肺癌患者癌組織中SHIP2、PLEK2蛋白表達(dá)水平及其臨床預(yù)后意義

周 宇

肺癌是目前全球發(fā)病率和致死率最高的惡性腫瘤之一，雖然目前我國肺癌的治療手段已得到不斷進(jìn)步，但中晚期肺癌患者的預(yù)后仍較差，特別腫瘤的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)極容易影響患者術(shù)后的生存期[1]。因此，早期尋找評估肺癌預(yù)后的有關(guān)分子靶點(diǎn)和轉(zhuǎn)移診斷標(biāo)志物，已成為目前科研和臨床工作者研究的熱點(diǎn)與難點(diǎn)。含SH2結(jié)構(gòu)域的Ⅱ型5'肌醇磷酸酶2(SHIP2)是一種脂質(zhì)磷酸酶，近年來已有研究發(fā)現(xiàn)，SHIP2蛋白在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要價(jià)值[2]。Pleckstrin2(PLEK2)是最早發(fā)現(xiàn)于血小板及白細(xì)胞中的Pleckstrin蛋白家族成員[3]，既往有研究顯示，PLEK2與癌細(xì)胞的遷移及侵襲密切相關(guān)[4]。但目前國內(nèi)關(guān)于SHIP2、PLEK2蛋白表達(dá)與肺癌臨床預(yù)后的關(guān)系研究文獻(xiàn)尚少。因此，本研究主要分析肺癌患者癌組織中SHIP2、PLEK2蛋白表達(dá)水平及其臨床預(yù)后意義，以期為肺癌的診治提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年8月至2018年8月我院確診并進(jìn)行手術(shù)治療的97例肺癌患者作為本研究對象，其中年齡40～80歲，平均年齡(60.22±5.10)歲；男性49例，女性48例。本研究已獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合肺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，并經(jīng)病理檢查已確診；②患者/家屬知情同意；③所有患者均進(jìn)行手術(shù)治療，且術(shù)前均未接受放、化療或其他抗腫瘤輔助治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有腦血管疾病、免疫功能疾病、嚴(yán)重感染性疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病以及合并其他惡性腫瘤及其他影響免疫化結(jié)果的嚴(yán)重疾病者；②嚴(yán)重心肝腎功能不全者；③術(shù)前經(jīng)放療、化療及生物等其他抗腫瘤治療者；④既往精神病史或存在語言、認(rèn)知功能障礙者者；⑤臨床資料不全者。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)檢測SHIP2、PLEK2蛋白表達(dá) 收集手術(shù)切除的97例肺癌患者的癌組織標(biāo)本及其癌旁組織(距離癌組織邊緣5 cm以上的無癌肺組織)標(biāo)本。經(jīng)石蠟包埋、4 μm連續(xù)切片、脫蠟、水化以及蘇木精染色后確定病變區(qū)域。加入3% H2O2溶液去除內(nèi)源性過氧化物酶，采用檸檬酸修復(fù)液高溫高壓修復(fù)抗原，冷卻后經(jīng)PBS漂洗3次(每次3 min)，隨后加入一抗(產(chǎn)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司的兔抗人SHIP2單克隆抗體)4 ℃孵育過夜，PBS漂洗3次(每次3 min)，再加入二抗(產(chǎn)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司的兔抗人PLEK2多克隆抗體)37 ℃孵育30 min，PBS漂洗3次(每次3 min)，最后使用DAB顯色、蘇木精復(fù)染、梯度乙醇脫水以及樹脂膠封片，最后在鏡下觀察染色情況，其中陰性對照組以PBS為一抗。一切操作均嚴(yán)格按照SP試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.2 SHIP2、PLEK2蛋白表達(dá)結(jié)果判定 免疫結(jié)果由兩位高年資的病理醫(yī)師共同采用雙盲法完成，SHIP2、PLEK2陽性表達(dá)定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞核中，并呈黃色或棕黃色顆粒狀分布。病理醫(yī)師每個(gè)切片隨機(jī)選擇4個(gè)視野(每個(gè)視野至少含100個(gè)細(xì)胞)，并按照細(xì)胞染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分比得出免疫組織化學(xué)染色評分。陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度評分：無色為0分、淺黃色為1分、棕色為2分、深褐色為3分。陽性細(xì)胞占總細(xì)胞百分比：<5%為0分、5%～25%為1分、26%～50%為2分、51%～75%為3分、>75%為4分。最終得分為陽性細(xì)胞百分比分?jǐn)?shù)和染色強(qiáng)度平均分?jǐn)?shù)的乘積，其中得分≥3分為高表達(dá)(陽性表達(dá))，< 3分為低表達(dá)(陰性表達(dá))[6]。

