結(jié)直腸癌患者HOXA9、FGFR1基因表達(dá)情況及臨床意義研究

鄭華雨

河南省滑縣人民醫(yī)院病理科 456400

結(jié)直腸癌(CRC)是我國發(fā)病率第2位的常見惡性腫瘤，多見于中老年群體，近年來我國CRC發(fā)病率逐年上升，且出現(xiàn)年輕化趨勢[1-2]。目前CRC患病機(jī)制尚未完全明確，研究顯示，多種癌基因、抑癌基因共同參與調(diào)控其發(fā)生發(fā)展[3]。同源盒A9(HOXA9)是HOX基因A簇中的成員之一，有證據(jù)表明其在結(jié)腸癌病灶內(nèi)表達(dá)明顯升高，可能促進(jìn)結(jié)腸癌惡性轉(zhuǎn)變過程[4]。成纖維細(xì)胞生長因子受體1(FGFR1)是一類具有自身磷酸化活性的受體酪氨酸激酶，在多種惡性腫瘤組織中呈高表達(dá)[5]，但其在CRC中的作用機(jī)制尚未明確。基于此，本文探討HOXA9、FGFR1水平變化與CRC患者臨床分期的相關(guān)性。報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 經(jīng)我院倫理委員會審批通過，選取2017年8月—2018年8月我院110例CRC患者，其中男62例，女48例；年齡47～81歲，平均年齡(56.73±7.54)歲；臨床分期(TNM分期)：Ⅰ期21例，Ⅱ期28例，Ⅲ期41例，Ⅳ期20例；腫瘤類型：腺癌102例，鱗腺癌8例；分化程度：高分化18例，中分化34例，低分化58例。CRC臨床分期、腫瘤類型、分化程度均參照《中國結(jié)直腸癌診療規(guī)范(2017年版)》[6]判定。1.2 選例標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①參照《中國結(jié)直腸癌診療規(guī)范(2017年版)》[6]診斷為CRC，并經(jīng)病理診斷確診；②首次檢出；③未接受相關(guān)治療；④患者知曉本研究，已簽署同意書。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他原發(fā)惡性腫瘤者；②自身免疫性疾病患者；③血液系統(tǒng)疾病患者；④具有明顯炎癥細(xì)胞浸潤癌旁組織者。

1.3 方法 所有研究對象均行手術(shù)或組織活檢采集癌組織標(biāo)本及癌旁(距病灶邊緣>5cm，且病理結(jié)果顯示無癌細(xì)胞)正常組織標(biāo)本，取組織標(biāo)本，采用Trizol溶液(購自上海名勁生物科技有限公司)提取組織總RNA，采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(購自賽默飛世爾科技)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，合成cDNA，通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)法檢測癌組織、癌旁正常組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達(dá)情況，qRT-PCR試劑盒購自北京華夏遠(yuǎn)洋科技有限公司，引物設(shè)計(jì)：HOXA9 mRNA上游引物5’-TGTCCCTGACTGACTATGCTT-3’，下游引物5’-TGCTCGGTCTTTGTTGATTTT-3’；FGFR1 mRNA上游引物5’-GGCTGTATGAAAAGGGTGGGAATG-3’，下游引物5’-GGTGCGTCGTGAGGTCTGG-3’；以GAPDH為內(nèi)參基，上游引物5’-ATTGGAACGATACAGAGAAGATT-3’，下游引物5’-GGAACGCTTCACGAATTTG-3’。因引物均由上海生工生物工程股份有限公司合成。反應(yīng)條件：95℃10min；(95℃15s、60℃30 s、72℃30s)×40個循環(huán)。應(yīng)用公式2-ΔΔct計(jì)算HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA相對表達(dá)水平。

1.4 觀察指標(biāo) (1)癌組織、癌旁正常組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達(dá)情況。(2)不同臨床分期CRC患者癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達(dá)情況。(3)分析HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達(dá)與CRC患者臨床分期的相關(guān)性。(4)不同預(yù)后CRC患者癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達(dá)情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)處理采用SPSS22.0軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差描述，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)系數(shù)模型。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癌組織、癌旁正常組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達(dá)比較 CRC患者癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達(dá)量均較癌旁正常組織高(P<0.05)。見表1。

