瓊脂石蠟雙包埋法制備斑馬魚幼魚切片

摘要 為優化探索斑馬魚幼魚石蠟組織切片制作方法，以發育4 d的斑馬魚幼魚為試驗材料，經4%多聚甲醛固定24 h后進行瓊脂預包埋、脫水、透明、浸蠟再包埋切片進行蘇木精-伊紅（HE）染色，比較瓊脂-石蠟雙包埋法與普通石蠟包埋法之間的優勢。結果表明，瓊脂石蠟雙包埋法能保持斑馬魚幼魚的形態結構，組織無變形、碎裂，鏡下結果明顯比普通石蠟包埋法清楚；HE染色效果好。瓊脂石蠟雙包埋法可以克服普通石蠟包埋法的不足，設備簡單，操作簡便，易于普及推廣。

關鍵詞 斑馬魚；瓊脂；石蠟；雙包埋法；石蠟切片

中圖分類號 R-33 文獻標識碼 A

文章編號 1007-7731（2023）21-0080-05

Agar-paraffin double embedding method in the preparation of

juvenile zebrafish slices

ZHANG Ying1，2" " XIA Ming1，2，3" " HUANG Chunhua1，2，3" " LOU Didong1，2，3*

（1Department of Forensic Medicine， Guizhou University of Chinese Medicine， Guiyang 550000， China;

2Guizhou Provincial Key Laboratory of Forensic Medicine Toxicology， Guiyang 550000， China;

3Judicial Appraisal Center， Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550000， China）

Abstract To explore and optimize the preparation method of paraffin tissue section of juvenile zebrafish. 4 d zebrafish juvenile were fixed with 4% paraformaldehyde for 24 h and then pre-embedded with agar，dehydrated， transparent， impregnated with wax and then embedded with the slices for hematoxylin-eosin （HE） staining. The advantages of the agar paraffin double embedding method and the conventional paraffin embedding method were compared. The results showed that the agar-paraffin double embedding method can maintain the morphology and structure of zebrafish juvenile without deformation or fragmentation， and the results under the microscope are obviously clearer than those of ordinary paraffin embedding method. HE staining is good. The agar-paraffin double embedding method can overcome the shortcomings of the conventional paraffin embedding method， and the equipment and operation is simple， easy to be popularized.

Keywords zebrafish; agar; paraffin; double embedding method; paraffin section

斑馬魚是一類典型的脊椎模式生物，因其性成熟期短、繁殖能力強、胚胎透明便于活體觀察以及與人類基因具有高度同源性等優勢[1-3]，近年來受到廣大研究者的重視。斑馬魚幼魚較成魚在醫學和生物學等相關學科中的應用更廣泛[4-5]，在對斑馬魚幼魚進行研究的過程中，高質量的組織病理學切片制作是必不可少的一項實驗技術。目前，有關斑馬魚幼魚病理切片制作的文獻較少，在斑馬魚研究經典技術用書The Zebrafish Book中[6]，主要描述了胚胎和幼魚的組織學實驗方法，對病理切片實驗方法并未進行詳細闡述。目前研究者在進行斑馬魚幼魚石蠟切片時多采用普通石蠟切片制備方法[7]。而斑馬魚幼魚體積非常小，難以定位包埋，常規石蠟切片要經歷脫水、透明和浸蠟過程，經高濃度乙醇處理后組織易皺縮變形，二甲苯具腐蝕性，幼魚放入二甲苯10 min左右便會被腐蝕溶解，造成組織碎裂，由于存在以上問題，采用普通石蠟包埋法制作斑馬魚幼魚切片過程較困難，切片質量不高。……