宮頸癌患者血清雙皮質(zhì)素樣激酶1、黏蛋白-1、血管生成素-2的表達(dá)及臨床意義

向慧敏，李 筱，饒琴琴，王思繁

陜西省漢中市中心醫(yī)院精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)診斷中心,陜西漢中 723000

宮頸癌是女性常見生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，多發(fā)生于40～50歲女性，且發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，僅次于乳腺癌[1]。宮頸癌患者發(fā)病早期具有極強(qiáng)的隱匿性，絕大部分患者一經(jīng)確診便已處于中晚期，錯(cuò)過手術(shù)根治的最佳時(shí)機(jī)，預(yù)后較差，死亡風(fēng)險(xiǎn)較高[2]。因此，尋找一種有效的生物學(xué)指標(biāo)對(duì)患者預(yù)后進(jìn)行預(yù)測(cè)具有極其重要的意義，也是當(dāng)前研究人員關(guān)注的熱點(diǎn)。雙皮質(zhì)素樣激酶1(DCLK1)屬于絲氨酸/蘇氨酸激酶，含有2個(gè)雙皮質(zhì)素結(jié)構(gòu)域，介導(dǎo)了神經(jīng)元形成及遷移過程的調(diào)控，且能誘導(dǎo)上皮細(xì)胞正常絨毛結(jié)構(gòu)的消失，發(fā)揮原癌基因的作用[3]。黏蛋白-1(MUC-1)屬于Ⅰ型跨膜糖蛋白之一，廣泛存在于多種器官上皮細(xì)胞，介導(dǎo)了細(xì)胞黏附及細(xì)胞間信號(hào)通路傳導(dǎo)[4]。相關(guān)研究表明，血管生成素(Ang)/酪氨酸激酶受體Tie通路在惡性腫瘤細(xì)胞侵襲、遷移等過程中扮演著至關(guān)重要的角色，其中Ang-2在宮頸癌組織中存在異常表達(dá)[5]。鑒于此，本研究探討了宮頸癌患者血清DCLK1、MUC-1、Ang-2表達(dá)水平變化及臨床意義，以期為臨床宮頸癌的病情評(píng)估及預(yù)后預(yù)測(cè)提供新的思路，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇本院2018年2月至2019年2月收治的102例宮頸癌患者為研究對(duì)象，其中年齡≤60歲52例，>60歲50例；腫瘤最大徑≤3 cm 42例，>3 cm 60例；分化程度：低分化34例，中高分化68例；國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)分期[6]：Ⅰ～Ⅱ期46例，Ⅲ～Ⅳ期56例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移53例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移49例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)病理檢查確診；(2)入組前無手術(shù)史、放化療史；(3)年齡>18周歲；(4)接受根治性手術(shù)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他原發(fā)惡性腫瘤；(2)肝、腎等臟器嚴(yán)重功能障礙；(3)伴有嚴(yán)重感染性疾病或免疫系統(tǒng)疾病；(4)研究期間因故退出或失訪。所有研究對(duì)象均簽署知情同意書，本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法 (1)標(biāo)本采集：采集所有患者治療前晨起空腹靜脈血4 mL，以3 000 r/min(離心半徑10 cm)離心10 min，取上層血清保存至-80 ℃冰箱中待測(cè)。(2)檢測(cè)方法：通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)所有患者血清DCLK1、MUC-1及Ang-2水平，所有操作按照試劑盒說明書進(jìn)行。其中DCLK1試劑盒購(gòu)自武漢伊萊瑞特生物科技有限公司，MUC-1試劑盒購(gòu)自上海史瑞可生物科技有限公司，Ang-2試劑盒購(gòu)自深圳晶美生物科技有限公司。檢測(cè)儀器均為XN9000型全自動(dòng)血液分析儀(購(gòu)自日本希森美康公司)。(3)隨訪觀察：對(duì)所有患者均開展為期3年的隨訪，隨訪方式包括電話隨訪及來院復(fù)診，隨訪頻率為1次/3個(gè)月，隨訪終止事件為患者死亡。

