溫度對東北林蛙蝌蚪生長發育和性別比例的影響※

●吳 旻 付議頡 常 雷 閆彩虹 王永明 范忠義岑欣桉 衣 巖 張舒童 衛功慶※※

（1.吉林農業大學動物科學技術學院 吉林 長春 130118；2.延邊北方參茸保健品有限公司 吉林 延邊 133200）

東北林蛙（Rana dybowskii）俗稱蛤士蟆，是東北地區獨有的一種經濟動物[1]。哈蟆油（Oviductus Ranae），為雌性林蛙輸卵管的干制品，是一種傳統的動物藥和滋補佳品，以其補虛、養陰、養肺、滋腎、益肝等作用被廣泛應用[2]。林蛙從卵中孵化出來的蝌蚪并不具有性別，直至變態完全才發育出性別器官[3]，并且其性別與性染色體無明顯相關性。前期研究表明，林蛙的性別形成受溫度影響較大[4]，而只有雌蛙生產哈蟆油，故通過控制溫度提高飼養林蛙中雌性林蛙的比例，可以提高經濟效益，推動產業發展。

本試驗在相同的飼養條件下，探究15～20℃溫度區間蝌蚪的生長速率、變態率以及性別比例等指標的規律，為林蛙的工廠化育苗提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

東北林蛙蛙卵、水族箱、蝌蚪飼料、電子分析天平、溫度計、冰袋、小動物解剖用具等。

1.2 試驗設計及指標測定

取出孵化7 d、大小相近的蝌蚪360只，隨機分為4組（低溫組Ⅰ，中溫組Ⅱ，高溫組Ⅲ，常溫組Ⅳ），每組3個重復，每個重復30只蝌蚪。飼養條件：將Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ 3組的養殖水溫使用冰袋環繞法分別控制在（15.0±0.5）℃、（16.5±0.5）℃和（17.5±0.5）℃，Ⅳ組不控溫，試驗期間水溫為（19.5±0.9）℃。記錄各組蝌蚪體重、半數后肢長出日齡、半數前肢長出日齡、半數完全變態日齡、變態率、幼蛙的雌性比例等指標。每日07:00、13:00、19:00更換冰袋，每天換冰袋前進行溫度測定。每周使用電子分析天平對蝌蚪稱重一次，每天觀察蝌蚪變態發育情況，統計前腿、后腿以及完全變態時間，使用半數變態為基準統計。變態后，將水族箱一側用磚塊墊起，以免蝌蚪尾巴退化后溺水死亡。性別鑒定方法根據鄧秋香[5]林蛙早期的性別鑒定方法進行優化。

1.3 數據處理與統計方法

所有數據經過 Excel 2010進行初步整理后，使用 SPSS Statistics 18.0 進行顯著性檢驗，數據以“平均數±標準誤”表示，其中P＜0.05表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 溫度對東北林蛙蝌蚪變態發育時間的影響

溫度對東北林蛙蝌蚪發育的影響，見表1。由表1可以看出，在變態發育的3個主要階段，隨 著溫度的升高，林蛙的變態發育速率會變快。

表1 蝌蚪變態發育進程（日齡） 單位：d

2.2 溫度對東北林蛙蝌蚪體重的影響

溫度對東北林蛙蝌蚪體重影響，見圖1。由圖1可知，隨著溫度升高，蝌蚪的生長速率加快，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組蝌蚪體重均在4周齡時到達頂峰，而Ⅳ組（常溫對照組）蝌蚪體重到達頂峰時間延后至約5周齡。且在變態發育的過程中，隨著蝌蚪成為幼蛙，溺死率增加，第五次測量之后高溫組已經出現多只變態完全而溺死的幼蛙，低溫組卻剛剛開始變態，故無法從數據中體現。

圖1 不同溫度下蝌蚪體重變化

2.3 溫度對東北林蛙蝌蚪期死亡率的影響

溫度對東北林蛙蝌蚪期死亡率的影響，見圖2。由圖2可知，Ⅰ組東北林蛙蝌蚪期死亡率比Ⅳ組低3.30%，Ⅱ組東北林蛙蝌蚪期死亡率與Ⅳ組相近，Ⅲ組東北林蛙蝌蚪期死亡率比Ⅳ組低6.63%，在本試驗條件下，高溫組，即溫度在（17.5±0.5）℃時，東北林蛙蝌蚪期死亡率最低。

圖2 不同溫度下蝌蚪期死亡率

2.4 溫度對東北林蛙蝌蚪變態性別的影響

溫度對東北林蛙蝌蚪變態性別的影響，見圖3。由圖3可知，Ⅰ組東北林蛙雌蛙率比Ⅳ組低2.3%，Ⅱ組雌蛙率比Ⅳ組低6.3%，Ⅲ組雌蛙率比Ⅳ組高3.2%。由于東北林蛙雌蛙經濟效益遠大于雄蛙，因此在本試驗條件下，高溫組，即溫度在（17.5±0.5）℃時，東北林蛙蝌蚪變態發育雌蛙率最高。

圖3 不同溫度下雌蛙占比

3 討論

在此前林蛙屬動物的研究中，多數為中國林蛙的研究，而東北林蛙的研究相對較少。本試驗對東北林蛙的性別與環境溫度的關系進行了研究。此前，沈陽農業大學的胡夢如[6]通過試驗得出中國林蛙在自然條件下的雌性率約為55.3%；Ju等[7]研究發現，磷脂酰肌醇3激酶參與孕激素調節引起的東北林蛙卵母細胞成熟；Kwon等[8]就東北林蛙卵泡卵母細胞體外自發成熟相關條件展開了研究。相比于東北林蛙，中國林蛙在自然條件下的雌性率較高，這可能是由于地理上的差異導致的，細胞層面此前的研究對本試驗也有一定的指導意義。

哈爾濱師范大學的徐驍驍等[9]研究發現，隨著溫度的升高，東北林蛙的發育速率加快，在胚胎發育過程中改變溫度可能會導致組織器官的生長發生改變，在解剖過程中，本試驗除了性別差異外，生長速率上與該研究一致，在本試驗中，未進行器官大小上差異的比對。

通常情況下，較高溫度對林蛙蝌蚪生長發育有利，較低溫度有利于低等動物雌性化發育，顯然，二者是矛盾的。另外，林蛙及蝌蚪是變溫動物，對不斷變化的生活環境溫度適應性較強。從本試驗的結果看，林蛙蝌蚪生活環境的溫度不宜低于 17.5℃。

4 結論

在本試驗條件下，高溫組，即溫度為（17.5±0.5）℃時，東北林蛙蝌蚪的死亡率最低，雌蛙比例最高，適合在養殖中參考應用。