81份金蕎麥?zhǔn)占当韮翰杷睾康姆治鲈u(píng)價(jià)※

●張 蓉 陳光吉，2 尚以順※※ 李世歌 龍忠富 房春林 楊海涵

（1.貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院草業(yè)研究所 貴州 貴陽(yáng) 550006；2.貴州陽(yáng)光草業(yè)科技有限責(zé)任公司 貴州 獨(dú)山 558200；3.成都乾坤動(dòng)物藥業(yè)股份有限公司 四川 成都 611100）

表兒茶素（Epicatechin，EC）是一種天然植物黃烷醇化合物，易溶于水、甲醇，其多羥基的分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)使其具有抗炎、抗氧化、清除自由基等生物活性，普遍存在于葡萄、藍(lán)莓、綠茶、可可等植物中，同時(shí)，當(dāng)不同的表兒茶素縮合成原花青素，具有較強(qiáng)的抗氧化性，且未發(fā)現(xiàn)副作用，是一種重要的天然活性植物源成分。在醫(yī)藥學(xué)研究中，從植物中提取的EC主要集中于腸道炎癥、抗心血管、糖尿病以及肌肉衰老、萎縮等相關(guān)疾病防治的研究和應(yīng)用。研究表明，EC可調(diào)控硫酸葡聚糖誘導(dǎo)的極性潰瘍性結(jié)腸炎，還可通過(guò)增強(qiáng)線粒體生物合成和減少肌肉生長(zhǎng)抑制素提高成人貝克肌營(yíng)養(yǎng)不良骨骼肌運(yùn)動(dòng)性能，對(duì)氧化應(yīng)激損傷和缺血性損傷有一定保護(hù)作用。在畜牧獸醫(yī)領(lǐng)域，有報(bào)道指出EC可用于防治奶牛乳腺炎以及改善冷凍-解凍后豬精子質(zhì)量[1]。

本研究以81份貴州不同地區(qū)金蕎麥?zhǔn)占狄约皣?guó)審草品種“黔中金蕎麥（登記號(hào)581）”的根、莖、葉為研究材料，分析評(píng)價(jià)其EC含量，為進(jìn)一步挖掘金蕎麥的飼用價(jià)值提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

81份金蕎麥?zhǔn)占禈悠凡杉谫F州農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所麥坪基地，采樣時(shí)間為2021年8月。各收集系來(lái)源于6個(gè)地級(jí)市（州）、16個(gè)縣域（表1），其中貴陽(yáng)花溪采集的資源為國(guó)審牧草品種“黔中金蕎麥”。

表1 供試金蕎麥產(chǎn)地

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品采集與制備連根整株采集健康生長(zhǎng)2年，植株高度（1.2 m）、葉量、莖干粗細(xì)基本均一的金蕎麥，用自來(lái)水將根清洗干凈，無(wú)損收集莖和葉，按照不同縣域分別編號(hào)81份根、莖、葉。直接放入鼓風(fēng)75℃干燥箱中殺青3 h，再在65℃條件下烘干48 h，然后粉碎過(guò)20目篩后，裝入密封袋保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 表兒茶素含量測(cè)定EC的測(cè)定方法在參照《中國(guó)獸藥典》描述方法的基礎(chǔ)上根據(jù)實(shí)際情況略作調(diào)整。

1.2.2.1 對(duì)照品制備精密稱定適量EC標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)食品藥品檢定研究院 110878—201703 ID：F92N-G4QE），加流動(dòng)相制成每 1 mL 含 25 μg EC的溶液。

1.2.2.2 金蕎麥提取液制備精密稱定2 g金蕎麥根、莖、葉粗粉，置于具塞錐形瓶中，精確加入稀乙醇50 mL，密塞后稱定，放置1 h，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25 mL，減壓濃縮（50～70℃）至近干，殘?jiān)右译?水（10∶90）混合溶液分次洗滌，洗液轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加乙腈-水（10∶90）混合溶液至刻度，搖勻，3000 r / min 離心5min，精密量取上清液5 mL，加于聚酰胺柱（30～60目，內(nèi)徑為1 cm，柱長(zhǎng)為15 cm，濕法裝柱）上，以水50 mL洗脫，棄去水液，再用乙醇100 mL洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮（50～70℃）至近干，殘?jiān)靡译?水（10∶90）混合溶液溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加乙腈-水（10∶90）混合溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

1.2.2.3 上機(jī)測(cè)定分別吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

1.2.2.4 色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-0.004%磷酸溶液（10∶90）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm。理論板數(shù)按表兒茶素峰計(jì)算應(yīng)不低于6000，檢測(cè)精度：EC含量不得少于 0.30 mg/g。

1.3 數(shù)據(jù)分析

用 Excel整 理 數(shù) 據(jù)， 采 用 SPSS 18.0軟 件的“分析-描述性統(tǒng)計(jì)”進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)，再用“一般線性模型（GLM）”程序，分別以地域（市州）和金蕎麥部位為主效應(yīng)進(jìn)行方差分析，用Duncan法進(jìn)行多重比較，P＜0.05表示差異顯著，結(jié)果用平均值表示，各處理變異程度用標(biāo)準(zhǔn)誤差表示（SEM）。

