周圍型非小細(xì)胞肺癌患者細(xì)胞周期蛋白D1、CD147與預(yù)后的關(guān)系研究

劉文華，曠 菲，陳小香，范 旭

(廣東省水電醫(yī)院，廣東 廣州 511340)

肺癌的發(fā)病率及死亡率均較高，占據(jù)世界各類惡性腫瘤的首位[1]。肺癌可分為小細(xì)胞肺癌與非小細(xì)胞肺癌，其中周圍型非小細(xì)胞肺癌患者早期無特異性表現(xiàn)，大多數(shù)患者確診時已經(jīng)失去手術(shù)治療機會，早期診斷及治療對患者預(yù)后有積極意義。隨著分子生物學(xué)發(fā)展，從分子機制了解腫瘤的發(fā)生、分化、增值、浸潤等成為目前腫瘤基礎(chǔ)研究的熱點。細(xì)胞周期蛋白D1(CyclinD1)屬于癌蛋白，其可激活細(xì)胞周期蛋白依賴的蛋白激酶4，并通過與其相結(jié)合催化RB蛋白磷酸化，促使細(xì)胞進(jìn)入到S期，維持細(xì)胞的周期進(jìn)程與凋亡之間的平衡，進(jìn)而保持細(xì)胞分化穩(wěn)定性與細(xì)胞基因完整性[2,3]。CD147也稱為細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子，對腫瘤細(xì)胞周圍成纖維細(xì)胞所產(chǎn)生對基質(zhì)金屬蛋白酶具有誘導(dǎo)作用，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞浸潤、轉(zhuǎn)移[4]。有研究指出，CyclinD1、CD147與周圍型非小細(xì)胞肺癌發(fā)生、發(fā)展存在聯(lián)系[5]。本研究通過分析CyclinD1、CD147在周圍型非小細(xì)胞肺癌患者中表達(dá)情況，了解兩者與患者預(yù)后關(guān)系，以期為臨床預(yù)后評估提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料2017年3月至2020年3月我院收治的周圍型非小細(xì)胞肺癌患者128例設(shè)為觀察組，納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)病理檢查證實為周圍型非小細(xì)胞肺癌患者；②在術(shù)前均未進(jìn)行放療或化療；③患者及家屬均簽署知情同意書；④臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在血液系統(tǒng)或免疫系統(tǒng)疾病者；②合并存在心、肝、腎等嚴(yán)重原發(fā)性疾病者；③合并存在其他部位腫瘤者。觀察組男79例，女49例，年齡45～78歲[(53.81±3.88)歲]，TNM分期I～I(xiàn)I期69例，III～I(xiàn)V期59例。取患者癌旁正常組織，距腫瘤切緣至少0.5 cm處且經(jīng)HE染色檢查無癌細(xì)胞浸潤作為癌旁組；另選取同期收治非肺部惡性疾病(炎性假瘤、錯構(gòu)瘤、結(jié)核等)患者71例病理組織作為良性組，其中男42例，女29例，年齡44～78歲[(52.74±3.16)歲]，入選者一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法CyclinD1、CD147檢查均使用免疫組化SP法進(jìn)行檢測。獲取病理標(biāo)本，使用4%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，行4 mm厚連續(xù)切片，用于免疫組織化學(xué)SP染色和HE染色。由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供兔抗人CyclinD1單克隆抗體；鼠抗人CD147一抗為香港ABCAM公司提供。具體實驗步驟根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行。切片染色均使用PBS代替一抗作為陰性對照，陽性對照為知染色陽性切片。

1.3 結(jié)果判定由2名經(jīng)驗豐富病理科醫(yī)生在雙盲情況下對結(jié)果進(jìn)行判斷，CyclinD1陽性表達(dá)定位于細(xì)胞核和細(xì)胞漿出現(xiàn)黃褐色或棕黃色顆粒；CD147陽性表達(dá)定位在細(xì)胞漿、細(xì)胞膜上出現(xiàn)黃褐色或棕黃色顆粒。在高倍鏡下(×400)對隨機選擇5個視野觀察，一個視野200個細(xì)胞，一共計數(shù)1000個細(xì)胞。根據(jù)腫瘤細(xì)胞著色情況進(jìn)行判斷：I組：無反應(yīng)或微弱反應(yīng)；II組：棕色；III組：深棕色，計算染色情況為II、III組的5個高倍鏡視野中陽性染色細(xì)胞的百分率，I組以及陽性細(xì)胞數(shù)≤75%為低表達(dá)，75%以上則為高表達(dá)[5]。

1.4 觀察指標(biāo)不同組織中CyclinD1、CD147表達(dá)情況，不同臨床特征患者CyclinD1、CD147表達(dá)情況以及影響周圍型非小細(xì)胞肺癌者預(yù)后因素。收集患者一般資料，包括性別、年齡、TNM分期、組織學(xué)分型、分化程度、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等，對患者進(jìn)行為期12個月隨訪，隨訪截止至2021年3月，了解患者預(yù)后情況，根據(jù)預(yù)后無復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移為預(yù)后良好；復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、死亡則為預(yù)后不良[6]。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差描述，比較采用t檢驗；計數(shù)資料通過率或構(gòu)成比描述，比較采用χ2檢驗；多元Logistic回歸分析影響周圍型非小細(xì)胞肺癌者預(yù)后因素。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組織中CyclinD1、CD147表達(dá)情況比較觀察組中CyclinD1、CD147陽性表達(dá)明顯高于癌旁組與良性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同組織中CyclinD1、CD147表達(dá)情況比較 [n(%)]

