2022年四川省市級獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室布病檢測能力比對分析

黃雅琳，侯 巍，尹 杰，高 露，李盛瓊，楊天俊，陽愛國

（四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041）

目前，獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室主要承擔(dān)動(dòng)物疫病病原學(xué)監(jiān)測，動(dòng)物免疫效果檢測及疫病診斷等工作［1］。為進(jìn)一步評價(jià)和提高四川省各市（州）獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室管理水平和檢測能力，需要不定期對實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測能力比對。2022 年6 月，四川省組織開展了全省市級獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測能力比對工作，以期為全省獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室的進(jìn)一步建設(shè)和發(fā)展提供參考。

1 材料與方法

1.1 比對項(xiàng)目設(shè)計(jì) 在全省20個(gè)市級獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行布魯氏菌病抗體的檢測比對。

1.2 比對盲樣與試劑 每個(gè)比對實(shí)驗(yàn)室設(shè)置4個(gè)盲樣，盲樣由四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心統(tǒng)一測試和發(fā)放，試劑由各市級動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心自行提供，其中使用A 廠家11 個(gè)，B 廠家9個(gè)。

1.3 方法 采用相應(yīng)的國家現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)（GB/T 18646-2018）進(jìn)行比對（表1）。

表1 比對項(xiàng)目及方法

1.4 比對結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)陰性血清不出現(xiàn)凝集、標(biāo)準(zhǔn)陽性血清出現(xiàn)凝集時(shí)試驗(yàn)成立，方可對受檢血清進(jìn)行判定。出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象者判定為陽性（＋），無凝集現(xiàn)象且反應(yīng)混合液呈均勻粉紅色者判定為陰性（-）。

2 比對結(jié)果

2.1 市級獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室比對結(jié)果 詳見表2。

2.2 試劑使用情況比對結(jié)果 詳見表3。

表2 市級獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室比對結(jié)果

表3 不同廠家抗原比對結(jié)果

3 討論

通過此次比對結(jié)果分析，我們發(fā)現(xiàn)造成比對結(jié)果不理想的原因可能有以下幾點(diǎn)：（1）實(shí)驗(yàn)試劑對結(jié)果影響很大，分別使用A、B兩個(gè)廠家試劑檢測盲樣得出的符合率有很大差別，說明選擇敏感性高的試劑很重要，部分實(shí)驗(yàn)會因試劑敏感性的不同而產(chǎn)生不同的結(jié)果；（2）實(shí)驗(yàn)過程中的細(xì)節(jié)把控很重要，實(shí)驗(yàn)過程容易受到許多外界因素影響，包括試劑、檢測樣本的平衡時(shí)間和溫度，平板的材質(zhì)（是否使用玻璃板），凝集反應(yīng)觀察的時(shí)間；（3）實(shí)驗(yàn)人員的觀察能力也很重要，對經(jīng)驗(yàn)有一定要求，可能對同樣的結(jié)果出現(xiàn)不同的判讀標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)在日光下觀察，否則容易將弱陽性誤判為陰性。

根據(jù)《國家布魯氏菌病防治計(jì)劃（2016-2020年）》的相關(guān)要求，實(shí)驗(yàn)室檢測是畜間布病防治的重要技術(shù)措施，縣級動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)應(yīng)具備開展布病血清學(xué)檢測的能力。各市（州）應(yīng)不斷提高獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測能力，以更加高效科學(xué)地完成轄區(qū)內(nèi)動(dòng)物疫病的防治和檢測任務(wù)，為本地動(dòng)物防疫工作提供保證。

目前，血清學(xué)檢測方法是現(xiàn)有的診斷布魯氏菌病最廣泛的方法，其中間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（iELISA）、膠體金檢測試紙條、虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）均為動(dòng)物布魯氏菌病的初篩方法。在國標(biāo)方法中，iELISA敏感性較高［2］，靈敏性和特異性好，通過酶標(biāo)儀直接讀數(shù)可避免主觀判斷帶來的誤差，但需在實(shí)驗(yàn)室由專業(yè)技術(shù)人員操作，檢測時(shí)間長，不適用于基層大量初篩。膠體金檢測試紙條具有靈敏度高、特異性好、血清用量少、操作簡便、快速等優(yōu)點(diǎn)，但存在定量問題、質(zhì)控指標(biāo)不一等不足之處。RBT是國標(biāo)規(guī)定的初篩方法，具有操作簡便、檢測快速、價(jià)格便宜、敏感性高的特點(diǎn)，適用于動(dòng)物布病檢測的初步篩查，是重要的檢測方法，也是檢測布魯氏菌抗體最常用的方法之一。RBT 是各獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室日常監(jiān)測布魯氏菌病，基層大量初篩的最常見檢測方法，因而作為此次實(shí)驗(yàn)室比對的首選實(shí)驗(yàn)方法。

目前布病的血清學(xué)檢測方法中還沒有一種完全具備敏感性高、特異性強(qiáng)、操作簡便、檢測速度快和檢測成本低等優(yōu)點(diǎn)的檢測方法，在布病檢測的實(shí)際臨床應(yīng)用中，一般是兩種或兩種以上的方法聯(lián)合應(yīng)用，通過對不同檢測方法的結(jié)果進(jìn)行比較分析來驗(yàn)證結(jié)果的準(zhǔn)確性。有研究發(fā)現(xiàn)，采用RBT 初篩，再用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）與ELISA 進(jìn)行聯(lián)合診斷，用于陽性畜的撲殺最為理想［3］。

4 結(jié)論

此次比對結(jié)果說明四川省各市（州）應(yīng)加強(qiáng)對布魯氏菌病檢測能力的提升，各獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室更需要熟練掌握RBT 等檢測方法，注重實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)以便獲得準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，充分發(fā)揮獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室在人畜共患病防控工作中的技術(shù)支撐作用。