血培養厭氧瓶及雙套送檢的臨床應用價值研究

辛曉陽，范超明，潘峰

杭州師范大學附屬醫院檢驗科，浙江杭州 310015

血流感染的發病率在近年來持續增加，其高發病率和高死亡率一直困擾著臨床[1-2]。快速識別病原體對于血流感染的正確診斷、以病原體為導向的治療和更好的患者預后至關重要[3]。盡管血培養標本的培養時間較長，但其仍然是診斷血流感染的微生物學金標準，所以建立一整套規范的送檢規則以盡可能快地識別病原菌，是檢驗實驗室追求的目標。大多數國家標準的血培養送檢方式是兩瓶多套系統，即以1 個需氧瓶和1 個厭氧瓶為單位的2 套及2 套以上血培養。由于醫療成本、患者依從性、醫護人員認知水平等原因，血培養多套送檢方式的普及在臨床工作中面臨諸多困難[4-6]，單套甚至單瓶送檢比例在部分醫院仍然較高[7]。因此，科學地評價需氧瓶加厭氧瓶的多套送檢方式價值，可以為血培養規范送檢提供理論支持。本研究對2019 年1 月至2021 年12 月血培養數據進行了一項回顧性分析，以評估多套血培養送檢方式對血流感染病原菌檢出的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析杭州師范大學附屬醫院檢驗科收檢的54582 瓶臨床血培養標本數據。納入標準：所有受試者年齡>14 歲；排除標準：非血液標本、多種分離菌的標本、信息缺失無法納入統計的標本。本研究經杭州師范大學附屬醫院倫理委員會審批通過。

1.2 方法

血培養標本均為1 瓶需氧瓶和1 瓶厭氧瓶成套送檢，標本接收后立即放入血培養儀（Bact/Alert 3D全自動血培養儀及配套的血培養瓶均為法國梅里埃生物公司生產）培養，儀器提示陽性的血培養標本轉種哥倫比亞血平板、巧克力平板和（或）厭氧血平板，獲得單一純菌落后，使用MALDI-TOF 質譜儀（德國布魯克公司）進行細菌鑒定。分析厭氧瓶病原菌分離特點，比較厭氧瓶病和需氧瓶原菌分離率和血培養標本的報陽時間（time to positivity，TTP）[8]，分析雙套送檢方式病原菌分離數量特點。質控菌株包括ATCC29213 金黃色葡萄球菌、ATCC25922大腸埃希菌、ATCC90028 白色假絲酵母菌。陰性報警時限為儀器培養168h。

1.3 統計學方法

采用SPSS 18.0 統計學軟件對數據進行處理分析，計量資料以均數±標準差（）表示，組間比較采用t檢驗，計數資料采用例數（百分比）[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗，不符合正態分布的計量資料以中位數M（Q1，Q3）表示，組間比較采用非參數Mann-WhitneyU檢驗，P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 病原菌分離率特點

共分離病原菌3497 株，其中革蘭陰性菌1833株，革蘭陽性菌1450 株，真菌214 株。革蘭陰性菌分離前3 位為大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌；革蘭陽性菌分離前3 位為凝固酶陰性葡萄球菌、腸球菌屬、鏈球菌屬。需氧瓶中菌株數排在前3 位的分別為凝固酶陰性葡萄球菌、大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌，厭氧培養瓶中排在前3 位的分別是大腸埃希菌、凝固酶陰性葡萄球菌、肺炎克雷伯菌，見表1。

表1 需氧瓶和厭氧瓶病原菌分離率特點

2.2 不同病原菌在成套血培養瓶中分離率分布情況

以一套血培養為單位，對所有分離細菌來源統計，需氧瓶和厭氧瓶同時報陽數量為1616（46.22%），僅需氧瓶的報陽數量為1423（40.67%），僅厭氧瓶的報陽數量為458（13.11%），總計3497（100.00%）。

2.3 需氧瓶和厭氧瓶血培養報陽時間比較

所有厭氧瓶分離菌 TTP 均顯著低于需氧瓶（P<0.05），對病原菌需氧瓶TTP 和厭氧瓶TTP 進行比較，厭氧瓶TTP 均短于需氧瓶，其中凝固酶陰性葡萄球菌、腸球菌、大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、白假絲酵母菌的厭氧瓶比較，差異有統計學意義（P<0.05）。金黃色葡萄球菌、鏈球菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌TTP 比較，差異無統計學意義（P>0.05），見表2。

表2 不同分離菌需氧瓶和厭氧瓶TTP 比較[M（Q1,Q3），h]

2.4 送檢標本病原菌檢出率比較

共送檢雙套和單套血培養標本27291 套，其中單套送檢次數15201 次，雙套送檢次數6045 次；單套送檢陽性次數為1215（7.99%），雙套陽性次數為972（16.08%），雙套送檢陽性檢出率高于單套，差異有統計學意義（χ2=306.280，P<0.001）。