2.2 不同臨床特征患者CyclinD1、CD147表達(dá)情況比較CyclinD1在不同TNM分期、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，在不同年齡、性別、組織學(xué)分型、腫瘤直徑中比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；CD147在不同TNM分期、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑中比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，在不同年齡、性別、組織學(xué)分型中比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 不同臨床特征患者CyclinD1、CD147表達(dá)情況比較[n(%)]

2.3 不同預(yù)后患者臨床資料比較128例患者預(yù)后良好99例，預(yù)后不良29例。預(yù)后良好與預(yù)后不良患者在分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、CyclinD1、CD147表達(dá)中比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，在年齡、性別、腫瘤直徑、組織學(xué)分型中比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 不同預(yù)后患者臨床資料比較[n(%)]

2.4 患者預(yù)后不良的影響因素分析TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、CyclinD1、CD147是影響患者預(yù)后不良的危險因素(P<0.05)。見表4。

表4 影響患者預(yù)后不良因素分析

3 討論

腫瘤屬于細(xì)胞周期性疾病，臨床中認(rèn)為惡性腫瘤發(fā)生與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)失控之間密切相關(guān)，導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)無限自主增殖及分裂[7]。在細(xì)胞周期調(diào)控中Cclin-cdk復(fù)合物為細(xì)胞周期進(jìn)程驅(qū)動過程中的引擎，過度表達(dá)Cclin可提示細(xì)胞周期進(jìn)程出現(xiàn)異常[8]。CclinD1主要表達(dá)在細(xì)胞周期的G1期，與cdk4/cdk6相結(jié)合后促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入到S期后逐漸降解。有研究指出，CclinD1過度表達(dá)可使患者G1期縮短。目前有關(guān)腫瘤細(xì)胞不同周期出現(xiàn)異常正反饋機制有待在肺癌組織中證實，但腫瘤發(fā)生與CclinD1的過度表達(dá)引起細(xì)胞過度增殖、凋亡減少，使細(xì)胞周期進(jìn)程與凋亡之間平橫被打破存在密切聯(lián)系[9]。在本研究中可知，CclinD1在癌組織中陽性表達(dá)明顯高于癌旁組與良性組，與上述研究結(jié)果相符，說明CclinD1可能參與周圍型非小細(xì)胞肺癌發(fā)生過程中。而CclinD1與患者TNM分期、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床特征存在相關(guān)性，同時CclinD1為影響患者預(yù)后不良的危險因素，說明CclinD1過度表達(dá)預(yù)示著患者預(yù)后不良。在以往研究中顯示，CclinD1表達(dá)和增殖細(xì)胞核抗原的表達(dá)存在直接聯(lián)系，可作為癌細(xì)胞分裂增殖能力評估的有效指標(biāo)[10,11]。結(jié)合本研究結(jié)果分析，CclinD1過度表達(dá)可能提示患者腫瘤細(xì)胞具有更高的增殖率，出現(xiàn)預(yù)后不良的概率也更大。

CD147可介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞以及細(xì)胞與間質(zhì)之間的黏附作用[12]。以往研究顯示，通過誘導(dǎo)腫瘤周圍成纖維細(xì)胞產(chǎn)生基質(zhì)金屬蛋白酶，從而達(dá)到降解基底膜與細(xì)胞間質(zhì)成分的作用，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)浸潤與轉(zhuǎn)移[13，14]。本研究中CD147在腫瘤組織中表達(dá)明顯上調(diào)，說明CD147與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。分析CD147促進(jìn)癌癥發(fā)展的機制可能有以下幾點：CD147對基質(zhì)金屬蛋白酶有刺激作用，并可降解I型及IV膠原引起基底膜、組織間隙基質(zhì)降解，促進(jìn)腫瘤發(fā)展[15]；CD147可促進(jìn)血管內(nèi)皮生長因子生成，從而誘導(dǎo)腫瘤新生血管生成，促進(jìn)惡性腫瘤發(fā)展[16]；CD147對前凋亡蛋白聚集有抑制作用，從而保護(hù)了腫瘤細(xì)胞，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞錨定非依賴性生長能力[17]。同時，本研究結(jié)果顯示，CD147與TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移同為影響周圍型非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后相關(guān)因素。說明其表達(dá)上調(diào)可能預(yù)示患者預(yù)后不良，結(jié)合以往研究分析，CD147途徑可使腫瘤細(xì)胞適應(yīng)缺氧環(huán)境，從而有利于腫瘤細(xì)胞的分化，增加了腫瘤細(xì)胞侵襲性，促進(jìn)其轉(zhuǎn)移，最終導(dǎo)致患者預(yù)后不良[18，19]。

綜上，CyclinD1、CD147在周圍型非小細(xì)胞肺癌患者中表達(dá)明顯上調(diào)，且兩者均為患者預(yù)后不良的相關(guān)因素。