2 結(jié)果與分析

2.1 金蕎麥根、莖、葉中EC含量的正態(tài)分布檢驗(yàn)

由圖1和圖2可知，81份金蕎麥莖、葉的EC含量呈近似正態(tài)分布，莖中頻率分布較高的含量值為 0.19，0.22 mg/g，均為 12份，有 9 份材料高于0.30 mg/g ；各收集系葉中EC含量均低于 0.30 mg/g ，頻率較高的 EC 含量分別為 0.08，0.09，0.12，0.13 mg / g；根中頻率分布較高的含量為 0.6 mg / g，達(dá) 15 份材料，有 43 份材料的根中 EC 含量大于 0.6 mg / g。

圖1 81份金蕎麥?zhǔn)占登o中EC含量的頻率分布

圖2 81份金蕎麥?zhǔn)占等~中EC含量的頻率分布

圖3 81份金蕎麥?zhǔn)占蹈蠩C含量的頻率分布

2.2 貴州各地區(qū)金蕎麥表兒茶素含量比較

由表2可知，貴州省6個(gè)地級(jí)市（州）中金蕎麥根、莖和葉的EC含量差異顯著（P＜0.05）。其中，根的EC含量以銅仁市最高，為0.98 mg/g（P＜0.05），莖和葉中EC含量均以銅仁市和貴陽(yáng)市較高（P＜0.05）。

表2 貴州各地區(qū)金蕎麥表兒茶素含量比較

3 結(jié)論

貴州省6個(gè)地州市金蕎麥?zhǔn)占档谋韮翰杷睾看嬖谳^大差異，最高為銅仁市，其次為貴陽(yáng)市；金蕎麥不同部位表兒茶素含量從大到小依次為根（0.69 mg/g）、莖（0.20 mg/g）、葉（0.12 mg/g）；金蕎麥地面以上植株部分不適于藥用，但在飼用上有較好前景。

4 討論

金蕎麥作為藥飼兼用植物資源，需要利用現(xiàn)代檢測(cè)技術(shù)手段探明活性成分以指導(dǎo)應(yīng)用，同時(shí)也是資源育種研究的重要依據(jù)。研究認(rèn)為，金蕎麥塊根中含有豐富的黃酮、EC、原兒茶酸等活性組分，在傳統(tǒng)醫(yī)藥中應(yīng)用廣泛，并被開發(fā)成口服液、藥片等藥劑[2]，可治療多種疾病，但莖葉的研究和應(yīng)用尚不成熟。本研究重點(diǎn)關(guān)注金蕎麥的EC含量，挖掘其飼用價(jià)值。結(jié)果表明，在相同栽培條件下不同來(lái)源的金蕎麥EC含量差異較大，這可能與不同收集系基因型差異有關(guān)，而根、莖、葉的EC含量均呈近似正態(tài)分布，表明金蕎麥植株中的EC含量符合諸多自然變量的分布規(guī)律，數(shù)據(jù)具有較高可信度。

此外，本研究涉及的國(guó)審牧草品種“黔中金蕎麥”的整株EC含量高于除銅仁市外的其他地區(qū)品種，進(jìn)一步說(shuō)明本品種具有較高應(yīng)用價(jià)值，同時(shí)本研究對(duì)“黔中金蕎麥”的基礎(chǔ)評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)是一種藥物成分的補(bǔ)充。本研究中銅仁地區(qū)的金蕎麥?zhǔn)占档母⑶o、葉中EC含量最高，提示可進(jìn)一步開展農(nóng)藝性狀、生物產(chǎn)量、遺傳穩(wěn)定性等特征方面的研究，拓展育種方向，挖掘地方資源。

金蕎麥的活性成分研究中，黃酮類物質(zhì)報(bào)道較多。有研究表明，金蕎麥的花、莖、葉、籽粒、根等部位均含有較豐富的黃酮類物質(zhì)，且莖葉的總黃酮含量高于塊根，而在貴州大部分地區(qū)金蕎麥的莖葉生長(zhǎng)迅速、產(chǎn)量較高（干草產(chǎn)量達(dá)15 762 kg/hm2），作為飼料資源具有較好開發(fā)前景。本研究結(jié)果顯示，81份金蕎麥?zhǔn)占祲K根的EC 含量為 0.60～0.98 mg/g，莖為 0.14～0.29 mg/g，葉為 0.09～0.19 mg/g，其中塊根的 EC 含量與阮洪生等[3]的研究結(jié)果基本吻合（均值 0.8 mg/g），高于《中國(guó)獸藥典》規(guī)定的0.3 mg/g的最低限量，適用于藥物開發(fā)，而莖、葉的EC則低于限量，提示金蕎麥地面以上植株部分不適于藥用（不符合藥材制作基本標(biāo)準(zhǔn)），這為莖、葉飼用的開發(fā)方向提供依據(jù)。