免疫功能檢查在卵巢功能早衰患者針灸治療中的意義

華德興 邱林果 胡春梅 肖風金

（汕頭大學醫(yī)學院附屬粵北人民醫(yī)院 廣東韶關 512026）

隨著社會快節(jié)奏地發(fā)展，女性在生活和工作方面的壓力也逐步增加，因此卵巢功能早衰發(fā)病率呈逐年上升，且有低年齡發(fā)展趨勢。由于患者常有持續(xù)性閉經、陰道干澀、性交痛、失眠盜汗、心情煩躁、情緒低落、不孕不育等特征，給患者心理、夫妻生活、家庭和睦帶來極大不良反應[1]。房 恭（房氏）調經促孕針是在其臨床實踐經驗基礎上依據(jù)中醫(yī)基礎理論開發(fā)而來，針對卵巢功能早衰的治療，目前已經廣泛推廣應用于臨床，有滿意的臨床效果[2]。

本研究計劃從CD4+T 淋巴細胞、CD8+T 淋巴細胞和B 淋巴細胞分泌的免疫球蛋白（IgA、IgM、IgG）角度來探討卵巢功能早衰患者經房氏調經促孕針治療后免疫功能變化，以期為其療效的應用價值提供理論依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2019 年2 月至2022 年5 月在粵北人民醫(yī)院經房氏調經促孕針治療卵巢功能早衰患者22 例為觀察組，另選同期在粵北人民醫(yī)院體檢人群符合卵巢早衰人員22 例為對照組。觀察組經規(guī)范房氏調經促孕針治療3 個療程，對照組做空白等待，試驗結束后繼續(xù)做針灸或其他方法治療，等待時間同觀察組等針灸治療時間。

卵巢功能早衰診斷標準：西醫(yī)診斷參照第9 版《婦產科學》，中醫(yī)診斷參照《中醫(yī)婦科學》中卵巢功能早衰的診斷標準：①年齡≤40 歲；②閉經時間≥4個月；③血清促卵泡激素（FSH）＆gt;40IU/L（檢查2 次,間隔時間1 個月以上）；④兼有以下多項或單項癥狀：腰膝酸軟，畏寒肢冷，舌淡苔白滑，面色黧黑或蒼白，脈沉弱，宮寒不孕，五更泄瀉或大便久瀉。患者年齡22～39 歲，平均（34.77±4.47）歲。

1.2 納入標準與排除標準

納入標準：（1）符合卵巢功能早衰診斷標準者。（2）年齡≥18 歲者。（3）知情同意，并且簽署知情同意書者。排除標準：（1）卵巢局部手術引起者。（2）腫瘤患者，放化療引起卵巢功能減退者。（3）服用激素、免疫抑制劑等藥物引起的卵巢功能減退者。（4）合并心血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴重原發(fā)疾病者。

1.3 治療方法

1.3.1 醫(yī)療器材及針具。 重慶蜀水儀器廠生產的特定電磁波治療器、英迪牌電子針療儀（型號KWD-8081）及東邦牌一次性使用無菌針灸針（規(guī)格：0.25×25 毫米、0.30×40 毫米、0.3×75 毫米）。

1.4.針灸方法

1.4.1 取穴。分為兩個穴位組，穴位一組包括雙本神、百會、神庭、雙肓俞、關元、雙大赫、雙卵巢、雙足三里、三陰交、雙太溪、雙太沖十一個穴位，穴位二組包括雙腎俞、雙次 兩個穴位。

1.4.2 操作。穴位一組操作順序從頭部、腹部、下肢的穴位順序。具體操作方法：肓俞雙、關元、大赫雙、卵巢雙、足三里雙、腎俞雙的穴位直刺1～1.5 寸；三陰交雙、太溪雙、太沖雙的穴位直刺0.5～1 寸；百會、本神雙、神庭的穴位向后平刺0.5～l 寸；次 雙的穴位向正中線斜下刺入第二骶后孔中2～2.5 寸。所有腧穴均要求得氣，留針30 分鐘，留針期間每隔10 分鐘以捻轉平補平瀉法行針1 次，每穴行針15 秒；穴位二組連接電針，疏密波，疏密交替持續(xù)1.5 秒，以患者耐受為度。隔天治療1 次，穴位一組與穴位二組交替使用，12 次為1 個療程，治療3 個療程共計3 個月。

