hs-CRP、IL-6和WBC檢測對小兒呼吸道病毒感染的診斷價值

隗曉華 李文斌 高鴻博 王艷飛 曹燕玲 劉振奎

小兒呼吸系統感染是兒科較常見疾病，分為上下呼吸道感染，上呼吸道感染主要由病毒感染導致，占80%左右，少部分患兒為細菌感染或支原體、衣原體等并病原體感染，下呼吸道感染主要是細菌、病毒感染引起[1]。小兒呼吸道病毒感染診斷主要依據為病原體，但病原體檢測相對繁瑣，檢測速度較慢，不利于早期診斷，延誤治療時間。研究證實，炎性因子在小兒呼吸道病毒感染疾病進展中發揮重要作用，超敏C-反應蛋白(hypersensitive C-reactive protein，hs-CRP)是血漿中的一種C-反應蛋白，由肝臟合成，是一種全身性炎性反應急性期的非特異性標志物，對小兒呼吸道病毒感染具有一定診斷價值；白細胞介素-6(Interleukin-6，IL-6)是趨化家族的一種細胞因子，由白細胞(white blood cell，WBC)產生，在WBC間隙發揮作用，當機體發生炎性感染、免疫反應時，IL-6水平顯著升高；WBC是一類無色、球形、有核的血細胞，當機體發生感染、炎性時，其水平顯著上升[2，3]。本研究通過對我院呼吸道病毒感染患兒行hs-CRP、IL-6、WBC檢測，探討對小兒呼吸道病毒感染的診斷價值，報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 回顧性分析我院2020年9月至2022年2月收治的50例呼吸道病毒感染患兒為研究對象(病毒感染組)，其中男30例，女20例；年齡5個月～8歲，平均年齡(4.36±0.22)歲;病程2～8 d，平均病程(6.12±0.25)d；另選50例同期健康兒童為對照組，男28例，女22例；年齡6個月～8歲，平均年齡(4.42±0.24)歲。2組兒童基本資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。本研究經醫學倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準：①參照《急慢性咽炎》[4]、《實用小兒呼吸病學》(第2版)[5]呼吸道疾病、支氣管、肺部感染等診斷標準，患兒有頭痛、發熱、咳嗽、咳痰、呼吸困難等癥狀；② 2組兒童家屬知曉并同意本研究。

1.2.2 排除標準：①存在先天性心臟病和(或)嚴重肝腎等重要臟器疾病者；②存在肺部器質性病變者；③伴凝血功能障礙者；④存在惡性腫瘤性疾病者；⑤免疫功能較正常同齡兒低下或缺陷者；⑥于研究開始2周內進行過抗感染治療且無法配合靜脈采血者。

1.3 方法 取患兒空腹血3 ml，以3 500 r/min離心10 min分離血清。

1.3.1 降鈣素原(PCT)檢測：采用電化學發光免疫分析儀檢測。

1.3.2 血清淀粉樣蛋白A(SAA)檢測：采用干式熒光免疫分析儀AFS2000A設備檢測，試劑盒為南京諾唯贊醫療科技有限公司。

1.3.3 WBC檢測：使用電阻抗法檢測WBC水平。

1.3.4 hs-CRP檢測：采用韓國Boditech Med inc公司生產i-CHROMA Reader免疫熒光分析儀檢測。

1.3.5 IL-6檢測：取上清，采用上海紀寧IL-6檢測試劑盒(酶聯免疫法)檢測，將試劑盒取出后恢復至室溫，設置待測樣本、陰性對照、標準品，洗板3次加入100 μl酶標本，在37 ℃溫育1 h后棄去液體，甩干，加入洗滌液，靜置30 s后棄去液體，反復5次，拍干，加入顯色劑A 50 μl，顯色劑B 50 μl，混勻后在37 ℃避光顯色10 min，加入終止液50 μl，混勻后在450 nm下測定各孔吸光度數值，在白色背景下觀察顯色情況，陽性為藍色，陰性為無色。