1.3 隨訪

所有患者以術(shù)后出院為觀察點(diǎn)，并采用電話、門診復(fù)診或者上門等方式結(jié)合患者復(fù)診病歷隨訪3年，隨訪截止時(shí)間為2021年8月31日或患者發(fā)生轉(zhuǎn)移或死亡，隨訪時(shí)間為2～40個(gè)月。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用IBM公司SPSS 23.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，SHIP2、PLEK2表達(dá)等計(jì)數(shù)資料以百分比(%)表示，采用四格表χ2檢驗(yàn)比較；采用Kaplan-Meier法評估不同臨床病理特征肺癌患者生存情況，單因素和多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析影響肺癌患者預(yù)后的相關(guān)因素，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺癌組織、癌旁組織SHIP2、PLEK2蛋白表達(dá)比較

癌組織中SHIP2、PLEK2蛋白高表達(dá)率均明顯高于癌旁組織(P<0.001)，見表1。

表1 肺癌組織、癌旁組織SHIP2、PLEK2表達(dá)的比較(例，%)

2.2 SHIP2、PLEK2蛋白表達(dá)與肺癌臨床病理特征的關(guān)系

SHIP2、PLEK2蛋白表達(dá)與肺癌患者的年齡、性別、分化程度、腫瘤大小均無明顯關(guān)系(P>0.05)；但與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在顯著關(guān)系(P<0.05)，見表2。

表2 SHIP2、PLEK2蛋白表達(dá)與宮頸癌不同臨床病理特征的關(guān)系/例

2.3 肺癌患者預(yù)后情況

肺癌患者3年生存率為42.27%(41/97)。SHIP2高表達(dá)、低表達(dá)組患者3年生存率分別為31.67%(19/60)、59.46%(22/37)；PLEK2高表達(dá)、低表達(dá)組患者3年生存率分別為33.87%(21/62)、57.14%(20/35)。SHIP2、PLEK2高表達(dá)、低表達(dá)組3年生存率比較均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=6.253、4.965，P<0.05)。

2.4 肺癌預(yù)后單因素分析

單因素分析得出：TNM Ⅲ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、SHIP2高表達(dá)、PLEK2高表達(dá)肺癌患者3年生存率均明顯降低(P<0.05)，見表3。

表3 肺癌預(yù)后單因素分析(例，%)

2.5 肺癌預(yù)后影響因素多因素Cox回歸分析

多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析得出：TNM Ⅲ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、SHIP2高表達(dá)、PLEK2高表達(dá)均為影響肺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見表4。

3 討論

肺癌是呼吸系統(tǒng)常見腫瘤，早期常表現(xiàn)為咳嗽、低熱、痰血等不具有典型特征的癥狀，因此常被忽視，而當(dāng)多數(shù)患者由于呼吸困難、咳血等癥狀就診時(shí)已進(jìn)展至中晚期，而此時(shí)雖經(jīng)放療、化療、手術(shù)等綜合治療能夠控制疾病惡化，但仍有癌細(xì)胞因發(fā)生轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散導(dǎo)致患者預(yù)后生存期不理想[7]。目前我國對肺癌的影響因素、發(fā)病機(jī)制等方面雖已有較多研究，但由于其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜并受多因素影響，臨床對肺癌的診斷和治療效果仍不明顯，因此，為了提高治療效果、降低復(fù)發(fā)率和病死率，需進(jìn)一步探尋早期對肺癌診斷的標(biāo)志物和預(yù)后的影響因子[8]。本次研究主要是分析肺癌患者癌組織中SHIP2、PLEK2蛋白表達(dá)水平及其臨床預(yù)后意義。

