長鏈非編碼RNA PCGEM1、microRNA-642a-5p表達與HPV陽性宮頸癌根治術術后復發的關系研究*

譚立鳳，趙萌，祝愿

（淄博市婦幼保健院 婦科，山東 淄博 255000）

宮頸癌是全球范圍內高發婦科惡性腫瘤，全球每年約有10%的癌癥患者死于該病[1-2]。高危型人乳頭狀瘤病毒（human papilloma virus,HPV）長期持續感染可導致癌變，其早期由于無明顯臨床癥狀，多數患者確診時已處于中晚期[3]。宮頸癌根治術是臨床治療宮頸癌的主要治療手段之一，可有效延長患者的生存時間，但仍有部分患者在術后出現復發[4]。復發的宮頸癌患者病死率較高，因此對宮頸癌根治術術后復發進行預測，對改善患者預后具有重要意義，目前臨床中亟須尋找對宮頸癌根治術術后復發進行預測的理想標志物。

長鏈非編碼核糖核酸（long non-coding ribonucleic acid,LncRNA）在調節細胞增殖、分化等過程中具有重要作用，其中LncRNA 前列腺癌基因表達標記1（prostate cancer gene expression signature 1,PCGEM1）最早在人前列腺癌LNCaP 細胞中被發現過表達，并參與前列腺癌、胃癌等惡性腫瘤的發生發展[5]，然而有關LncRNA PCGEM1 在宮頸癌患者中的表達目前尚罕見報道。MicroRNA-642a-5p（miR-642a-5p）是口腔鱗癌等多種惡性腫瘤的抑制因子，高表達的miR-642a-5p 能夠抑制癌細胞的生長、轉移，對腫瘤具有一定的抑制功能[6]。LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p 兩者之間存在一定的聯系，相關研究[7]表明，LncRNA PCGEM1 表達降低時可通過調節miR-642a-5p/LGMN 軸抑制宮頸癌細胞的增殖、遷移及侵襲。目前宮頸癌組織LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p 的表達與HPV 陽性宮頸癌根治術術后復發的關系尚不清楚，有待進一步探討。本研究通過回顧性分析行根治術的HPV 陽性宮頸癌患者的臨床資料，對上述問題進行研究探討，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 資料

1.1.1 臨床資料選取2018年2月—2020年4月淄博市婦幼保健院184 例HPV 陽性宮頸癌患者為研究對象。患者年齡22～77 歲，平均（46.98±9.31）歲；體質量指數（BMI）18.27~27.89 kg/m2，平均（22.81±2.61）kg/m2。

1.1.2 納入標準①經臨床病理確診為宮頸癌[8]；②反點雜交技術檢測結果為HPV 陽性[9]；③年齡>25 歲；④美國麻醉醫師協會分級Ⅰ、Ⅱ級；⑤臨床分期Ⅰ~Ⅲ期；⑥均行宮頸癌根治術治療。

1.1.3 排除標準①凝血功能障礙者；②合并其他惡性腫瘤者；③肝腎等重要臟器嚴重損傷者；④先天性心臟病者；⑤精神疾病或認知障礙者；⑥術前接受放、化療或生物免疫治療者；⑦手術切緣陽性者。本研究經醫院醫學倫理委員會批準同意，患者簽署知情同意書。

1.2 實時熒光定量聚合酶鏈反應（qRT-PCR）檢測LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p表達

術中收集宮頸癌組織標本，立即放入液氮中冷凍保存，后轉入-80℃超低溫冰箱中保存。qRTPCR 檢測宮頸癌組織LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p mRNA 相對表達量。取宮頸癌組織，用TRIzol 法提取組織總RNA，檢測RNA 的質量和濃度，并逆轉錄成cDNA。總反應體系20 μL：10 μL 2×SYBR Mix，10×cDNA 模板1 μL，正反向引物各1.0 μL，H2O 8 μL，每樣品3 個重復。反應條件：95℃預變性2 min，95℃變性12s、60℃退火32 s，72℃延伸3 min，共38 個循環。在PCR 儀（型號：RTQ-960，杭州艾康生物技術有限公司）上進行反應，qRT-PCR 引物序列見表1。LncRNA PCGEM1以β-actin為內參，miR-642a-5p以U6為內參，采用2-ΔΔCt法計算目的基因相對表達量。

表1 qRT-PCR引物序列

1.3 治療方法

所有研究對象均接受宮頸癌根治術（包含廣泛子宮切除術和盆腔淋巴結清掃術）治療，并依據患者情況在術后給予輔助治療，治療方式主要包括放療（常規放療、調強適形放療）、化療（順鉑、長春新堿聯合博來霉素；卡鉑聯合多西他賽；順鉑聯合紫杉醇；奈達鉑聯合紫杉醇；卡鉑聯合紫杉醇；順鉑聯合多西他賽等）及放化療（給予常規放療或調強適形放療的同時接受靜脈滴注順鉑或奈達鉑化療）。

