多穗金粟蘭的化學成分及其抗腫瘤活性

朱成光，張衛青，張麗萍，梁 偉 ，馮樹慧，魏美琪，黃元射，晏 晨*

1貴州中醫藥大學，貴陽 550002；2安順市人民醫院；3安順學院，安順 561000

多穗金粟蘭(ChloranthusmultistachysPei)是金粟蘭科(Chloranthaceae)金粟蘭屬(Chloranthus)植物，其葉多為四片對立，長于頂端，因此而得名“四塊瓦”，“四大天王”或者“四葉對”等，主產于我國貴州、湖南、四川等地[1]。多穗金粟蘭以根及根狀莖入藥，具有祛濕散寒、理氣活血、散瘀解毒等功效，民間廣泛用于治療瘀血腫痛、跌打骨折、腰腿痛、感冒、毒蛇咬傷、皮膚瘙癢、瘧疾、帶下癥和瘡癰等病癥[2-3]；目前研究報道多穗金粟蘭含有多種化學成分，包括倍半萜、單萜、二萜、三萜、酚類、黃酮類、香豆素、木脂素、甾體等類型。金粟蘭屬植物是近些年來國內研究的一個熱點，據文獻報道[4-9]，從該屬植物中發現的化合物結構新穎，藥理活性廣泛，可作為酶調節劑，具有抗菌、抗炎、抗腫瘤、抗HIV-1、增強免疫以及神經保護等方面的作用[10-15]。本文在前期研究的基礎上，進一步對多穗金粟蘭的化學成分進行分析，旨在發現具有抗腫瘤活性的化學成分，為更好地開發和利用這一民族藥資源奠定理論基礎。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

INOVA-400 MHz和INOVA-600 MHz超導核磁共振波譜儀(美國瓦里安公司)，TMS為內標；Waters 1525 EF高效液相色譜儀(美國Waters公司)，Waters 2998檢測器，Waters sunfire色譜柱為C18(10 mm × 250 mm，4.6 mm × 150 mm，5μm，美國Agilent公司)；JASCO P-1020旋光儀(日本 JASCO 公司)；Shimadzu UV-2401A紫外光譜儀(日本Shimadzu公司)；Bruker Tensor-27紅外光譜儀(德國Bruker公司)；Bruker HCT/Esquire質譜儀(德國Bruker公司)；Waters Autospec Premier P776質譜儀(美國Waters公司)；Sephadex LH-20(日本三菱化學公司)；RP-18反相硅膠(日本 YMC 公司)；柱層析硅膠(40～80目和300～400目，青島海洋化工廠)；硅膠GF254薄層板(50 mm × 100 mm，0.20～0.25 mm，青島海洋化工廠)；分析純三氯甲烷、丙酮(重慶川東化工集團有限公司)；其余試劑均從工業級蒸餾中獲得；10%硫酸乙醇顯色劑。

實驗所用多穗金粟蘭藥材采于貴州凱里，經中國科學院昆明植物研究所劉海洋研究員鑒定為多穗金粟蘭Chloranthusmultistachys藥材全草，標本(Assrmyy20180819-1)存放于安順市人民醫院藥劑科實驗室。

1.2 實驗方法

1.2.1 提取與分離

干燥全草多穗金粟蘭(38.0 kg)，粉碎后95%乙醇回流提取3次(3.5 h/次)。合并提取液后減壓回收至無醇味，乙酸乙酯萃取，得到乙酸乙酯部位浸膏為1.80 kg。總浸膏(1.80 kg)進行硅膠(300～400目)柱色譜，以石油醚：丙酮(50∶1→1∶1)梯度洗脫，得到了18個組分，分別為Fr.1～Fr.18。

Fr.8(108.6 g)經葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜(CHCl3∶MeOH，V/V = 1∶1)洗脫，得到3個組分(Fr.8a～8c)。Fr.8b(25.3 g)經硅膠柱色譜(石油醚-丙酮，15∶1→10∶1，V/V)、凝膠色譜、反相硅膠柱色譜，經重結晶得化合物2(10.2 mg)、化合物4(26.2 mg)、化合物7(14.3 mg)和化合物8(20.3 mg)。Fr.8c經硅膠柱色譜(石油醚-丙酮，15∶1→10∶1，V/V)和半制備液相色譜(65%乙腈-水，2 mL/min)得化合物17(tR= 9.5 min，9.3 mg)、化合物18(18.8 mg)和化合物19(21.2 mg)。

