牛副結核病診斷與防控

何 春，吳利芳，周國燕，張 濤，黃劍鋒

（1.四川省涼山州農業科學研究院，四川 西昌 615000；2.四川省西昌市農業農村局，四川 西昌 615000）

1 病原及危害

1.1 病原 牛副結核病的致病病原是副結核分枝桿菌，是一種寬在0.3～0.5 μm之間，長在0.5～1.5 μm之間的革蘭氏陽性小桿菌，屬于分枝桿菌科分枝桿菌屬。

副結核分枝桿菌無鞭毛、無莢膜、無芽孢、需氧。根據菌株特性及致病力可將副結核分枝桿菌分為Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。其中，造成牛副結核病的為Ⅱ型菌株。

由于副結核分枝桿菌不能產生分枝桿菌素，因此無法在自然環境下進行增殖。該菌有較強的抵抗力，在外界環境中11個月，在糞便和土壤中數月，在河水中5～6周仍能保持活性，其生長的最適溫度在38～40 ℃之間，最適pH 值為7.0 左右。副結核分枝桿菌對高溫敏感，在63 ℃下30 min，在70 ℃下20 min，在80 ℃下5 min 失去活性。另外，3%來蘇爾和3%甲醛等消毒劑處理可使其失去感染性。對副結核分枝桿菌進行培養發現，培養基上生長出無色、透明的半球形菌落，隨著培養時間的增加，菌落顏色變暗，形狀變為乳頭樣。

1.2 危害 副結核分枝桿菌主要感染牛的消化系統，導致病牛出現慢性腸炎。病菌最先感染小腸系膜以及腸淋巴結。前期感染不會導致牛出現臨床癥狀，感染嚴重時，病牛腸道嚴重病變，最終病菌分布于全身。副結核分枝桿菌可導致病牛嚴重腹瀉、腸道出血，產奶量下降、機體消瘦。該病在世界范圍內廣泛流行，人感染后可發生腸道過敏或潰瘍性腸炎。

2 流行病學

2.1 傳染源 牛副結核病的主要傳染源是病牛和帶菌牛。

2.2 易感動物 主要易感動物是牛，尤其是6月齡以內的犢牛，其次是鹿、山羊和綿羊等反芻動物及犀牛、野牛、野羊等野生動物。此外駱駝、馬、豬、猴、狐貍、斑鳩、烏鴉、鴿等動物和人類也可感染。

2.3 傳播途徑 病菌主要通過飲水、飼料、用具等經由消化系統傳播，少部分病例經血液傳播。奶牛感染后可通過母乳將病菌傳播給犢牛，及通過子宮垂直傳播給胎兒。

2.4 流行特點 該病多呈地方性流行，發病率不高，發病緩慢，但死亡率極高，其可快速傳播，難以根除。本病潛伏期通常為半年至一年甚至更長，其一年四季均可發生，春季、秋季發病率最高。妊娠期和哺乳期母牛出現應激反應后，可誘發該病。

3 臨床癥狀

發病初期病牛食欲不振，消化不良，輕微腹瀉，排稀軟便，隨后水樣腹瀉，糞中伴有少量氣泡，其眼窩下陷，被毛干澀、無光澤，體重顯著減輕，消瘦。綿羊、山羊感染癥狀與牛相似，均以持續性腹瀉和漸進性消瘦為主，部分病羊可保持食欲，病程后期可并發肺炎。

4 病理變化

主要病變發生在消化系統，病牛空腸、回腸和結腸前段腸壁增厚至正常的3～30 倍左右，其中回腸病變最為明顯。腸內有少量氣泡和大量黏稠而混濁的液體，腸黏膜皺褶、充血。腸系膜和漿膜下的淋巴多呈暗褐色索狀，顯著腫大，切面外翻、多汁。

5 診斷

5.1 糞便檢查法 采取病牛糞便中的黏液或血絲與3倍量的0.5%氫氧化鈉液混合均勻，隨后通過55 ℃水浴進行30 min 乳化，在充分過濾后，1000r/min離心5min，取上清3000r/min離心30min后，使用沉淀進行涂片，抗酸染色，鏡檢，若發現呈堆或叢狀的紅色細小桿菌，則判為陽性。

5.2 變態反應法 此方法僅適用于發病前期，通常可在病牛左側頸部中上1/3 處皮內注射0.5 mg/mL副結核菌素，并測量皮厚。72 h后注射部位出現紅、腫、熱、痛等炎性反應，并且注射前后的皮厚差大于等于4 mm，則判為陽性。

5.3 血清學診斷 可采用的血清學診斷方法有補體結合試驗、瓊脂免疫擴散試驗、ELISA、間接血凝試驗、免疫斑點試驗、對流免疫電泳及免疫熒光抗體實驗等。補體結合試驗具有良好的特異性和敏感性，可與變態反應法配合使用。瓊脂免疫擴散試驗操作便捷，具有良好的特異性，但其敏感性低，不適于診斷隱性感染病牛。ELISA具有良好的敏感性和特異性，可代替補體結合試驗進行廣泛使用。

5.4 分子生物學方法 常用的是特異性DNA探針法和PCR 法，DNA 探針法能夠準確快速地檢測出糞便中副結核分枝桿菌的DNA 片段。PCR 能夠高效快速地檢測出乳、乳制品和反芻動物中的副結核分枝桿菌，是可靠且實用的診斷方法。

6 防控措施

6.1 治療 中藥治療，可選用蒼術30g、陳皮30g、厚樸30 g、豬苓30 g、砂仁30 g、澤瀉30 g，大青葉50 g、黃連50 g、黃白頭翁50 g、老鸛草250 g 研磨成粉，用開水和陳醋進行沖調，候溫給病牛灌服，每天1次，連續灌服20 d左右。腹瀉嚴重的病牛可增加雙花50g、連翹50g、郁金50 g、知母30 g、焦梔子30 g、大黃30 g。若病牛食欲下降，可在配方中添加山楂、龍膽草等，提高食欲。脫水嚴重的病牛可在配方中添加車前子等。用開水沖調時還可在藥液中添加1%的鹽水，防止病牛因嚴重脫水而死亡。

6.2 免疫接種 預防牛副結核病的疫苗有菌體成分苗、全菌苗和活苗等。疫苗并不能夠全面防控，還應通過加強飼養管理等對本病進行預防。

6.3 定期檢疫 可采用變態反應等檢測方法對牛群進行檢疫。檢疫每隔三個月進行一次，連續三次檢疫均為陰性的判定為健康牛，健康牛每年也應進行兩次檢疫。檢疫結果為陽性的病牛及時撲殺，同群的牛實施緊急免疫和隔離，必要時也應撲殺。被污染的牛舍、地面和用具等用漂白粉、生石灰、苯酚及氫氧化鈉等進行嚴格消毒，牛糞進行發酵處理。

6.4 飼養管理 禁止從疫區引入種牛，牛引入前進行嚴格的隔離和檢疫。根據牛的體況和生長階段進行分群飼養，保持合理的飼養密度和通風良好。根據牛的不同生長階段調整飼料配方，及時補充維生素和微量元素，不喂發霉、變質的日糧。做好牛群凈化工作，犢牛出生后立即進行隔離飼養，同時禁止給犢牛喂食帶菌母乳，初乳應消毒后再喂。犢牛6月齡以內應進行副結核病檢疫，陽性犢牛立即淘汰。犢牛飼養區與病牛隔離區保持適當距離，避免病原傳播。