1.3觀察指標(biāo) 分析血清DCLK1、MUC-1及Ang-2表達(dá)水平與宮頸癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系。以血清DCLK1、MUC-1及Ang-2表達(dá)水平中位數(shù)為界(高于中位數(shù)為高表達(dá)，低于中位數(shù)為低表達(dá))，分析上述3項(xiàng)指標(biāo)高表達(dá)和低表達(dá)患者的3年總生存率。分析宮頸癌患者預(yù)后的影響因素。分析血清DCLK1、MUC-1及Ang-2單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)宮頸癌患者預(yù)后的效能。

2 結(jié) 果

2.1血清DCLK1、MUC-1及Ang-2表達(dá)水平與宮頸癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者血清DCLK1、MUC-1表達(dá)水平分別高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，F(xiàn)IGO分期Ⅲ～Ⅳ期的宮頸癌患者血清Ang-2表達(dá)水平高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而不同年齡、腫瘤最大徑、分化程度的宮頸癌患者血清DCLK1、MUC-1、Ang-2表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 血清DCLK1、MUC-1及Ang-2表達(dá)水平與宮頸癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.2血清DCLK1、MUC-1、Ang-2表達(dá)水平與宮頸癌患者3年總生存率的關(guān)系 生存分析結(jié)果顯示，血清DCLK1、MUC-1及Ang-2高表達(dá)患者3年總生存率均明顯低于相應(yīng)的低表達(dá)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。血清DCLK1、MUC-1及Ang-2高、低表達(dá)患者的Kaplan-Meier生存曲線見圖1～3。

表2 血清DCLK1、MUC-1、Ang-2表達(dá)水平與宮頸癌患者3年總生存率的關(guān)系[n(%)]

圖1 血清DCLK1高、低表達(dá)患者的Kaplan-Meier生存曲線

2.3宮頸癌患者預(yù)后的影響因素分析 以宮頸癌患者的預(yù)后為因變量(賦值：1=死亡，0=生存)，以血清DCLK1、MUC-1、Ang-2表達(dá)水平及FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況為自變量(自變量的選擇參考臨床醫(yī)師的建議及上述各表結(jié)果)。回歸分析采用逐步后退法，設(shè)定α剔除=0.10，α入選=0.05。Cox回歸分析結(jié)果顯示，血清DCLK1、MUC-1、Ang-2表達(dá)水平及FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況均是宮頸癌患者預(yù)后的影響因素(P<0.05)。見表3。

圖2 血清MUC-1高、低表達(dá)患者的Kaplan-Meier生存曲線

表3 Cox回歸分析宮頸癌患者預(yù)后的影響因素結(jié)果

2.4血清DCLK1、MUC-1、Ang-2預(yù)測(cè)宮頸癌患者預(yù)后的效能 ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清DCLK1、MUC-1、Ang-2單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)宮頸癌患者預(yù)后的曲線下面積(AUC)分別為0.687、0.728、0.694、0.836，聯(lián)合檢測(cè)的預(yù)測(cè)效能最高，其AUC高于各指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)(P<0.05)。見表4和圖4。

表4 血清DCLK1、MUC-1、Ang-2預(yù)測(cè)宮頸癌患者預(yù)后的效能

圖3 血清Ang-2高、低表達(dá)患者的Kaplan-Meier生存曲線

圖4 血清DCLK1、MUC-1、Ang-2預(yù)測(cè)宮頸癌患者預(yù)后的ROC曲線

3 討 論

迄今為止，宮頸癌的具體病因及發(fā)病機(jī)制尚存在一定的爭(zhēng)議，目前主要認(rèn)為可能和遺傳、人乳頭狀瘤病毒感染及生活方式等有關(guān)[7]。相關(guān)研究顯示，宮頸癌的形成往往要經(jīng)歷較為復(fù)雜的過程，即正常宮頸上皮-宮頸上皮內(nèi)瘤變-原位癌[8-9]。手術(shù)切除是目前國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的最有效的宮頸癌治療手段，但該治療手段依賴于對(duì)患者的早期診斷，一旦進(jìn)入進(jìn)展期，即使進(jìn)行手術(shù)切除治療也難以獲得較理想的效果，患者預(yù)后欠佳[10-11]，尤其是晚期宮頸癌患者往往會(huì)因復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移導(dǎo)致生存期縮短。表觀遺傳學(xué)、基因組學(xué)及分子生物學(xué)是當(dāng)下惡性腫瘤領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)，在評(píng)估病情嚴(yán)重程度及預(yù)測(cè)預(yù)后等方面具有極其重要的意義[12-13]。