1.3.6 D二聚體檢測：采集的靜脈血加入枸櫞酸鈉抗凝，分離血漿，采用上海初態生物的人D二聚體ELISA試劑盒檢測，將試劑盒取出后恢復到室溫，設置測樣本、陰性對照、標準品孔，樣本稀釋液40 ml，每孔加100 ml辣根過氧化物酶標記的檢測抗原，在37℃溫育1 h后棄去液體，甩干，加入洗滌液，靜置1 min后棄去液體，反復5次，拍干，每孔加顯色劑A 50 ml，顯色劑B 50 ml，混勻后在37℃避光顯色15 min，加入終止液50 ml，在450 nm下測定各孔吸光度數值，計算濃度。

1.4 觀察指標

1.4.1 實驗室檢測：比較2組兒童hs-CRP、IL-6、D-二聚體、PCT、SAA、WBC水平。

1.4.2 2組一般資料比較，包括性別、年齡、出生方式、居住地、早產史、有無哮喘史、用力肺活量、第1秒用力呼氣容積，并采用安徽FGC-A+肺功能測試儀檢測用力肺活量、第1秒用力呼氣容積。

1.4.3 Logstic多因素分析:影響小兒呼吸道病毒感染的危險因素。

1.4.4 ROC曲線：分析hs-CRP、IL-6、D-二聚體及聯合檢測小兒呼吸道病毒感染的診斷價值并繪制ROC曲線圖。

2 結果

2.1 2組一般資料比較 病毒感染組居住農村、有早產史、哮喘史、吸二手煙、多次使用抗菌藥物占比顯著高于對照組(P<0.05)。2組間性別比、年齡、出生方式、用力肺活量、第1秒用力呼氣容積無差異(P>0.05)。見表1。

表1 2組一般資料比較 n=50，例(%)

2.2 2組兒童hs-CRP、IL-6、D二聚體、PCT、WBC、SAA水平比較 病毒感染組hs-CRP、IL-6、D二聚體、PCT、WBC、SAA水平顯著高于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 2組兒童hs-CRP、IL-6、D二聚體、PCT、WBC、SAA水平比較

2.3 小兒呼吸道病毒感染的Logstic多因素分析 以小兒呼吸道病毒感染為因變量，以小兒一般資料里存在差異因素和IL-6、D二聚體、PCT、WBC、SAA為自變量進行二元Logstic回歸分析，結果顯示，hs-CRP、IL-6、WBC水平升高、居住農村、有早產史及哮喘史是小兒呼吸道病毒感染的危險因素(P<0.05)。見表3。

表3 小兒呼吸道病毒感染的logstic多因素分析

2.4 hs-CRP、IL-6、WBC及聯合診斷價值分析 hs-CRP、IL-6、WBC及聯合診斷小兒呼吸道病毒感染的曲線下面積AUC分別為0.644、0.885、0.617、0.923，聯合診斷AUC顯著高于單獨檢測(P<0.05)敏感度分別為92.0%、84.0%、58.0%、94.0%；特異度分別為54.0%、80.0%、74.0%、82.0%。見表4，圖1。

圖1 hs-CRP、IL-6、WBC及聯合診斷小兒呼吸道病毒感染的ROC曲線圖

表4 hs-CRP、IL-6、WBC及聯合診斷小兒呼吸道病毒感染的效能分析

3 討論

呼吸系統是一個開放性系統，直接與外界相連，環境、細菌、病毒等均可導致機體全身或呼吸系統局部防御功能降低，引發呼吸系統感染[6]。小兒呼吸道由于氣管、支氣管發育尚未成熟，相對狹窄，且黏膜血管較豐富，黏液腺分泌不足，黏液形成較少，同時呼吸道纖毛運動、清除能力較差，肺泡面積和數量較少，因而免疫力降低時，易發生呼吸道感染，誘發缺氧，長期進展演化為肺部感染，流行病學研究結果表明，兒童感性疾病發病率占小兒疾病高達40%[7]。肺部感染主要為肺實質和間質感染，由細菌、病毒感染引發，主要以肺炎形式出現，治療不及時，極有可能引發心力衰竭、敗血癥等疾病，嚴重威脅患兒生命安全。