Fr.10(130.0 g)經葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜(CHCl3∶MeOH，V/V = 1∶1)洗脫，得到8個組分(Fr.10a～10h)。Fr.10c(33.3 g)經硅膠柱色譜(石油醚-丙酮，7∶1→1∶1，V/V)、凝膠色譜、反相柱層析和半制備液相色譜(50%乙腈-水，4 mL/min)反復分離純化得化合物1(tR= 14.0 min，15.3 mg)、化合物5(40.3 mg)、化合物6(1.6 g)和化合物15(3.2 g)。Fr.10e(15.7 g)經硅膠柱色譜(石油醚-丙酮，7∶1→1∶1，V/V)、凝膠色譜、反相硅膠柱色譜和半制備液相色譜(50%乙腈-水，4 mL/min)反復分離純化得化合物3(tR= 12.0 min，10.1 mg)、化合物12(27.3 mg)、13(8.7 mg)和14(10.7 mg)。

Fr.15(98.3 g)經葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜(CHCl3∶MeOH，V/V = 1∶1)洗脫，得到4個組分(Fr.15a～15d)。Fr.15b(18.3 g)經硅膠柱色譜(二氯甲烷-甲醇，100∶1→10∶1，V/V)、凝膠色譜和半制備液相色譜(50%乙腈-水，4 mL/min)分離純化得化合物9(tR= 8.0 min，10.5 mg)、10(tR= 13.5 min，7.6 mg)、11(8.0 mg)和16(8.6 mg)。

1.2.2 細胞毒性試驗

采用MTT法檢測多穗金粟蘭的化學成分對人肺癌細胞A549、人乳腺癌細胞MCF-7和人前列腺癌細胞DU-145進行細胞毒性實驗。稱取一定量的化合物1～19分別用DMSO溶解后配成30 mmol/L的儲備液，使用之前稀釋到20 μmol/L，在5% CO2，37 ℃孵育72 h后進行初篩活性，得到效果顯著的化合物。將三種腫瘤細胞分別配制成細胞懸液接種于96孔板上(100 μL/孔)，實驗將效果顯著的化合物分為五個陽性對照和濃度梯度給藥組，接種好的細胞培養板放入培養箱中培養24 h后分別加入1.25、2.5、5、10、20 μmol/L的含藥樣品溶液各100 μL，在5% CO2，37 ℃孵育72 h后，每孔加入10 μL配制好的MTT溶液(5 mg/mL，即0.5% MTT)繼續培養4 h，孵育后使用酶標儀測量OD值，并計算IC50值。

2 結果

2.1 結構鑒定

化合物1白色粉末；ESI-MS：m/z345 [M + Na]+，分子式為C20H34O3；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.63(1H，t，J= 6.6 Hz，H-14)，4.85(1H，s，H-17a)，4.48(1H，s，H-17b)，4.21(2H，s，H-15)，4.05(1H，d，J= 9.0 Hz，H-12)，3.76(1H，dd，J= 10.8，5.4 Hz，H-19a)，3.40(1H，d，J=10.8，4.2 Hz，H-19b)，2.41(1H，m，H-7a)，2.02(1H，m，H-7b)，1.99(1H，m，H-9)，1.84(1H，m，H-6)，1.82(1H，m，H-1a)，1.76(1H，d，J= 12.6 Hz，H-3a)，1.70(3H，s，H-16)，1.56(1H，m，H-11a)，1.52(1H，m，H-2)，1.43(1H，d，J= 3.6 Hz，H-11b)，1.35(1H，m，H-6)，1.26(1H，m，H-5)，1.16(1H，m，H-1b)，1.12(1H，d，J= 10.2 Hz，H-3b)，1.00(3H，s，H-18)，0.66(3H，s，H-20)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：39.2(C-1)，18.9(C-2)，38.6(C-3)，35.4(C-4)，56.2(C-5)，27.1(C-6)，38.9(C-7)，148.6(C-8)，52.6(C-9)，39.0(C-10)，30.2(C-11)，74.9(C-12)，142.3(C-13)，123.4(C-14)，59.1(C-15)，12.2(C-16)，106.8(C-17)，27.1(C-18)，65.1(C-19)，15.4(C-20)。以上數據與文獻[16]報道一致，故鑒定化合物1為(12R)-labda-8 (17),13E-dien-12,15,19-triol。