本研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)IGO分期Ⅲ～Ⅳ期及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者血清DCLK1表達(dá)水平分別高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，這提示血清DCLK1表達(dá)與宮頸癌患者病情進(jìn)展有關(guān)，具有評(píng)估患者病情嚴(yán)重程度及判斷是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的潛能。分析原因如下，宮頸癌患者體內(nèi)的癌細(xì)胞會(huì)激活DCLK1啟動(dòng)子，促使其轉(zhuǎn)錄、翻譯，進(jìn)一步導(dǎo)致血清DCLK1水平升高，而異常高表達(dá)的DCLK1會(huì)激活肉瘤病毒癌基因的表達(dá)，進(jìn)一步抑制鳥嘌呤三磷酸核苷酸水解酶活性，并對(duì)其下游信號(hào)通路產(chǎn)生激活作用，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、分化；同時(shí)，DCLK1異常高表達(dá)可能導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞穿透細(xì)胞外基質(zhì)，累及周圍器官或向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[14-15]。此外，F(xiàn)IGO分期Ⅲ～Ⅳ期及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者血清MUC-1表達(dá)水平分別高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，提示血清MUC-1表達(dá)與宮頸癌患者病情進(jìn)展有關(guān)。MUC-1具有調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖及促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用，可進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、分化；同時(shí)，MUC-1可通過對(duì)多條信號(hào)通路進(jìn)行調(diào)控，繼而介導(dǎo)腫瘤免疫逃逸過程，這為宮頸癌的病情進(jìn)展及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移提供了有利條件[16-17]。FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期宮頸癌患者血清Ang-2表達(dá)水平高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期患者，提示血清Ang-2與宮頸癌患者FIGO分期有關(guān)，可作為輔助評(píng)估患者病情嚴(yán)重程度的重要生物學(xué)指標(biāo)之一。究其原因，宮頸癌細(xì)胞可大量合成、分泌Ang-2，而Ang-2過表達(dá)會(huì)促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移，從而促進(jìn)宮頸癌的進(jìn)展[18]。

本研究結(jié)果顯示，血清DCLK1、MUC-1及Ang-2高表達(dá)患者3年總生存率均低于相應(yīng)的低表達(dá)患者，表明上述3項(xiàng)指標(biāo)的異常表達(dá)和宮頸癌患者預(yù)后有關(guān)，即隨著其表達(dá)水平的升高，患者死亡風(fēng)險(xiǎn)升高，主要原因可能是隨著上述3項(xiàng)指標(biāo)表達(dá)水平的升高，患者病情加重、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)增加，繼而增加了臨床治療難度，對(duì)預(yù)后造成不良影響。Cox回歸分析發(fā)現(xiàn)，血清DCLK1、MUC-1、Ang-2表達(dá)水平及FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況均是宮頸癌患者預(yù)后的影響因素(P<0.05)，提示可通過聯(lián)合檢測(cè)血清DCLK1、MUC-1、Ang-2的表達(dá)水平，并綜合FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等對(duì)患者的預(yù)后進(jìn)行更全面的評(píng)估。ROC曲線分析顯示，血清DCLK1、MUC-1、Ang-2聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)宮頸癌患者預(yù)后的效能優(yōu)于各指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)，表明聯(lián)合檢測(cè)價(jià)值更高。

綜上所述，血清DCLK1、MUC-1、Ang-2表達(dá)水平與宮頸癌進(jìn)展及預(yù)后有關(guān)，檢測(cè)上述3項(xiàng)指標(biāo)可為患者的病情評(píng)估及預(yù)后預(yù)測(cè)提供指導(dǎo)依據(jù)。