液相色譜-串聯質譜法測定蜂蜜中氯霉素的不確定度評定

文 李旭平 杜平 李海亮 陜西省果蔬及加工產品質量檢驗檢測中心

氯霉素是一種廣譜抗生素，對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均有一定的抑制作用，被廣泛作為抗生素使用，但是它同時有嚴重的副作用，有的人對它很敏感，只需攝入少量，就能對骨髓造成傷害，不能產生足夠的紅細胞、白細胞或血小板，也就是再生障礙性貧血。我國實驗室對于氯霉素的檢測主要采用液相色譜-串聯質譜法，測量氯霉素檢驗結果的不確定度可以讓實驗室檢測更加準確。本次不確定度評定參照JJF 1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》和CNAS-GL06《化學分析中不確定度的評估指南》的測定方法。本次對蜂蜜中氯霉素的不確定度進行測量評定，可以為實驗結果的準確度提供依據和參考。

1.材料與方法

1.1 材料與試劑

甲醇（色譜純賽孚瑞）、乙腈（色譜純賽孚瑞）、乙酸乙酯（色譜純賽孚瑞）、氯霉素標準物質（農業部環境保護研究所）

1.2 儀器與設備

液相色譜-質譜聯用儀（美國賽默飛世爾公司TSQQuantum Access Max）、電子分析天平（梅特勒-托利多ME204/02）

1.3 色譜條件

色譜柱：C18柱，1.7μm ，100mm×2.1mm；流動相：甲醇、水；流速：0.25mL / min；進樣量：10μL；柱溫：35℃。

1.4 質譜條件

離子源：電噴霧電離源（ESI-）。碰能量撞：21eV；掃描方式：多反應監測（MRM）；掃描定量離子：321.068>151.645；定性離子對：321.068>256.796；

液相色譜梯度洗脫條件（實驗溫度：20±2℃）

1.5 實驗方法

稱取5g樣品于50mL離心管中，加入5mL水，快速混勻溶解。加入15mL乙酸乙酯，振蕩離心。取上清液12mL于雞心瓶，55℃旋轉蒸干。加入5mL水溶解殘渣。將提取液倒入已活化的Qasis HLB柱中，待溶液完全流出后，用10mL水洗過柱，再用5mL乙腈+水（1+7）洗柱棄去。最后用5mL乙酸乙酯洗脫，并收集氮吹干。用乙腈+水（20+80）定容至1mL，上機測定。

2.測量數學模型

試樣中氯霉素（以氯霉素計）按下式計算：

式中：X---樣品中氯霉素含量（以氯霉素計），單位為微克/千克（μg/kg）； m---樣品質量，單位為克（g）；c---由標準曲線得出的樣液中氯霉素的濃度，單位為納克/毫升（ng/mL）；f---稀釋倍數。V---樣液最后定容體積，單位為毫升（mL）；根據數學模型分析，影響不確定度來源有以下幾個方面：樣品稱量引入的不確定度；樣品定容引入的不確定度；樣品平行測定引入的不確定度；標準系列溶液引入的不確定度；標準曲線擬合引入的不確定度。

3.不確定度評定

4.測量不確定度結果

相對標準不確定度一覽表

根據上表計算合成不確定度為

合成標準不確定度為U(X)=X*Uml ( X )= 2.215*0.01293= 0.02863

綜上，測量不確定度結果為： 取置信區間為95%，k=2，為擴展不確定度U=U(X) k= 0.02863*2 = 0.05726μg/kg；則樣品中氯霉素的含量為2.215 + 0.057μg/kg。

5.結論和討論

從本次實驗的結果看，不確定度影響程度依次是標準曲線擬合＞標準溶液配制＞測量重復性。通過此次評定，相關實驗可以從以下幾個方面進行改進實驗：（1）應最大程度讓被測樣品濃度落在標準曲線的線性范圍中間位置，線性越高，降低曲線擬合引入的不確定度。（2）不確定度大小與被測樣品濃度呈負相關，被測組分含量低時，測得結果的不確定度會增大。（3）應采用合適的標準溶液范圍校正被測組分，配置標準曲線使用的器皿擴展不確定度值越小，測得結果的不確定度越小。（4）為保證實驗的準確度，要注重標準曲線的線性和標準溶液的配制。此外，選擇精度高的液相色譜-質譜聯用儀、國家有證標準物質和計量檢定合格且擴展不確定度小的計量器具開展實驗，也會進一步保證實驗結果的準確度。