小兒急性上呼吸道感染最為常見，在住院的患兒中，上、下呼吸道感染占所有感染60%以上，多數為肺炎，也是我國<5歲兒童第1位死亡原因[8]。 因此，對小兒呼吸道病毒感染性早期明確診斷，針對性治療，對改善患兒預后極為重要。hs-CRP是機體受到細菌、病毒等微生物入侵或機體組織受損后，由肝細胞分泌合成的蛋白，可識別侵入體內病原體及損傷細胞磷脂，激活補體系統，清除體內反應原。研究表示，當機體感染時，hs-CRP水平會明顯升高，炎性反應結束后，迅速降低，常作為特異性炎性反應標志物[9]。IL-6能加速炎性反應，對組織、器官具有一定損害，機體正常情況下，血液中IL-6含量較低，呼吸道感染后，IL-6水平快速升高，IL-6參與急性期炎性反應，激活炎性細胞，進而參與C-反應蛋白的合成，加速炎性反應[10]。D-二聚體是最簡單交聯纖維蛋白降解產物，為繼發性纖溶特有代謝物，作為凝血常規的重要監測指標，其水平高低可反映機體是否處于高凝狀態[11]。楊志梅[12]認為，D-二聚體作為診斷小兒肺部感染性疾病的指標，隨著機體炎性反應被抑制，抗凝系統恢復，D-二聚體水平逐漸恢復正常水平，可幫助醫師診斷疾病和判斷預后。PCT含有116個氨基酸，屬于一種降鈣素前肽物質，主要由甲狀腺分泌而來，健康人體中PCT分泌較少，血清含量較低，一旦出現細菌感染、膿毒癥時，PCT水平顯著上升，但發生病毒感染或自身免疫性疾病時，其水平升高不顯著，因此，常作為臨床細菌感染與病毒感染鑒別的重要指標。血常規檢查是小兒呼吸道感染疾病的基本檢查項目，其中WBC及其各項分類比例為鑒別感染類型的常規指標，但由于個體血液中WBC基礎值差異較大，且WBC基礎值易受各種因素影響，因此，單獨采用WBC用于小兒呼吸道病毒感染的診斷靈敏度和特異度較差，難以提供足夠價值信息。SAA為一類經肝臟所產生的急性時相反應蛋白，主要表達于泡沫細胞、肝細胞及脂肪細胞中，正常情況下，在血清中含量極低，當機體發生細菌或病毒感染時，水平顯著上升，甚至達到正常水平100倍左右[13]。

