原發性高血壓患者血清miR-192 表達水平與左室肥厚的關系

杜高波，賈小鳳，余 強，李曉鵑

（黃石市中心醫院，湖北理工學院附屬醫院心血管內科，湖北 黃石 435000）

隨著我國居民飲食結構的改變，原發性高血壓患病率逐年升高，且發病年齡日趨年輕化[1]，已成為威脅我國人群健康的重大公共衛生問題。研究表明[2]，長期持續存在的高血壓會導致心臟及血管結構發生改變，并可引發一系列的并發癥。其中，由心室重構引起的左心室肥厚是導致患者心律失常、心肌梗死、心力衰竭甚至死亡的主要原因[3]，因此，如何逆轉或減緩左心室肥厚在高血壓治療中尤為重要。有研究指出[4]，心肌發生纖維化與心室重構關系密切。微小RNA-192（microRNA-192，miR-192）作為miRNA 重要類型，參與了肝臟[5]、皮膚疤痕[6]等多種器官纖維化過程，是否與高血壓心室重構所致左心室肥厚有關，鮮有報道。本研究分析了高血壓患者血清中miR-192 表達與左心室肥厚相關性，探討其在高血壓左心室肥厚中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年6 月至2019 年12 月在黃石市中心醫院治療的原發性高血壓患者，納入標準：（1）年齡在18 歲以上，符合原發性高血壓診斷標準[7]；（2）臨床資料完整；（3）初診或既往雖診斷但未接受規范降壓藥物治療。排除標準：（1）繼發性高血壓，或服用降壓藥物治療者；（2）合并糖尿病、高血脂者；（3）合并心肌病、心力衰竭、心房顫動、卒中者；（4）肝腎等重要臟器嚴重功能障礙患者；（5）重度感染、惡性腫瘤、免疫疾患者。共納入187 例，其中，男性101 例，女性86 例，平均年齡（59.34±9.84）歲。本研究獲得醫院倫理委員會批準，患者行知情同意。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集收集患者一般情況、收縮壓、舒張壓、高血壓病程、煙酒嗜好及高血壓家族史，計算體重指數（BMI），以及空腹血糖（FBG）、血脂[總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白-C（LDL-C）和高密度脂蛋白-C（HDL-C）]、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）和超敏-C 反應蛋白（hs-CRP）等生化指標。

1.2.2 超聲心動圖檢查患者行超聲心動圖檢查，檢查由超聲科具有高級職稱的醫師利用德國西門子公司生產的SC2000 超聲診斷系統完成。分別獲取左心室后壁厚度（LVPWd）、室間隔厚度（IVST）、舒張末期和收縮末期左心室內徑（LVEDD、LVESD）、舒張末期和收縮末期左心室容積（LVEDV、LVESV）、左心房前后徑（LAD）和左心室射血分數（LVEF），均測量3 個心動周期，取均值。計算左心室質量（LVM）=0.8×1.04×[（IVST+LVEDD+LVPWT）3—LVEDD3]+0.6，左心室質量指數（LVMI）=LVM/身高2.7，左心室肥厚判定標準[8，9]：男性LVMI >49.2 g/m2.7，女性LVMI >46.7 g/m2.7。根據是否合并左心室肥厚，將患者分為肥厚組和對照組。

1.2.3 實時熒光定量PCR 術檢測血清中miR-192 表達患者抽取晨起空腹肘靜脈血5 mL，室溫下靜置60 min，離心（3 500 r/min，半徑13.5 cm）15 min，留取上層血清，保存于-80℃冰箱保存。取凍存血清，室溫融化，根據總RNA 提取試劑盒（上海斯信公司，貨號：239435）提供的操作步驟提取總RNA，利用紫外分光光度儀（購自日本島津公司）檢測其濃度。按照反轉錄試劑盒（日本TaKaRa 公司，貨號：RR037A）操作步驟將總RNA 轉錄為cDNA。按照PCR 擴增試劑盒（日本TaKaRa 公司，貨號：RR390A）操作步驟，利用StepOnePlus 型實時熒光定量PCR 儀（美國ABI 公司）對引物體系進行擴增。引物序列：miR-192：上 游：5 ′-CTGACCTATGAATTGACAGCCGT-3′，下游：5′-ATCCAGTGCAGGGTCCGA-3′；U6：上游：5′-GAGAAGATTAGCATGGCCCCT-3′，下游：5′-ATATGGAACGCTTCACGAATTTG C-3′。反應條件：94 ℃ 3 min，94 ℃ 30 s，54 ℃30 s，70 ℃ 30 s，38 個循環，每個樣本設復孔6 個。用2-△△Ct法計算血清中miR-192 表達量。

1.2.4 酶聯免疫吸附試驗（ELISA 法）檢測血清中心肌纖維化指標取凍存血清，室溫融化，利用ELISA 法檢測血清中轉化生長因子β1（TGF-β1）、Ⅰ型前膠原羧基末端肽（PⅠCP）和Ⅲ型前膠原氨基端肽（PⅢNP）水平，試劑盒購自上海通蔚公司（貨號分別為：3683、01869、3215），所有操作均按試劑盒說明完成。

1.3 統計學處理

2 結果

2.1 2 組患者臨床基礎資料和超聲心動圖指標比較

經超聲心動圖檢查，187 例原發性高血壓患者中，76 例出現左心室肥厚（肥厚組），111 例未發現左心室肥厚（對照組），與對照組比較，肥厚組患者LVPWT、IVST、LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LAD、LVMI 和hs-CRP 均升高（P<0.05），見表1。