化合物2白色針晶；ESI-MS：m/z261 [M + Na]+，分子式為C15H26O2；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.35(1H，d，J= 4.8 Hz，H-8)，3.31(1H，dd，J= 12.0，4.2 Hz，H-1)，2.21(1H，m，H-11)，2.11～2.03(3H，m，H-6，H-2a)，1.90～1.84(2H，m，H-2b，H-9a)，1.75(1H，dt，J= 13.8，3.0 Hz，H-3a)，1.63～1.53(2H，m，H-3b，H-9b)，1.30(1H，dd，J= 12.0，5.4 Hz，H-5)，1.19(3H，s，H-15)，1.03(6H，dd，J= 6.6，3.0 Hz，H-12，H-13)，0.97(3H，s，H-14)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：79.9(C-1)，40.7(C-2)，39.5(C-3)，71.0(C-4)，46.2(C-5)，23.0(C-6)，141.9(C-7)，116.1(C-8)，26.7(C-9)，36.8(C-10)，35.0(C-11)，21.8(C-12)，21.2(C-13)，11.7(C-14)，29.9(C-15)。以上數據與文獻[17]報道一致，故鑒定化合物2為oplodiol。

化合物3白色粉末；ESI-MS：m/z287 [M + Na]+，分子式為C15H20O4；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.10(1H，s，H-14a)，4.93(1H，d，J= 10.8 Hz，H-6)，4.76(1H，s，H-14b)，2.40(1H，d，J= 8.4 Hz，H-3b)，2.29(1H，d，J= 13.8 Hz，H-9b)，2.10(1H，d，J= 10.8 Hz，H-5)，2.05(3H，d，J= 1.8 Hz，H-13)，1.96(1H，dd，J= 19.2，12.0 Hz，H-3a)，1.68(2H，m，H-2)，1.59(1H，s，H-1b)，1.56(1H，s，H-9a)，1.27(1H，m，H-1a)，1.04(3H，s，H-15)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：41.5(C-1)，23.2(C-2)，37.0(C-3)，145.9(C-4)，59.9(C-5)，67.3(C-6)，159.1(C-7)，103.5(C-8)，50.8(C-9)，36.9(C-10)，124.0(C-11)，171.9(C-12)，9.3(C-13)，107.2(C-14)，18.4(C-15)。以上數據與文獻[18]報道一致，故鑒定化合物3為長尾粗葉木內酯A。

化合物4無色晶體；ESI-MS：m/z329 [M + Na]+，分子式為C19H30O3；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.59(1H，s，H-14)，3.44(1H，d，J= 11.4 Hz，H-18a)，3.15(1H，d，J= 11.4 Hz，H-18b)，2.31(1H，m，H-7a)，2.11(1H，m，H-7b)，1.84(1H，m，H-9)，1.80(1H，m，H-12b)，1.72(1H，m，H-1b)，1.70(1H，m，H-12a)，1.67(2H，m，H-11)，1.53(2H，m，H-2)，1.44(1H，m，H-6a)，1.39(1H，m，H-6b)，1.33(1H，m，H-5)，1.29(3H，s，H-17)，1.28(2H，m，H-3)，1.07(1H，m，H-1a)，0.85(3H，s，H-16)，0.83(3H，s，H-19)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：38.7(C-1)，18.2(C-2)，35.3(C-3)，37.8(C-4)，47.6(C-5)，22.2(C-6)，35.5(C-7)，139.1(C-8)，50.1(C-9)，38.1(C-10)，18.3(C-11)，31.4(C-12)，42.5(C-13)，124.1(C-14)，15.5(C-16)，24.7(C-17)，72.1(C-18)，17.9(C-19)。以上數據與文獻[19]報道一致，故鑒定化合物4為ent-8(9)-pimarene-20-hydroxy-16-nor-15-oic acid。