1.4 隨訪及術后復發定義

隨訪2年，通過門診、電話等方式進行隨訪，每2 個月1 次，隨訪截止時間為2022年4月。以術后出現臨床、影像或組織學的疾病證據定義為復發，主要包括局部復發（陰道殘端和主動脈分叉以下的盆腔淋巴結區域出現復發腫塊）、遠處轉移（局部復發以外區域的疾病復發），以及局部復發和遠處轉移同時發生[10]。

1.5 觀察指標

主要為可能影響HPV 陽性宮頸癌患者術后復發的臨床資料，包括年齡、BMI、病理類型、臨床分期、分化程度、宮頸浸潤深度、是否存在盆腔淋巴結轉移、腫瘤最大直徑、術后治療、總膽紅素、血肌酐、宮頸癌組織LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p mRNA相對表達量。

1.6 統計學方法

數據分析采用SPSS 21.0 統計軟件。計量資料以均數±標準差（±s）表示，比較用t檢驗或方差分析，進一步兩兩比較用LSD-t法；計數資料以構成比或率（%）表示，比較用χ2檢驗；多因素Logistic逐步回歸分析影響HPV 陽性宮頸癌患者術后復發的危險因素；繪制受試者工作特征（ROC）曲線。P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同臨床分期HPV 陽性宮頸癌組織LncRNA PCGEM1、miR-642a-5pmRNA 相對表達量的比較

臨床分期Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期宮頸癌組織LncRNA PCGEM1 mRNA、miR-642a-5p mRNA 相對表達量比較，經方差分析，差異有統計學意義（P<0.05），Ⅲ期和Ⅱ期宮頸癌組織LncRNA PCGEM1 mRNA 相對表達量高于Ⅰ期（P<0.05），miR-642a-5p mRNA 相對表達量低于Ⅰ期（P<0.05），Ⅲ期宮頸癌組織LncRNA PCGEM1 mRNA 相對表達量高于Ⅱ期（P<0.05），miR-642a-5p mRNA 相對表達量低于Ⅱ期（P<0.05）。見表2。

表2 不同臨床分期宮頸癌組織LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p mRNA相對表達量比較 （±s）

表2 不同臨床分期宮頸癌組織LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p mRNA相對表達量比較 （±s）

注：①與Ⅰ期比較，P <0.05；②與Ⅱ期比較，P <0.05。

臨床分期Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期F 值P 值n 46 87 51 LncRNA PCGEM1 mRNA 0.59±0.08 0.81±0.07①1.21±0.26①②217.145 0.000 miR-642a-5p mRNA 1.21±0.18 1.07±0.12①0.69±0.14①②181.078 0.000

2.2 HPV陽性宮頸癌患者術后復發情況

本研究中184 例HPV 陽性宮頸癌患者經宮頸癌根治術治療后共有28 例復發，復發率為15.22%（28/184）。

2.3 復發組和未復發組患者臨床資料的比較

復發組與未復發組患者年齡、BMI、病理類型、術后治療、總膽紅素及血肌酐比較，差異無統計學意義（P>0.05）。復發組與未復發組患者臨床分期、分化程度、宮頸浸潤深度、盆腔淋巴結轉移、腫瘤最大直徑，以及宮頸癌組織LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p mRNA 相對表達量比較，差異有統計學意義（P<0.05），復發組宮頸癌組織LncRNA PCGEM1 mRNA 相對表達量高于未復發組（P<0.05），復發組miR-642a-5p mRNA 相對表達量低于未復發組（P<0.05）。見表3。

表3 兩組患者臨床資料的比較

2.4 影響HPV陽性宮頸癌患者術后復發的多因素Logistic逐步回歸分析結果

以HPV 陽性宮頸癌患者術后復發為因變量（未復發 = 0，復發 = 1），以臨床分期（Ⅰ、Ⅱ期 = 0，Ⅲ期 =1）、分化程度（中/高分化 = 0，低分化 = 1）、宮頸浸潤深度（<1/2 = 0，≥ 1/2= 1）、盆腔淋巴結轉移（否 = 0，是 =1）、腫瘤最大直徑（< 4 cm= 0，≥ 4 cm= 1）、宮頸癌組織LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p 表達（均為連續變量）為自變量，進行多因素Logistic 逐步回歸分析（α入=0.05，α出=0.10），結果顯示：臨床分期Ⅲ期[O^R=2.815（95%CI：1.226，6.462）]、盆腔淋巴結轉移[O^R=2.892（95% CI：1.202，6.968）]、宮頸癌組織LncRNA PCGEM1 表達[O^R=3.267（95% CI：1.642，8.754）]、miR-642a-5p 表達[O^R=3.337（95% CI：2.031，9.846）]均為影響HPV 陽性宮頸癌患者術后復發的危險因素（P<0.05）。見表4。

表4 影響HPV陽性宮頸癌患者術后復發的多因素逐步Logistic回歸分析參數

2.5 宮頸癌組織LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p表達對HPV陽性宮頸癌患者術后復發的預測價值

