不同微生物檢驗法對念珠菌性陰道炎患者陰道分泌物的檢驗效果對比

吳曉玲

念珠菌性陰道炎是成年女性中常見的婦科疾病,特別是近些年因為激素類藥物與抗生素的廣泛使用,使得臨床很多真菌都出現耐藥,導致各類真菌感染的發病率逐年升高。很多患者自身對真菌感染和治療都缺乏必要的認識,自行購買的抗真菌藥物不具有針對性,這就導致治療中很容易出現真菌感染性病癥反復發作,進而導致治療難度增加［1］。本文主要比較革蘭染色法、細菌培養法、PCR檢測法檢驗念珠菌性陰道炎患者陰道分泌物的效果差異,并以常規病理診斷為金標準,報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020年4月～2021年6月到本院進行治療的145例疑似念珠菌性陰道炎患者作為研究對象,其中已婚83例、未婚62例,年齡22～43歲、平均年齡(35.38±8.28)歲,病程1～14個月、平均病程(7.67±1.35)個月,發病至入院時間1～5 d、平均發病至入院時間(2.41±0.43)d。符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》標準,患者在《知情同意書》上簽字。

1.2 納入及排除標準

1.2.1 納入標準 ①患者自覺存在陰道瘙癢、白帶異常等相關癥狀；②患者具有進行陰道病原微生物檢驗的條件；③所有患者在入院前2周之內均未服用過抗生素等相關藥物。

1.2.2 排除標準 ①急性生殖道炎癥反應；②其他嚴重婦科疾病；③合并嚴重心臟、肝臟、腎臟器質性病變；④惡性腫瘤、腫瘤遠處轉移；⑤嚴重精神類疾病、溝通交流障礙；⑥同期參與其他研究,并存在對本文研究結果產生影響的行為和體征。

1.3 檢驗方法

1.3.1 陰道分泌物采集 在標本采集前1 d,告知研究對象避免性生活,不要盆浴。各項檢查均堅持無菌操作。根據檢查目的不同,采集不同部位(宮頸管口、陰道深部、陰道穹窿后部等)的陰道分泌物,收集待測。

1.3.2 革蘭染色法 將標本均勻涂抹在潔凈的載玻片中央,自然風干或通過火焰2～3次固定。標本干燥后,滴加草酸銨結晶紫溶液,染色1 min。用流水緩慢沖洗,吸水紙吸干。滴加碘液,染色1 min,水洗。95%乙醇脫色,待無紫色液體流出立即水洗。番紅復染3～5 min,水洗,鏡檢。若鏡下可見革蘭陽性濃染的卵圓形孢子或假菌絲即可判定念珠菌。

1.3.3 細菌培養法 將樣本浸入無菌生理鹽水中,接種環劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂平板,35℃培養24～ 48 h。如出現表面光滑、有濃酵母味的乳白色菌落,選取典型菌落接種念珠菌顯色平板。白色念珠菌、光滑念珠菌、熱帶念珠菌和克柔念珠菌分別呈現為綠色、紫色、藍灰色和粉紅色。

1.3.4 PCR檢測法 ①待檢樣品接種于沙氏葡萄糖肉湯培養基,35～37℃培養48 h。②選取3～5個典型菌落溶于1 ml無菌生理鹽水中,5000 r/min離心5 min,沉淀加入核酸提取試劑盒中提取菌體核酸。③PCR擴增：選取25 μl擴增體系(10 倍濃度PCR緩沖液2.5 μl,10 mmol dNTP混合液2.5 μl,5 U/μl Taq I聚合酶0.2 μl,25 μmol/L SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2各0.5 μl,核酸提取液1 μl,超純水補至25 μl),擴增參數按常規設置(預變性95℃ 5 min；變性95℃ 30 s,退火58℃ 30 s,延伸72℃ 1 min,擴增30～35個循環；72℃延伸5 min),并設置陰陽對照。④電泳：將PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳。⑤紫外凝膠成像儀觀察：若出現235 bp的目的條帶,即為念珠菌陽性。

1.3.5 病理診斷 對所有采集的分泌物首先進行酸堿檢驗,正常值為4.5～5.5,如果pH值明顯升高則表明存在菌群聚集,為可疑陰道炎癥。潔凈度檢查以顯微鏡觀察標本的桿菌、球菌、上皮細胞和白細胞的數量等,潔凈度為1～2度說明正常,3～4度說明異常。常規進行滴蟲、線索細胞的檢查。實施真菌檢測時,如果鏡下發現直徑為3～5 μm卵圓形孢子,懷疑為白色念珠菌,然后對該標本進行胺試驗,結果陽性即確認念珠菌感染。