化合物5白色粉末；ESI-MS：m/z327 [M + Na]+，分子式為C20H32O2；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.09(1H，brs，H-17a)，4.96(1H，d，J= 2.4 Hz，H-17b)，3.75(1H，m，H-15)，3.21(1H，d，J= 10.8 Hz，H-3)，2.66(1H，m，H-13)，1.97(1H，d，J= 12.0 Hz，H-14a)，1.89(1H，m，H-1)，1.66(1H，m，H-12a)，1.60(1H，m，H-12b)，1.55(1H，m，H-11)，1.55(2H，m，H-6)，1.44(1H，m，H-9)，1.40(1H，m，H-5)，1.36(1H，m，H-7)，1.01(1H，m，H-14b)，1.03(3H，s，H-20)，0.98(3H，s，H-18)，0.78(3H，s，H-19)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：38.8(C-1)，27.4(C-2)，79.0(C-3)，38.6(C-4)，54.4(C-5)，19.6(C-6)，36.4(C-7)，45.5(C-8)，46.3(C-9)，38.8(C-10)，18.1(C-11)，33.2(C-12)，40.1(C-13)，38.8(C-14)，82.4(C-15)，158.2(C-16)，105.0(C-17)，28.3(C-18)，15.5(C-19)，17.5(C-20)。以上數據與文獻[20]報道一致，故鑒定化合物5為3α,15β-dihydroxy-ent-kaur-16-ene。

化合物6無色晶體；ESI-MS：m/z341 [M + Na]+，分子式為C20H30O3；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.13(1H，s，H-17a)，5.04(1H，s，H-17b)，4.00(1H，d，J= 4.2 Hz，H-11)，3.81(1H，s，H-15)，2.67(1H，s，H-13)，2.58(3H，ddd，J= 16.2，6.0，5.4 Hz，H-2a)，2.45(3H，dt，J= 16.2，7.8 Hz，H-2b)，2.09(1H，m，H-1)，2.04(1H，m，H-12)，1.94(1H，d，J= 12.6 Hz，H-14)，1.68(1H，s，H-9)，1.14(1H，m，H-14)，1.10(3H，s，H-18)，1.03(3H，s，H-19)，0.99(3H，s，H-20)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：38.8(C-1)，33.8(C-2)，217.7(C-3)，47.0(C-4)，53.5(C-5)，21.0(C-6)，37.8(C-7)，44.4(C-8)，53.3(C-9)，36.6(C-10)，67.1(C-11)，43.0(C-12)，38.8(C-13)，35.4(C-14)，82.3(C-15)，158.0(C-16)，106.3(C-17)，27.5(C-18)，20.8(C-19)，18.0(C-20)。以上數據與文獻[21]報道一致，故鑒定化合物6為inflexarabdonin J。

化合物7白色晶體；ESI-MS：m/z223 [M + Na]+，分子式為C11H10O5；1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.86(1H，d，J= 6.0 Hz，H-4)，6.73(1H，s，H-5)，6.33(1H，d，J= 6.4 Hz，H-3)，3.89(3H，s，6-OMe)，3.89(3H，s，7-OMe)；13C NMR(100 MHz，CD3OD)δ：163.1(C-2)，116.1(C-3)，146.2(C-4)，101.1(C-5)，151.7(C-6)，141.7(C-7)，139.9(C-8)，140.0(C-9)， 115.3(C-10)，61.4(7-OMe)，56.6(6-OMe)。以上數據與文獻[22]報道一致，故鑒定化合物7為秦皮定。

