免疫增強劑對鯉血清中免疫酶指標的影響

張振國，羅 璋，郝 爽，徐赟霞，尤宏爭，趙良煒，王 禹，馮守明

( 1.天津市動物疫病預防控制中心，天津 300400；2.天津市水產研究所，天津 300221)

鯉(Cyprinuscarpio)是天津市淡水養殖主要養殖品種，隨著其養殖規模增加，養殖密度也不斷提高，同時也帶來了病害的頻發。近年來天津市養殖鯉病毒病較為嚴重，給養殖戶帶來較大的經濟損失。目前困擾天津市鯉養殖的主要是鯉浮腫病毒(Carp edema virus)，檢出率非常高，該病毒2016年在國內首次被發現，且死亡率較高[1]，還有困擾鯉養殖的錦鯉皰疹病毒(Koi herpesvirus)一直沒有較好的治療方法。 由于魚類病毒病還沒有特效藥物來治療，因此主要是靠預防為主，即降低養殖密度，調節水質，增強魚體抵抗力等。本試驗中對鯉投喂一種復合免疫增強劑，主要成分為多糖類、中草藥以及維生素類，可有效提高魚體血清中免疫酶的含量，對預防魚類病毒病起到重要作用。

1 材料與方法

1.1 免疫增強劑飼料的制備

復合免疫增強劑為天津市動物疫病預防控制中心自制，主要成分是多糖類、中草藥以及維生素類免疫增強劑。將普通飼料粉碎，添加1%的復合免疫增強劑混勻，通過小型餌料機制備出大小合適的飼料。

1.2 試驗用魚與飼養條件

試驗用鯉購自天津金鎖養殖專業合作社，大小為(50.6±5.3)g，養殖試驗在循環水系統中進行，水溫控制在(25±1)℃。每天9:00和16:00各投喂兩次飼料，馴化1周攝食正常后開展試驗。

1.3 試驗設計

試驗分兩組：普通飼料組和復合免疫增強劑飼料組，每組30尾魚，試驗開始后第7天、第14天、第21天和第28天采血，每組采3尾魚，血樣靜置4 ℃過夜，3 000 r/min離心后取上清，測定血清中免疫酶的含量。

1.4 免疫指標的測定

測定血清中溶菌酶(LZM)、超氧化物氣化酶(SOD)和補體C3含量，試劑盒購自上海紀寧實業有限公司，采用雙抗夾心法測定，450 nm波長下測定OD值，每個指標均做標準曲線。依據預試驗結果，首先將血清稀釋10倍，再進行測定。

2 結果

2.1 對溶菌酶含量的影響

鯉血清中溶菌酶含量的標準曲線見圖1，R2等于0.995，數據結果有效。

圖1 溶菌酶標準曲線

總體來看，免疫增強劑可顯著提高鯉血清中LZM活性，隨著時間呈現先升高后降低的趨勢，1周后，免疫組與對照組LZM活性無顯著性差異； 2周后，免疫組LZM活性達到(27.93±3.63)U/mL ，顯著高于正常飼料組LZM活性(14.21±0.87)U/mL(P<0.05)； 3周后LZM活性下降為(21.79±3.03)U/mL，與2周時有顯著性差異(P<0.05)；4周后LZM活性顯著下降，與基礎飼料組相當。見圖2。

注：不同字母表示組間差異顯著(P<0.05)，下同。圖2 復合免疫增強劑對鯉血清中溶菌酶含量的影響

2.2 對超氧化物歧化酶含量的影響

鯉血清中超氧化物歧化酶含量的標準曲線見圖3，R2等于0.999，數據結果有效。

圖3 超氧化物歧化酶標準曲線

總體來看，免疫增強劑可顯著提高鯉血清SOD活性，隨著時間呈現先升高后降低的趨勢，1周后，免疫組與對照組SOD活性無顯著性差異；2周后，免疫組SOD活性達到456.43±59.96 U/mL，顯著高于正常飼料組SOD活性346.43±46.91 U/mL(P<0.05)；3周后SOD活性下降為416.43±45.96 U/mL，但與2周時差異不顯著(P>0.05)；4周后SOD活性顯著下降，與基礎飼料組相當(見圖4)。

圖4 復合免疫增強劑對鯉血清中超氧化物歧化酶含量的影響

2.3 對補體C3含量的影響

鯉血清中補體C3含量的標準曲線見圖5，R2等于0.998，數據結果有效。

圖5 補體C3標準曲線

總體來看，免疫增強劑可顯著提高鯉血清補體C3含量，隨著時間呈現先升高后降低的趨勢， 1周后，免疫組與對照組血清補體C3含量無顯著性差異；2周后，免疫組血清補體C3含量達到523.57±26.10 μg/mL ，顯著高于正常飼料組補體C3含量391.07±29.36 μg /mL(P<0.05)； 3周后補體C3含量下降為491.43±60.89 μg/mL，但與2周時差異不顯著(P>0.05)；4周后補體C3含量顯著下降，與基礎飼料組相當。見圖6。

圖6 復合免疫增強劑對鯉血清中補體C3含量的影響

3 討論與結論

研究表明：投喂復合免疫制劑后德國鏡鯉的白細胞吞噬率和紅細胞C3b受體花環率顯著高于對照組，人工感染死亡率低于對照組[2]。復合中草藥制劑投喂黃顙魚30 d后，黃顙魚血液中白細胞的吞噬活性、血清中溶菌酶和補體活性均顯著高于對照組[3]。投喂免疫增強劑后大菱鲆和血鸚鵡的溶菌酶活性、堿性磷酸酶活性和總超氧化物歧化酶活性皆顯著高于對照組[4]。復方中草藥制劑投喂牙鲆30 d后，血清中堿性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(ACP)、超氧化物歧化酶(SOD)以及溶菌酶(LZM)活性水平均顯著高于對照組，并提高牙鲆抗遲鈍愛德華氏菌感染能力[5]。復合免疫增強劑投喂金鱒14 d后，溶菌酶(LZM)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性及補體C3的含量顯著高于對照組，并提高金鱒對細菌病的抵抗力[6]。免疫增強劑不僅可以提高魚類的非特異性免疫功能，還對對蝦、蟹、鱉、刺參等水產養殖動物具有較好的疾病預防功能[7-10]。投喂鯉本復方免疫增強劑14 d后，其血清中溶菌酶、超氧化物歧化酶以及補體C3的含量顯著提高，進而提高魚體非特異性免疫力，對預防鯉疾病起到了重要的作用，但在養殖過程中需要間隔投喂。