1.4 觀察指標及判定標準 統計革蘭染色法、細菌培養法、PCR檢測法檢出結果和病理診斷結果,以病理診斷作為金標準,比較革蘭染色法、細菌培養法、PCR檢測法診斷念珠菌性陰道炎的陽性預測值、陰性預測值、靈敏度、特異度、準確度、約登指數、誤診率、漏診率［2］。陽性預測值=真陽性/(真陽性+假陽性)×100%；陰性預測值=真陰性/(假陰性+真陰性)×100%；靈敏度=真陽性/(真陽性+假陰性)×100%；特異度=真陰性/(假陽性+真 陰性)×100%；準確度=(真陽性+真陰性)/總例數× 100%；約登指數=(靈敏度+特異度)-1；誤診率=假陽性/(假陽性+真陰性)×100%；漏診率=假陰性/(真陽性+假陰性)×100%。

1.5 統計學方法 采用SPSS26.0統計學軟件處理數據。計數資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 革蘭染色法、細菌培養法、PCR檢測法和病理診斷結果分析 病理診斷檢出陽性141例,陰性4例；細菌培養法檢出陽性134例,陰性11例；革蘭染色法檢出陽性136例,陰性9例；PCR檢測法檢出陽性 135例,陰性10例。見表1。

表1 革蘭染色法、細菌培養法、PCR檢測法和病理診斷結果分析(n)

2.2 革蘭染色法、細菌培養法、PCR檢測法對念珠菌性陰道炎的診斷效能比較 細菌培養法診斷念珠菌性陰道炎的陽性預測值為98.51%、陰性預測值為18.18%、靈敏度為93.62%、特異度為50.00%、準確度為92.41%、約登指數為0.4362、誤診率為50.00%、漏診率為6.38%；革蘭染色法診斷念珠菌性陰道炎的陽性預測值為98.53%、陰性預測值為22.22%、靈敏度為95.04%、特異度為50.00%、準確度為93.79%、約登指數為0.4504、誤診率為50.00%、漏診率為4.96%；PCR檢測法診斷念珠菌性陰道炎的陽性預測值為98.52%、陰性預測值為20.00%、靈敏度為94.33%、特異度為50.00%、準確度為93.10%、約登指數為0.4433、誤診率為50.00%、漏診率為5.67%。三種檢驗方法診斷念珠菌性陰道炎的陽性預測值、陰性預測值、靈敏度、特異度、準確度、約登指數、誤診率、漏診率比較,差異無統計學意義(P＞0.05)。見表2。

表2 革蘭染色法、細菌培養法、PCR檢測法對念珠菌性陰道炎的診斷效能比較

3 討論

臨床研究認為［3］導致女性出現陰道炎的主要病原體包括細菌、滴蟲和真菌,而真菌感染當中主要以念珠菌感染為主,這是婦科疾病當中的常見表現類型。念珠菌性陰道炎在發病時會導致患者出現嚴重的外陰瘙癢和灼燒感,陰道分泌物存在豆腐渣樣的異味,隨著病情不斷進展,會導致患者出現心絞痛和尿痛等主要表現［4,5］。這種病情十分頑固,遷延不愈,而且容易反復發作,因此很容易給患者的正常生活和工作帶來較大的影響［6,7］。

長時間的炎癥容易誘發盆腔炎癥,也容易導致患者輸卵管和卵巢出現炎癥,嚴重情況下會導致患者出現宮頸糜爛與宮頸炎,甚至會對女性的身心健康產生威脅［8-10］。臨床對念珠菌性陰道炎患者要本著盡早診斷,盡早治療的原則,因此采取科學有效的方法對患者進行積極的診斷十分必要［11,12］。革蘭染色法成本低廉、操作簡單,容易在臨床上普遍推廣,但這種檢驗方法也會受到多種因素影響,從而導致檢驗過程中存在一定的誤差［13,14］。

綜上所述,革蘭染色法、細菌培養法、PCR檢測法均可以實現對念珠菌性陰道炎患者陰道分泌物的檢驗,臨床可以根據患者的實際情況靈活的選擇這三種檢驗手段。