化合物8棕色粉末；ESI-MS：m/z223 [M + Na]+，分子式為C11H10O5；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.59(1H，d，J= 9.6 Hz，H-4)，6.65(1H，s，H-6)，6.27(1H，d，J= 9.6 Hz，H-3)，4.08(3H，s，8-OMe)，3.94(3H，s，7-OMe)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：160.6(C-2)，111.2(C-3)，143.8(C-4)，103.2(C-5)，143.0(C-6)，144.6(C-7)，142.4(C-8)，134.5(C-9)，113.5(C-10)，56.5(7-OMe)，61.6(8-OMe)。以上數據與文獻[23]報道一致，故鑒定化合物8為6-羥基-7,8 -二甲氧基香豆素。

化合物9白色粉末；ESI-MS：m/z529 [M + Na]+，分子式為C32H30N2O4；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：7.70～7.65(4H，dd，J= 16.4，4.8 Hz，H-2′′，H-6′′，H-2′′′，H-6′′′)，7.41～7.20(10H，m，H-2，H-2′，H-3，H-3′，H-4，H-4′，H-5，H-5′，H-6，H-6′)，7.33～7.29(6H，m，H-3′′，H-3′′′，H-4′′，H-4′′′，H-5′′，H-5′′′)，6.66(1H，d，J= 5.6 Hz，8-NH)，6.57(1H，d，J= 4.4 Hz，8′-NH)，4.92(1H，dd，J= 9.2，4.4 Hz，H-8′)，4.62(1H，m，H-8)，4.54(1H，dd，J= 7.6，2.0 Hz，H-9a)，4.04(1H，dd，J= 7.6，2.0 Hz，H-9b)，3.29(1H，dd，J= 9.2，4.4 Hz，H-7′a)，3.21(1H，dd，J= 9.2，4.4 Hz，H-7′b)，3.00(1H，dd，J= 8.8，4.0 Hz，H-7a)，2.89(1H，dd，J= 9.2，5.6 Hz，H-7b)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：137.1(C-1)，135.8(C-1′)，134.2(C-1′′)，133.3(C-1′′′)，129.2(C-2，C-6)，129.3(C-2′，C-6′)，127.1(C-2′′，C-6′′)，128.9(C-2′′′，C-6′′′)，128.7(C-3，C-5)，127.0(C-3′，C-5′)，128.7(C-3′′，C-5′′)，128.4(C-3′′′，C-5′′′)，126.8(C-4)，127.4(C-4′)，131.4(C-4′′)，132.0(C-4′′′)，37.3(C-7)，37.5(C-7′)，167.4(C-7′′)，167.2(C-7′′′)，50.3(C-8)，54.5(C-8′)，65.4(C-9)，171.9(C-9′)。以上數據與文獻[24]報道一致，故鑒定化合物9為N(N′-benzoyl-S*-phenylalaninyl)-S*-phenylalaninol benzoate。

化合物10白色粉末；ESI-MS：m/z256 [M + H]+，分子式為C18H21NO2；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.70(2H，d，J= 7.8 Hz，H-2′，H-6′)，7.50～7.30(3H，m，H-3′，H-4′，H-5′)，7.30～7.27(5H，m，H-5，H-6，H-7，H-8，H-9)，6.37(1H，s，-NH)，4.37(1H，m，H-2)，3.84(1H，m，H-1a)，3.75(1H，m，H-1b)，3.03(2H，m，H-3a，H-3b)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：64.5(C-1)，53.3(C-2)，37.1(C-3)，137.5(C-4)，129.2(C-5，C-9)，128.8(C-6，C-8)，126.8(C-7)，134.4(C-1′)，126.9(C-2′，C-6′)，128.6(C-3′，C-5′)，131.6(C-6′)，168.0(C-7′)。以上數據與文獻[25]報道一致，故鑒定化合物10為N-benzoyl-L-phenylalaninol。