本研究結果顯示，呼吸道病毒感染患兒hs-CRP、IL-6、D二聚體、PCT、WBC、SAA二聚體水平顯著升高，表明感染患兒體內炎性反應加劇。韓菲等[14]研究表示，在小兒呼吸道感染性疾病中，hs-CRP水平較健康兒童高，有利于疾病的早期診斷；梁結玲等[15]研究證實，機體發生細菌感染，原本極低微量的hs-CRP含量會提高數十倍，但被病毒感染時，敏感度較弱，病毒感染患兒水平顯著低于細菌感染患兒；霍姝琦[16]研究發現細菌感染患兒IL-6水平顯著高于病毒感染患者和健康兒童，IL-6可評估呼吸道感染患兒嚴重程度，預測患者短期療效。潘晨等[17]研究表示，感染患兒IL-6水平高于正常健康兒童。宋亞娣等[18]研究發現，感染患兒IL-6水平較健康兒童高。鄧建忠等[19]在D二聚體檢測小兒肺部感染相關研究中發現，在肺部感染患兒中D二聚體水平快速上升，顯著高于健康兒童，認為D二聚體可診斷小兒肺部感染疾病，判斷肺部感染疾病類型，為患兒治療提供指導。主要原因為小兒咽部淋巴組織較成人豐富，氣管、支氣管腔相對狹窄，軟骨更軟，缺乏彈性組織，血管豐富，黏液腺分泌不足和纖毛運動差，極易引起感染，分泌物不易被排出，容易出現缺氧情況，導致血管內皮損傷，同時組織生成大量因子，激活凝血系統，使凝血系統遭受損傷，造成凝血功能障礙，引起高凝血癥。楊愛國[20]研究發現，肺炎患兒D二聚體水平顯著高于健康兒童，主要原因為兒童肺部發育不完全，呼吸道感染后炎性可阻礙機體通氣、換氣功能，造成機體缺氧。楊德平[21]研究發現，SAA在兒童早期細菌感染、病毒感染患兒體內表達明顯升高。孫志剛等研究表明，呼吸道感染患兒早期SAA水平顯著升高，提示血清SAA及SAA/CRP水平可輔助診斷感染性疾病。杜春梅等[22]將肝素結合蛋白(HBP)結合PCT應用于小兒呼吸道細菌感染診斷發現，呼吸道細菌感染患兒HBP、PCT顯著上升，HBP、PCT截斷值分別為13.78 ng/ml、0.13 ng/ml，證實HBP、PCT可應用于小兒呼吸道細菌感染診斷。張宏燕等[23]研究發現，呼吸道細菌感染患兒PCT水平顯著升高，但病毒感染患兒無顯著變化，主要原因為PCT僅應答細菌、真菌、寄生蟲感染，對病毒感染應答較弱。柏居林等[24]研究發現WBC在呼吸道感染患兒體內顯著上升。李作潔[25]研究表明，WBC診斷兒童呼吸道病毒感染的AUC為0.537，認為其存在一定價值，但需要輔助其他指標綜合判定。以上研究結果均與本研究一致。

本研究結果顯示，病毒呼吸道感染患兒中，居住農村、有早產史、哮喘史、吸二手煙、多次使用抗菌藥物患兒占比較高，且多因素回歸分析發現，居住農村，有早產史、哮喘史是小兒呼吸道病毒感染的危險因素。主要原因為小兒喉反射弱，纖毛運動功能較為缺乏，容易出現呼吸道感染，其中農村兒童生活質量相對較差，微量元素較缺乏，可能存在一些先天性疾病，因此感染風險顯著增加。此外，早產兒可能由于特殊呼吸中樞發育不成熟，體內碳酸分解為二氧化碳數量減少，出生后不能有效刺激呼吸中樞，肺泡數量較少，整體呼吸肌發育不全，出聲后咳嗽反射比較弱，同時早產兒出生后從母體內攜帶抗體較低，易出現呼吸道感染。茆儉等[26]研究認為，小兒呼吸道病毒感染一年四季均可發病，微量元素不足、早產史均是小兒呼吸道感染的危險因素。王志丹等[27]研究表示，哮喘與感染關系比較密切，小兒身體抵抗力比較差，哮喘患兒更容易繼發呼吸道感染。以上研究均與本研究相似。因此，對于農村早產且具有呼吸道病史的患兒需多加關注，加強健康知識宣教，給予充足營養。

本研究結果顯示，當小兒呼吸道病毒感染時hs-CRP、IL-6、WBC水平升高，hs-CRP、IL-6、WBC及聯合診斷小兒呼吸道病毒感染的曲線下面積AUC分別為0.644、0.885、0.617、0.923，診斷敏感度分別為92.0%、84.0%、58.0%、94.0%，特異度分別為92.0%、84.0%、58.0%、94.0%，且聯合診斷AUC顯著增大。表明三者聯合檢查可彌補單項檢查的不足，提高診斷效能。李朝輝等[28]研究表示，SAA聯合hs-CRP診斷價值更高，對小兒呼吸道感染性疾病患兒預后具有一定判定價值。本研究未對hs-CRP、IL-6、WBC水平進行動態檢測，這些指標對患兒預后有無影響，需進一步研究。

綜上所述，在小兒呼吸道病毒感染中，hs-CRP、IL-6、WBC水平呈高表達，且居住農村、有早產史及哮喘史是小兒呼吸道病毒感染的危險因素，hs-CRP、IL-6、WBC聯合檢查對小兒呼吸道病毒感染的診斷價值較高。