xì)胞（Th）17產(chǎn)生的IL-17 參與SLE 的發(fā)病過(guò)程并與疾病活動(dòng)度相關(guān)［1］。狼瘡腎炎是SLE 患者最常見(jiàn)的臟器受累并發(fā)癥，同時(shí)也是不良預(yù)后高危因素。Smurf1 介導(dǎo)的蛋白質(zhì)降解過(guò)程在多種細(xì)胞生物過(guò)程中起重要作用。腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子參與到炎癥反應(yīng)及免疫反應(yīng)過(guò)程中。Smurf1通過(guò)泛素化進(jìn)一步調(diào)控IL-17 及NF-κB 活性從而參與炎癥反應(yīng)［9-10］。有研究認(rèn)為，泛素化蛋白Smurf1 參與了腎纖維化的發(fā)生［11-13］，Smurf1持續(xù)高表達(dá)使Smad7蛋白泛素化降解而導(dǎo)致受體調(diào)節(jié)型Smad 蛋白表達(dá)上調(diào)，最終引起腎纖維化［12］。Smurf1能夠靶向泛素化和降解STAT1，是干擾素β信號(hào)的負(fù)反饋調(diào)節(jié)因子［5］。這些研究結(jié)果提示，Smurf1可能在SLE發(fā)病機(jī)制中起重要作用。

本研究結(jié)果顯示，SLE 患者血清Smurf1 水平明顯高于對(duì)照組，且與PLT 呈負(fù)相關(guān)；此外，合并血液系統(tǒng)損害的SLE患者血清Smurf1水平也高于無(wú)血液系統(tǒng)受累的患者，這提示如果SLE 患者血清Smurf1水平增高，要警惕PLT 減少。有研究顯示，受體型Smad-Runt 相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子信號(hào)通路可能通過(guò)調(diào)控Smurf1表達(dá)從而調(diào)節(jié)造血細(xì)胞功能［14］。一項(xiàng)多中心大樣本研究顯示，補(bǔ)體水平下降的SLE 患者WBC、Hb、PLT較正常組降低［15］。本研究結(jié)果亦顯示，血清Smurf1水平與補(bǔ)體C3呈負(fù)相關(guān)。補(bǔ)體能夠促進(jìn)血小板活化并啟動(dòng)促炎反應(yīng)，補(bǔ)體水平紊亂可引起血小板過(guò)度激活及減少［16］。有學(xué)者認(rèn)為，低C3水平與SLE疾病活動(dòng)度及腎臟損害相關(guān)［17］，這進(jìn)一步提示Smurf1與SLE患者免疫炎癥和疾病活動(dòng)具有一定相關(guān)性。

Smad1 蛋白參與誘導(dǎo)BMP 信號(hào)通路。BMP 在胚胎發(fā)育及維持多種組織器官正常功能方面起著關(guān)鍵作用，其能夠促進(jìn)T 細(xì)胞增殖和活化，促進(jìn)Th17分化［18］。有學(xué)者在類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)研究中也觀察到Smad1增高與滑膜成纖維細(xì)胞的侵襲能力密切相關(guān)［19］。本研究結(jié)果顯示，SLE 患者血清Smad1 水平高于對(duì)照組，盡管Smad1水平與補(bǔ)體C3無(wú)相關(guān)性，但是Smad1與Smurf1呈正相關(guān)，與PLT呈負(fù)相關(guān)，提示Smad1 作為免疫炎癥反應(yīng)的標(biāo)志，在自身免疫疾病中發(fā)揮著重要作用。

結(jié)合上述研究結(jié)果，我們認(rèn)為，血清Smurf1、Smad1 水平對(duì)于SLE 患者器官損害和血小板減少具有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值。但由于本研究納入樣本量較少，血清Smurf1、Smad1 水平與腎臟系統(tǒng)相關(guān)指標(biāo)及SLEDAI評(píng)分的相關(guān)性仍有待后續(xù)研究。