化合物11白色粉末；ESI-MS：m/z300 [M + H]+，分子式為C17H18NO4；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.72(2H，d，J= 7.2 Hz，H-2，H-6)，7.51(1H，t，J= 7.8 Hz，H-4′′)，7.43(2H，t，J= 7.8 Hz，H-3′′，H-5′′)，7.30(2H，t，J= 7.2 Hz，H-2′′，H-6′′)，7.13(2H，d，J= 6.6 Hz，H-3，H-5)，6.56(1H，d，J= 6.0 Hz，-NH)，5.10(1H，dd，J= 13.2，6.0 Hz，H-1′)，3.77(3H，s，OMe)，3.30(1H，dd，J= 14.4，6.0 Hz，H-2′)，3.23(1H，dd，J= 13.8，5.4 Hz，H-2′)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：127.2(C-1)，52.4(C-1′)，135.8(C-1′′)，37.9(C-2′)，128.6(C-2′′，C-6′′，C-3′，C-5′′)，127.0(C-2，C-6)，129.3(C-3，C-5)，133.9(C-4)，131.8(C-4′′)，166.8(C-7)，53.5(OMe)，172.0(COOCH3)。以上數據與文獻[26]報道一致，故鑒定化合物11為(R)-N-(1′-methoxycarbonyl-2′-phenylethyl)-4-hydroxybenzamide。

化合物12無色針晶；ESI-MS：m/z296 [M + H]+，分子式為C18H17NO3；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.53(1H，d，J= 15.6 Hz，H-3′)，7.34～7.22(6H，m，H-5，H-6，H-7，H-8，H-9，H-5′)，6.97(1H，d，J= 9.6 Hz，H-9′)，6.80(1H，d，J= 7.8 Hz，H-8′)，6.15(1H，d，J= 15.6 Hz，H-2′)，5.98(2H，s，H-1′′)，5.57(1H，s，-NH)，3.65(2H，m，H-2)，2.89(2H，m，H-3)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：40.9(C-2)，35.8(C-3)，139.0(C-4)，128.7(C-5，C-9)，128.8(C-6，C-8)，126.7(C-7)，166.1(C-1′)，118.8(C-2′)，140.9(C-3′)，129.2(C-4′)，106.5(C-5′)，148.4(C-6′)，149.1(C-7′)，108.7(C-8′)，124.0(C-9′)，101.6(C-1′′)。以上數據與文獻[27]報道一致，故鑒定化合物12為(E)-3-(benzo[d][1,3]dioxol-5-yl)-N-phenethylacrylamide。

化合物13黃色粉末；ESI-MS：m/z315 [M + H]+，分子式為C18H18O5；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：14.40(1H，s，2′-OH)，7.80(1H，d，J= 2.4 Hz，H-a)，7.79(1H，d，J= 2.4 Hz，H-b)，7.57(2H，d，J= 9.0 Hz，H-2，H-6)，6.93(2H，d，J= 8.4 Hz，H-3，H-5)，6.12(1H，d，J= 2.4 Hz，H-3′)，5.97(1H，d，J= 1.8 Hz，H-5′)，3.92(3H，s，6′-OMe)，3.86(3H，s，4-OMe)，3.84(3H，s，4′-OMe)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：128.3(C-1)，130.1(C-2，C-6)，114.3(C-3，C-5)，161.4(C-4)，106.4(C-1′)，168.4(C-2′)，93.8(C-3′)，166.0(C-4′)，91.2(C-5′)，162.4(C-6′)，55.4(4-OMe)，55.6(4′-OMe)，55.8(6′-OMe)，125.1(C-a)，142.5(C-b)，192.8(C=O)。以上數據與文獻[28]報道一致，故鑒定化合物13為flavokawain A。

化合物14白色粉末；ESI-MS：m/z453 [M + Na]+，分子式為C29H50O2；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.54(1H，s，H-4)，4.23(1H，s，H-8)，4.18(1H，d，J= 8.4 Hz，H-6)，1.28(3H，s，H-19)，0.94(3H，d，J= 4.8 Hz，H-21)，0.87(3H，m，H-27)，0.83(3H，m，H-26)，0.81(3H，m，H-29)，0.75(3H，s，H-18)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：36.8(C-1)，30.2(C-2)，68.0(C-3)，128.7(C-4)，147.7(C-5)，74.3(C-6)，42.5(C-7)，33.9(C-8)，54.3(C-9)，36.1(C-10)，20.9(C-11)，39.8(C-12)，42.5(C-13)，56.1(C-14)，24.2(C-15)，28.2(C-16)，56.1(C-17)，12.0(C-18)，21.5(C-19)，36.1(C-20)，18.7(C-21)，33.9(C-22)，26.1(C-23)，45.8(C-24)，29.1(C-25)，19.8(C-26)，19.0(C-27)，23.1(C-28)，12.0(C-29)。以上數據與文獻[29]報道一致，故鑒定化合物14為stigmast-4-ene-3β,6β-diol。