1.5 性激素和免疫功能檢測

1.5.1 性激素FSH、E2的檢測。治療前和治療后分別抽靜脈血3 毫升于肝素鋰抗凝試管中，靜止30分鐘至1 小時3500 轉速/分鐘離心10 分鐘分離血漿，通過羅氏cobas800 電化學發(fā)光儀及配套試劑用電化學發(fā)光法進行檢測。

1.5.2CD4+、CD8+T 細胞檢測。治療前和治療后分別抽靜脈血2 毫升于EDTA-K2 抗凝采血管中，5000 轉速/分鐘離心30 分鐘，取上層薄膜中間層的單細胞懸液懸液100 微升（含1×106個細胞），分別加入單克隆抗體CD3、CD4、CD8，置于4℃冰箱避光染色30 分鐘,用PBS 洗滌細胞2 次后，置于2500 轉速/分鐘離心5 分鐘,棄去上清液，于沉淀細胞內加500 微升PBS，混勻，上流式細胞儀（貝克曼庫爾特及配套試劑）以CD3 為設門，將CD4+T 細胞和CD8+T細胞百分比，并計算CD4+/CD8+T 細胞比例。

1.5.3IgA、lgM、lgG 免疫球蛋白的檢測。治療前和治療后分別抽靜脈血5 毫升于干試管中，靜止30分鐘至1 小時3500 轉/ 分鐘離心5 分鐘分離血清，通過全自動生化分析儀（儀器邁瑞B(yǎng)S-2000M，試劑美康生物科技股份有限公司）用免疫比濁法進行檢測。

1.6 統(tǒng)計學分析

數(shù)據(jù)處理在SPSS 22.0 軟件上統(tǒng)計分析，其中計量資料用（）表示，組間比較應用均數(shù)t 檢驗，組內比較應用配對t 檢驗，檢驗標準以P＆lt;0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 性激素FSH、E2 檢測水平的比較

兩組在治療前FSH、E2水平差異無統(tǒng)計學意義，P＆gt;0.05；3 個療程治療后水平差異有統(tǒng)計學意義，P＆lt;0.05。觀察組治療后與治療前與比較，F(xiàn)SH 水平下降，E2水平上升，差異有統(tǒng)計學意義，P＆lt;0.05。

而對照組空白治療前后比較，F(xiàn)SH、E2變化不明顯，差異無統(tǒng)計學意義，P＆gt;0.05。見表1。

表1 兩組性激素FSH 和E2 檢測情況（）

表1 兩組性激素FSH 和E2 檢測情況（）

注：與本組治療前比較，aP＆lt;0.05；與本組治療前比較，bP＆gt;0.05。

時間組別例數(shù)FSH（IU/L）E2（pg/mL）治療前觀察組2247.17±4.2131.77±4.83對照組2245.54±3.9232.09±3.09 t 值1.3290.256 P 值0.1910.799治療后觀察組2236.93±3.67a37.96±5.05a對照組2246.17±4.70b33.05±3.40b t 值7.2573.782 P 值0.0010.001

2.2 兩組CD4+、CD8+T 細胞檢測水平比較

兩組在治療前CD4+、CD8+、CD4+／CD8+T 細胞水平差異無統(tǒng)計學意義，P＆gt;0.05；3 個月后觀察組指標均有明顯改善，CD4+、CD4+／CD8+T 細胞水平上升，CD8+T 細胞水平下降；對照組無變化，差異無統(tǒng)計學意義，P＆gt;0.05。觀察組治療后CD4+、CD4+／CD8+T 細胞水平高于對照組，CD8+T 細胞水平低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義，P＆lt;0.05。見表2。