2.5 雙套送檢標本報陽瓶數分布情況

雙套送檢標本共6045 次，在所有血培養送檢次數中占比28.45%。對所有雙套送檢標本進行報陽數量統計，1 瓶的占比最高，3 瓶的占比最低。對常見分離菌單獨統計發現，4 瓶報陽率最高的為金黃色葡萄球菌，其次為大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌。4 瓶報陽率最低的前兩位為蠟樣芽孢桿菌和凝固酶陰性葡萄球菌；1 瓶報陽率最高的前3 位為蠟樣芽孢桿菌、凝固酶陰性葡萄球菌和棒桿菌屬，見表3。

表3 不同病原菌在雙套血培養標本中分布情況比較

3 討論

血培養檢測中致病菌漏檢、報陽時間延長和培養中出現假陽性的情況時有發生，這些情況會導致抗菌藥物過度使用、住院時間延長、不良患者事件相關的醫療保健成本增加[9-11]。及時、準確的血培養結果對血流感染的診治至關重要。不同醫院雙套送檢率差異較大[12-13]，了解以需氧瓶加厭氧瓶為單位的多套血培養送檢方式對血流感染病原菌檢出率的影響，有助于規范臨床血培養標本的送檢。

本研究共分離病原菌3497 株，需氧瓶檢出病原菌2112（60.39%），厭氧瓶檢出病原菌1385（39.61%），納入統計的血流感染常見菌中，除產酸克雷伯菌外，需氧瓶分離率都高于厭氧瓶，需氧瓶在血培養病原菌分離的作用已被臨床認可[4-5]。但比較不同病原菌在成套血培養瓶中分離率發現，僅厭氧瓶報陽的病原菌為458 株（13.11%），盡管厭氧瓶病原菌分離率低于需氧瓶，但是僅分離自厭氧瓶的病原菌仍然不能被忽視，厭氧瓶在血培養病原菌分離方面有不可取代的作用。

需氧瓶和厭氧瓶TTP 比較，所有厭氧瓶分離菌TTP 均顯著低于需氧瓶，臨床常見分離菌厭氧瓶TTP均低于需氧瓶，其中凝固酶陰性葡萄球菌、腸球菌屬、大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、白假絲酵母菌厭氧瓶TTP 與需氧瓶比較，差異有統計學意義；金黃色葡萄球菌、鏈球菌屬、銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌需氧瓶和厭氧瓶TTP 比較，差異無統計學意義。大部分的血培養分離菌厭氧瓶可以更早的為臨床提供血流感染信息，及時、準確地確定病原菌可以讓患者更早接受治療，有助于改善患者預后，目前大量研究致力于探索縮短血流感染病原菌檢出時間，而血培養需氧瓶加厭氧瓶的成套送檢方式，比單獨只送檢需氧瓶可以更快檢測到病原菌[14]。

血培養污染很常見，而血流感染病原菌無法被檢測出的情況也時有發生，這兩種情況都會增加衛生系統的成本，并且會誤導臨床醫生而影響診療過程[15]。本研究對所有送檢標本中的雙套送檢標本進行統計，3 瓶報陽比例最低；1 瓶報陽比例最高。如果單套送檢血培養標本，本研究的1 瓶和2 瓶報陽標本中會有部分被漏檢，降低陽性菌檢出率。對常見分離菌單獨統計發現，4 瓶報陽率最低的分離菌，前兩位為臨床常見血培養污染菌蠟樣芽孢桿菌和凝固酶陰性葡萄球菌。1 瓶報陽率最高的前3 位為臨床常見污染菌蠟樣芽孢桿菌、凝固酶陰性葡萄球菌和棒桿菌屬。血培養瓶的報陽數量可以輔助判斷分離菌是否為污染菌，對于臨床常見污染菌雙套送檢標本時單瓶報陽，則可判斷其高概率是污染[14]。本研究數據顯示，2 瓶和3 瓶報陽的凝固酶陰性葡萄球菌送檢次數為73 次（22.46%），棒桿菌屬為5 次（15.63%），蠟樣芽胞桿菌為2 次（11.76%），如該部分標本以單套方式送檢，報陽瓶數可以為1 瓶或2 瓶，在污染菌判斷方面比多套送檢方式更加困難。由此可見，雙套采樣方式可以顯著提高血流感染病原菌的檢出率。

綜上所述，盡管需氧瓶可以分離出更多的病原菌，但是厭氧瓶血流感染病原菌分離率和TTP 方面依然具有不可取代的作用，而多套送檢比單套送檢可以更多地檢出病原菌，也更容易識別污染菌。需氧瓶和厭氧瓶組成的多套血培養送檢方式可以為臨床提供更加及時準確的病原菌信息，幫助臨床開展有效的治療。