化合物15白色粉末；ESI-MS：m/z415 [M + H]+，分子式為C29H50O；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.35(1H，brd，J= 5.2 Hz，H-6)，3.53(1H，m，H-3)，1.01(3H，s，H-19)，0.92(3H，d，J= 6.4 Hz，H-21)，0.86(3H，d，J= 7.6 Hz，H-29)，0.84(3H，d，J= 6.8 Hz，H-26)，0.82(3H，d，J= 6.8 Hz，H-27)，0.68(3H，s，H-18)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：37.2(C-1)，31.9(C-2)，71.1(C-3)，2.3(C-4)，140.9(C-5)，121.4(C-6)，32.1(C-7)，31.9(C-8)，50.2(C-9)，36.5(C-10)，21.1(C-11)，39.4(C-12)，42.2(C-13)，56.4(C-14)，24.5(C-15)，25.9(C-16)，55.9(C-17)，11.9(C-18)，19.4(C-19)，36.5(C-20)，18.8(C-21)，33.9(C-22)，26.4(C-23)，46.0(C-24)，29.1(C-25)，19.3(C-26)，19.4(C- 27)，23.2(C-28)，12.1(C-29)。以上數據與文獻[30]報道一致，故鑒定化合物15為β-谷甾醇。

化合物16無色晶體；ESI-MS：m/z443 [M + H]+，分子式為C30H52O2；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.60(1H，d，J= 1.2 Hz，H-23)，5.60(1H，d，J= 1.2 Hz，H-24)，3.29(1H，m，H-3)，1.34(3H，m，H-27)，1.33(3H，m，H-26)，0.97(1H，s，H-18)，0.97(3H，s，H-29)，0.88(3H，m，H-28)，0.87(1H，m，H-21)，0.81(3H，m，H-30)，0.55(1H，d，J=4.2 Hz,H-19)，0.33(1H，d，J=4.2 Hz,H-18)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：32.0(C-1)，30.4(C-2)，78.9(C-3)，40.5(C-4)，47.1(C-5)，21.1(C-6)，28.1(C-7)，48.0(C-8)，19.3(C-9)，26.0(C-10)，26.1(C-11)，35.6(C-12)，45.3(C-13)，48.9(C-14)，32.8(C-15)，26.5(C-16)，52.0(C-17)，18.1(C-18)，30.4(C-19)，36.4(C-20)，18.3(C-21)，39.0(C-22)，139.4(C-23)，125.6(C-24)，70.8(C-25)，30.0(C-26)，29.9(C-27)，19.3(C-28)，14.0(C-29)，25.5(C-30)。以上數據與文獻[31]報道一致，故鑒定化合物16為cycloart-23-ene-3β,25diol。

化合物17白色粉末；ESI-MS：m/z171 [M + H]+，分子式為C10H18O2；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.57(1H，m，H-2)，4.04(1H，m，H-6)，2.13～2.10(1H，m，H-3a)，2.03(1H，d，J= 13.8，2.4 Hz，H-3b)，1.73(3H，s，H-7)，1.71～1.63(2H，m，H-5)，1.44～1.25(1H，m，H-4)，1.21(3H，s，H-9)，1.18(3H，s，H-10)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：134.4(C-1)，125.3(C-2)，27.7(C-3)，38.8(C-4)，32.6(C-5)，68.6(C-6)，20.8(C-7)，72.2(C-8)，27.1(C-9)，26.3(C-10)。以上數據與文獻[32]報道一致，故鑒定化合物17為水合蒎醇。