表1 癌組織、癌旁正常組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達(dá)比較

2.2 不同臨床分期癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達(dá)比較 隨著CRC患者臨床分期升高，癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達(dá)量逐漸升高(P<0.05)。見表2。

表2 不同臨床分期癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達(dá)比較

2.3 HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達(dá)與臨床分期的相關(guān)性 通過Spearman相關(guān)系數(shù)模型驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)CRC患者癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達(dá)量與臨床分期間存在正相關(guān)關(guān)系(r=0.601、0.574，P均<0.05)。

2.4 不同預(yù)后癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達(dá)比較 110例CRC患者隨訪過程中失訪3例(家庭住址變遷、聯(lián)系方式變更)，完成隨訪的107例患者中，死亡21例，生存86例，生存率為80.37%(86/107)。死亡患者入院時(shí)癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達(dá)量均較生存患者高(P<0.05)。見表3。

表3 不同預(yù)后癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達(dá)比較

3 討論

CRC患病早期癥狀不明顯，多數(shù)患者確診時(shí)已進(jìn)展至中晚期，近年來CRC在臨床診斷及治療上已取得新突破，但患者遠(yuǎn)期生存率仍較低[7]。探尋新的分子標(biāo)記物作為CRC的早期診斷、治療及預(yù)后評估的參考依據(jù)，一直是臨床研究的重點(diǎn)。

研究顯示，HOXA是人體組織器官正常發(fā)育必需的蛋白，其基因表達(dá)異常可引發(fā)多種疾病，也是導(dǎo)致惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的因素之一[8]。HOXA9是HOXA家族的主要成員，HOXA9蛋白在膀胱癌組織中的表達(dá)上調(diào)，與臨床特征及預(yù)后關(guān)系密切，可為臨床治療提供新思路[9]。本文結(jié)果顯示，CRC患者癌組織中HOXA9 mRNA表達(dá)量明顯高于癌旁正常組織，且與CRC患者臨床分期呈正相關(guān)，說明HOXA9 mRNA在CRC的發(fā)生發(fā)展過程中可能發(fā)揮正向調(diào)節(jié)作用，推測HOXA9 mRNA表達(dá)升高可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。新近研究發(fā)現(xiàn)，CRC癌組織中HOXA9 mRNA與FGFR1 mRNA表達(dá)量呈正相關(guān)，兩者可能共同促進(jìn)CRC的發(fā)展[10]。本文結(jié)果顯示，CRC患者癌組織中FGFR1 mRNA表達(dá)量均高于癌旁正常組織，與上述研究結(jié)果一致，且FGFR1 mRNA表達(dá)量與患者臨床分期間存在正相關(guān)關(guān)系，提示FGFR1 mRNA在CRC發(fā)生發(fā)展過程中也可能發(fā)揮促癌作用。FGFR1被證實(shí)是一種血管源性生長因子受體，與血管形成及維持血管通透性密切相關(guān)，其基因表達(dá)增加可通過上調(diào)FGFR1蛋白水平促進(jìn)腫瘤新血管生成，為腫瘤的發(fā)生發(fā)展提供有利條件[11]。相關(guān)研究顯示，敲減FGFR1基因表達(dá)可通過影響PI3K/AKT信號通路抑制嬰幼兒血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的活力，并誘導(dǎo)其凋亡，阻礙細(xì)胞遷移和侵襲，從而控制腫瘤進(jìn)展[12]。結(jié)合本文結(jié)果推測抑制HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達(dá)可能作為控制CRC發(fā)生發(fā)展的新靶點(diǎn)。此外，本文進(jìn)一步探討了HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達(dá)與CRC患者遠(yuǎn)期預(yù)后的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)預(yù)后為死亡患者入院時(shí)癌組織中HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達(dá)量明顯高于生存患者，提示兩者表達(dá)升高可增加患者病死率，推測早期檢測HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA表達(dá)情況可作為判斷CRC患者預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)。

綜上所述，HOXA9 mRNA、FGFR1 mRNA在CRC患者癌組織過表達(dá)，其表達(dá)量與患者臨床分期及預(yù)后密切相關(guān)。