表2 兩組CD4+、CD8+T 細胞檢測情況（）

表2 兩組CD4+、CD8+T 細胞檢測情況（）

注：與本組治療前比較，aP＆lt;0.05；與本組治療前比較，bP＆gt;0.05。

時間組別例數(shù)CD4+（%）CD8+（%）CD4+/CD8+治療前觀察組2231.97±3.5037.48±4.280.86±0.11對照組2230.73±2.7135.30±4.560.88±0.13 t 值1.3211.630.605 P 值0.1940.1110.548治療后觀察組2235.01±3.84a31.13±4.23a1.14±0.15a對照組2230.62±2.27b35.36±4.72b0.88±0.12b t 值4.623.1276.408 P 值0.0010.0030.001

2.3 兩組免疫球蛋白水平比較

治療前觀察組和對照組免疫球蛋白水平比較差異均無統(tǒng)計學意義，P＆gt;0.05。3 個月療程結束后，觀察組與對照組比較IgA、IgM、IgG 水平差異有統(tǒng)計學意義，P＆lt;0.05；觀察組IgA、IgM、IgG 水平與治療前比較均出現(xiàn)不同程度升高，差異均有統(tǒng)計學意義，P＆lt;0.05，但對照組免疫蛋白變化不明顯，差異無統(tǒng)計學意義，P＆gt;0.05。見表3。

表3 兩組免疫球蛋白檢測情況（）

表3 兩組免疫球蛋白檢測情況（）

注：與本組治療前比較，aP＆lt;0.05；與本組治療前比較，bP＆gt;0.05。

時間組別例數(shù)IgA（g/L）IgM（g/L）IgG（g/L）治療前觀察組222.07±0.711.59±0.5313.54±2.69對照組222.14±0.771.68±0.6713.89±2.74 t 值0.2930.4850.313 P 值0.7710.630.756治療后觀察組222.71±0.75a2.22±0.54a15.56±2.33a對照組222.10±0.75b1.63±0.61b13.72±2.60b t 值2.7293.4262.469 P 值0.0090.0010.018

3 討論

房 恭教授首先應用調經促孕針在早發(fā)性卵巢功能不全（POI）患者的對照研究以來[2]，而后續(xù)較多POI 患者臨床研究報道，發(fā)現(xiàn)POI 患者經治療后，性激素FSH、LH、FSH/LH 水平下調，E2、AMH 水平及AFC 數(shù)目上調，且能調整患者月經周期，使子宮內膜厚度增加，改善卵巢功能和低雌激素癥狀，調節(jié)負性情緒，提高卵子質量[3]。繼而推廣到POF 患者，臨床研究也表明，經房氏調經促孕針治療后POF 患者與POI 患者療效相當，同樣能改善血清激素水平，促進患者月經周期恢復，達到改善卵巢的功能，緩解臨床癥狀[4]。

本研究發(fā)現(xiàn)，卵巢功能早衰患者經房氏調經促孕針針刺治療后，激素FSH、E2水平有所改善，說明達到了一定的治療效果，同時CD4+T 細胞、CD4+/CD8+T 細胞檢測水平上升，CD8+T 細胞檢測下降，IgG、IgM、IgA 檢測水平有不同程度上升。以上結果表明，經針灸治療后，患者的細胞免疫和體液免疫均有所改善。由于房氏調經促孕針是組合性針灸穴位治療，具有多方面的功效。根據(jù)文獻報道，本研究推測，可能在針灸足三里、腎俞、天樞、三陰交等穴位起了免疫調節(jié)作用。

綜上所述，卵巢功能早衰患者經房氏調經促孕針治療后除了激素水平有改善外，免疫功能也有明顯改善。因此，本研究認為免疫功能檢查可為房氏調經促孕針治療效果評價提供一定的參考。