化合物18白色針晶；ESI-MS：m/z169 [M + H]+，分子式為C8H8O4；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.55(1H，m，H-2)，7.55(1H，m，H-6)，6.84(1H，m，H-5)，3.89(3H，s，3-OMe)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：123.1(C-1)，113.8(C-2)，152.7(C-3)，148.7(C-4)，115.8(C-5)，125.3(C-6)，170.0(C=O)，56.4(3-OMe)。以上數據與文獻[33]報道一致，故鑒定化合物18為香草酸。

化合物19無色針晶；ESI-MS：m/z149 [M + H]+，分子式為C9H8O2；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.81(1H，d，J= 15.6 Hz，H-7)，7.57(2H，dd，J= 6.0，1.8 Hz，H-2，H-6)，7.42(3H，dd，J= 5.4，2.4 Hz，H-3，H-4，H-5)，6.47(1H，d，J= 16.0 Hz，H-8)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：134.0(C-1)，128.3(C-2，C-6)，129.0(C-3，C-5)，130.8(C-4)，147.1(C-7)，117.3(C-8)，172.5(C-9)。以上數據與文獻[34]報道一致，故鑒定化合物19為肉桂酸。

化合物1～19的化學結構如圖1所示。

圖1 化合物1～ 19的化學結構Fig.1 Chemical structures of compounds 1-19

2.2 細胞毒活性

化合物1～19進行細胞毒活性測試結果見表1，與陽性對照紫杉醇(taxol)相比，結果顯示，化合物17對三種腫瘤細胞均表現出不同程度細胞毒活性，其中對人肺癌細胞A549的抑制活性最強，IC50值為5.74 μmol/L，對人乳腺癌細胞MCF-7表現出中等細胞毒活性，IC50值為8.23 μmol/L，并且對人前列腺癌細胞DU-145也表現出中等細胞毒活性，IC50值為8.72 μmol/L；化合物13和16對人肺癌細胞A549表現出中等細胞毒活性，IC50值分別為11.67 μmol/L和16.25 μmol/L；其它化合物對3種測試腫瘤細胞無明顯細胞毒活性。

表1 化合物1～19的體外細胞毒活性測試結果Table 1 Cytotoxic activity in vitro of compounds 1-19 )

3 結論

本文主要研究了多穗金粟蘭的化學成分及抗腫瘤作用，應用半制備液相色譜、葡聚糖凝膠Sephadex LH-20等色譜分離手段，從多穗金粟蘭乙酸乙酯部位中分離得到19個化合物，包括倍半萜類、二萜類、香豆素類、甾體類及其他化合物。除化合物3、12～18外，其余化合物均為首次從多穗金粟蘭植物中分離得到。

細胞毒活性測試表明，化合物17對人乳腺癌細胞株MCF-7、人前列腺癌細胞DU-145和人肺癌細胞A549均表現出不同程度細胞毒活性，其中對人肺癌細胞A549表現出較強的抑制活性，IC50值為5.74 μmol/L，化合物13和16對人肺癌細胞A549表現出中等細胞毒活性，IC50值分別為11.67 μmol/L和16.25 μmol/L。本文在前期還針對多穗金粟蘭的化學成分進行了抗HIV-1細胞毒活性的檢測，遺憾的是檢測結果化合物1～19均無細胞毒性，結合文獻報道多穗金粟蘭的化學成分多數具有抗炎和抗瘧活性，后期可針對所分離的化合物進一步展開抗炎和抗瘧活性的篩選。

綜合本課題組前期對多穗金粟蘭中化學成分進行抗人前列腺癌細胞PC3和LNcap、人肺癌細胞A549、人慢性髓原白血病細胞K562和人紅白細胞白血病細胞HEL[35]研究發現，其單體化合物導致細胞周期阻滯抑制癌細胞增殖。因此，多穗金粟蘭在抗腫瘤方面具有很大的研究前景，但目前藥理活性的研究主要集中在單體化合物的體外活性篩選，而體內藥效評價、作用機制及構效關系的研究甚少，可進一步探索單體化合物的體內藥效評價，這豐富了多穗金粟蘭植物的研究內容，同時也為抗腫瘤活性較好的先導化合物的發現、創新藥物的研發，以及該藥用植物資源的開發和利用提供了一定的參考依據。