本研究結(jié)果顯示，癌組織中SHIP2、PLEK2蛋白高表達(dá)率均明顯高于癌旁組織(P<0.05)，表示SHIP2、PLEK2蛋白高表達(dá)與肺癌的發(fā)生密切相關(guān)。有相關(guān)研究顯示，SHIP2蛋白表達(dá)在乳腺癌組織中呈高表達(dá)[9]。有研究顯示，胃癌組織中PLEK2蛋白高表達(dá)含量高于癌旁組織[10]。同時(shí)本研究顯示，SHIP2、PLEK2蛋白表達(dá)與肺癌患者的TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在顯著關(guān)系(P<0.05)，說明SHIP2、PLEK2高表達(dá)可能引起肺癌患者癌組織進(jìn)一步惡化，可能在肺癌發(fā)展中起促癌作用。本研究結(jié)果顯示，SHIP2、PLEK2高表達(dá)組患者3年生存率均明顯低于低表達(dá)組(P<0.05)，說明SHIP2、PLEK2蛋白表達(dá)與肺癌預(yù)后密切相關(guān)，其高表達(dá)提示預(yù)后不良。同時(shí)本研究進(jìn)一步經(jīng)單因素、多因素Cox分析結(jié)果顯示，TNM Ⅲ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、SHIP2高表達(dá)、PLEK2高表達(dá)均為影響肺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)，由此證實(shí)SHIP2、PLEK2高表達(dá)不僅與宮頸癌的發(fā)生、進(jìn)展以及預(yù)后有關(guān)，同時(shí)能夠作為評估患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

SHIP包括SHIP1和SHIP2兩種同源物，N端為SH2結(jié)構(gòu)域，既往認(rèn)為SHIP1和SHIP2通過抑制PI3K/AKT信號通路途徑來抑制腫瘤生長。SHIP2位于人類染色體11q13-14，參與細(xì)胞結(jié)構(gòu)的重塑，腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移與細(xì)胞的粘附、遷移功能[11]。SHIP2作為肌醇5'磷酸酶家族成員，能夠通過促進(jìn)PIP3脫磷酸生成PIP2，抑制PI3K/AKT信號通路活化，從而達(dá)到抑制細(xì)胞增殖和促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用[12]。但既往較多研究均發(fā)現(xiàn)，SHIP2蛋白在口腔鱗狀細(xì)胞癌、肝癌等腫瘤中呈高表達(dá)，并能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移與凋亡[13-14]。PLEK2是普列克底物蛋白同源結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)之一，主要參與細(xì)胞骨架和細(xì)胞延伸調(diào)控等作用，有研究表示，PLEK2能夠通過PI3K/AKT依賴和獨(dú)立途徑的T淋巴細(xì)胞遷移發(fā)揮關(guān)鍵作用[15]。同時(shí)既往研究顯示，LEK2在膽囊癌腫瘤組織中表達(dá)能力升高時(shí)能夠促進(jìn)小鼠模型中的膽囊癌細(xì)胞遷移、入侵和肝轉(zhuǎn)移[16]。因此當(dāng)肺癌患者SHIP2、PLEK2蛋白高表達(dá)可導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖，進(jìn)而加重疾病惡化，故臨床通過監(jiān)測SHIP2、PLEK2蛋白表達(dá)可評估肺癌預(yù)后情況。

綜上所述，肺癌患者癌組織中SHIP2、PLEK2蛋白表達(dá)均為高表達(dá)，并與癌組織TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及生存率有關(guān)，是影響肺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。但本研究樣本量較少，因此更多結(jié)果需深入研究。