ROC 曲線分析結果顯示，宮頸癌組織LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p 及兩者聯合對HPV 陽性宮頸癌患者術后復發預測的敏感性分別為75.00%（95% CI：0.548，0.886）、78.57%（95% CI：0.586，0.910）和75.00%（95% CI：0.548，0.886），特異性分別為78.21% （95% CI：0.708，0.842）、73.08%（95% CI：0.653，0.797）和96.15%（95% CI：0.914，0.984），AUC分別為0.724（95% CI：0.653，0.787）、0.796（95% CI：0.730，0.851）和0.856（95% CI：0.797，0.904）。見表5和圖1。

表5 LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p表達及兩者聯合預測HPV陽性宮頸癌患者術后復發的效能分析

圖1 LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p表達及兩者聯合預測HPV陽性宮頸癌患者術后復發的ROC曲線

3 討論

宮頸癌為臨床常見的生殖道惡性腫瘤，其病因目前尚不明確，可能與分娩次數、病毒感染、不良性行為等因素有關，隨著疾病的進展可能導致尿管梗阻、尿毒癥等疾病的發生，需及時進行治療[11-13]。目前臨床多采用宮頸癌根治術對宮頸癌患者進行治療，其治療效果確切，但術后復發率仍高達20% 左右，嚴重威脅著患者的生命健康[14-15]。通過對LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p 表達與HPV 陽性宮頸癌根治術術后復發的關系進行探討，對臨床預測該類患者的預后具有重要意義。

本研究結果顯示，臨床分期Ⅲ期和Ⅱ期宮頸癌組織LncRNA PCGEM1 mRNA 相對表達量高于Ⅰ期，miR-642a-5p mRNA 相對表達量低于Ⅰ期；Ⅲ期宮頸癌組織LncRNA PCGEM1 mRNA 相對表達量高于Ⅱ期，miR-642a-5p mRNA 相對表達量低于Ⅱ期，提示隨著HPV 陽性宮頸癌的進展，宮頸癌組織LncRNA PCGEM1 表達異常升高，miR-642a-5p 表達異常降低。本研究中，HPV 陽性宮頸癌患者術后復發率為15.22%，提示HPV 陽性宮頸癌患者術后復發率較高，與既往陳煙培等[16]研究結果14.39%相接近。本研究結果表明，復發組與未復發組患者臨床分期、分化程度、宮頸浸潤深度、盆腔淋巴結轉移、腫瘤最大直徑，以及宮頸癌組織LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p mRNA 相對表達量比較有差異，復發組宮頸癌組織LncRNA PCGEM1 mRNA相對表達量高于未復發組，miR-642a-5p mRNA 相對表達量低于未復發組；多因素Logistic 逐步回歸分析結果顯示，臨床分期Ⅲ期、盆腔淋巴結轉移、宮頸癌組織LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p 表達均為影響HPV 陽性宮頸癌患者術后復發的危險因素。分析原因可能為，臨床分期與惡性腫瘤的進展密切相關，可直接影響患者的預后，臨床分期越晚術后復發的發生風險也就越大；存在盆腔淋巴結轉移患者，可在一定程度上增加腫瘤的負荷，故復發的危險相對較高[17]；LncRNA PCGEM1 表達與多種惡性腫瘤的發生有關，其高表達可促進腫瘤發生、發展，有關報道[18-19]指出，LncRNA PCGEM1可通過RhoA 通路誘導卵巢癌腫瘤的發生、發展；LncRNA 和miR-642a-5p 均與惡性腫瘤的發生有關，且兩者存在一定的聯系，miR-642a-5p 表達降低時，可減少對LncRNA 的抑制作用，可促進腫瘤細胞的增殖、遷移等，進而有可能增加術后復發的發生風險[20]。故在臨床中應對以上影響HPV 陽性宮頸癌患者術后復發的危險因素進行調控，以降低該類患者術后的復發率。

ROC 曲線分析結果顯示，宮頸癌組織LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p 表達及兩者聯合預測HPV陽性宮頸癌患者術后復發的敏感性分別為75.00%、78.57%和75.00%，特異性分別為78.21%、73.08%和96.15%，AUC 分別為0.724、0.796 和0.856，提示宮頸癌組織LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p 表達與HPV 陽性宮頸癌患者根治術后復發相關，且兩者聯合對宮頸癌根治術后復發的預測效能較高。分析其可能機制為：LncRNA PCGEM1 可通調控性激素受體表達，進而參與宮頸癌的發生發展，可在一定程度上影響該類患者的預后。王勁等[21]研究報道，LncRNA PCGEM1 在結腸癌細胞中呈高表達，但其具體作用機制目前尚不清楚。miRNA 在惡性腫瘤的發生、發展中具有重要作用，可調節腫瘤發生相關過程（如細胞周期、炎癥、分化、凋亡及侵襲等），低表達miR-642a-5p 可通過調控下游細胞蛋白因子的表達，促進癌細胞的增殖、侵襲[22]，進而可影響HPV 陽性宮頸癌患者根治術后復發。

綜上所述，宮頸癌組織LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p 表達與HPV 陽性宮頸癌根治術后復發相關，且兩者聯合對宮頸癌根治術后復發的預測效能較高。建議在臨床中可通過檢測宮頸癌組織LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p 表達對該類患者的預后進行評估，以更好地指導臨床制訂周密的治療防治及預后措施。