表1 2 組患者一般資料比較（）Tab.1 Comparison on the general data of patients between the two groups（）

表1 2 組患者一般資料比較（）Tab.1 Comparison on the general data of patients between the two groups（）

*P < 0.05。

2.2 2 組患者血清中miR-192、TGF-β1、PⅢNP和PⅠCP 水平比較

與對照組比較，肥厚組患者血清中miR-192、TGF-β1、PⅢNP 和PⅠCP 水平升高（P<0.05），見表2。

表2 2 組患者血清中miR-192、TGF-β1、PIIINP 和PICP 水平比較[（），μg/L]Tab.2 Comparison on the serum levels of miR-192，TGF-β1，PIIINP and PICP in patients between the two groups[（），μg/L]

表2 2 組患者血清中miR-192、TGF-β1、PIIINP 和PICP 水平比較[（），μg/L]Tab.2 Comparison on the serum levels of miR-192，TGF-β1，PIIINP and PICP in patients between the two groups[（），μg/L]

*P < 0.05。

2.3 原發性高血壓患者血清中miR-192 水平與超聲心動圖和心肌纖維化指標相關性

Pearson 相關分析結果顯示，血清中miR-192 與LVPWT、IVST、LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LAD、LVMI、TGF-β1、PⅠCP 和PⅢNP呈正相關（P<0.05），見表3。

表3 原發性高血壓患者血清中miR-192 水平與超聲心動圖和心肌纖維化指標相關性Tab.3 Correlation of the serum level of miR-192 with the indexes of echocardiography and myocardial fibrosis in patients with essential hypertension

2.4 原發性高血壓患者血清中miR-192 水平影響因素分析

在排除一般資料的影響后，以原發性高血壓患者血清miR-192 水平作為因變量，把超聲心動圖指標和心肌纖維化指標作為自變量，開展多元線性回歸分析，LVPWT、IVST、LVEDD、LVESV、TGF-β1、PⅠCP 和PⅢNP 是影響血清miR-192水平的相關因素（P<0.05），見表4。

表4 原發性高血壓患者血清miR-192 水平的多元影響因素分析Tab.4 Analysis on the multivariate influencing factors of the serum level of miR-192 in patients with essential hypertension

3 討論

左心室肥厚作為心臟對血壓升高的一種適應性變化，在高血壓患者中發生率較高，本研究中，187 例原發性高血壓患者中40.64%并發有左心室肥厚，與以往研究報道相當[10]。早期的左心室肥厚有利于維持正常的泵血功能，但隨著時間延長，會導致患者心肌順應性會降低、耗氧量增多，最終引發心衰甚至死亡，已成為心血管事件發生及死亡的重要風險因素[11]。因此，積極探討高血壓左心室肥厚發病機制或風險因素對高血壓病的綜合防治具有重要意義。miRNA 作為機體內廣泛存在的參與多種生理、病理過程的高度保守的短鏈RNA，與心血管疾病發生、發展密切相關，參與調解心肌細胞生長，并在心肌重構、纖維化中發揮重要作用[12]。本研究結果顯示，miR-192 在肥厚組患者血清中表達水平較對照組明顯升高，說明miR-192 表達與高血壓患者發生左心室肥厚相關，出現了高表達，同時，相關分析發現，血清miR-192 與超聲心動圖指標LVPWT、IVST、LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LAD 和LVMI 呈正相關，進一步說明miR-192 與高血壓左心室肥厚有關，但具體作用機制尚待進一步研究明確，本研究中并未發現血清miR-192 與LVEF 相關，分析原因可能與心臟功能代償有關，從而導致左心室肥厚以保證LVEF 能夠滿足身體供血需要。

有研究指出[13]，高血壓左心室肥厚以心肌細胞肥大及細胞外基質重構為主要表現。左心室肥厚早期以心肌細胞肥大為主要表現，從而代償性降低室壁張力以維持正常的射血功能，但隨著病變進展，大量凋亡的心肌細胞發生凋亡并由細胞外基質替代，從而引起射血能力減低、心臟功能出現惡化。膠原是構成細胞外基質的重要組分，其合成、降解及構造異常在促使心肌纖維化導致心肌重構中發揮重要作用，具體表現為血清PⅠCP 和PⅢNP 水平升高[14]。TGF-β1 介導的信號通路則是心肌纖維化中主要通路[15]。本研究結果顯示，肥厚組患者血清中TGF-β1、PⅢNP 和PⅠCP 水平較對照組升高，且血清miR-192 與TGF-β1、PⅠCP 和PⅢNP 呈正相關，說明原發性高血壓患者合并左心室肥厚時出現血清中miR-192 表達水平出現升高，可能與心肌細胞外基質重構及心肌纖維化有關。本研究顯示，LVPWT、IVST、LVEDD、LVESV、TGF-β1、PⅠCP 和PⅢNP 是影響血清miR-192 水平的相關因素，從另一方面亦說明miR-192 可能是反映高血壓左心室肥厚嚴重程度及心肌纖維化的指標，可能是評估心肌肥厚及心肌纖維化的潛在標志物。

綜上所述，miR-192 在出現左心室肥厚的高血壓患者血清中表達水平升高，且與左心室肥厚指標及心肌纖維化指標相關，有望成為評估高血壓左心室肥厚及心肌纖維化的新的標志物，但鑒于高血壓左心室肥厚病理過程復雜，涉及眾多分子機制，miR-192 具體作用過程尚待進一步研究明確。