肺癌組織中USP3及FOXF1表達與臨床特征的關系及其與肺癌組織EMT標識物的相關性

馮佳 袁傲 黃芳 章建國

肺癌是常見惡性腫瘤，一般起源于支氣管黏膜上皮細胞，目前臨床通過放化療、手術、靶向治療等延緩肺癌發展[1]。由于肺癌早期臨床表現不明顯，部分患者確診時已發展為中晚期，癌細胞已發生轉移，治療難度較大，預后較差，因此，研究肺癌的轉移機制對于肺癌的治療具有重要意義[2]。細胞上皮間質轉化（EMT）是指上皮細胞轉化為具有間質表型細胞的過程，參與癌細胞的轉移，有研究顯示EMT 在癌細胞遷移、侵襲的時候顯著增強，因此，了解肺癌細胞EMT 的機制是目前肺癌領域研究的重點[3-4]。EMT 標志物主要有上皮型鈣黏附素（E-cardherin）及波形蛋白（Vimentin），目前科研人員致力于尋找更多與肺癌EMT 相關的因子，以探究肺癌細胞EMT。有研究發現，去泛素化酶3（ubiquitin-specific protease 3，USP3）在非小細胞癌中高度表達，能夠參與非小細胞癌細胞增殖，促進非小細胞癌的發展[5]。叉頭蛋白1（forkhead box F1，FOXF1）屬于叉頭框基因，在人體內通過轉錄作用，對多種基因的表達進行調控，在癌細胞的發生發展中起到重要作用[6]。本研究旨在探究USP3、FOXF1 的表達與肺癌細胞EMT 的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2016 年1 月-2019 年12 月南通大學附屬醫院收治的130 例肺癌患者的臨床資料。納入標準：（1）符合文獻[7]《中華醫學會肺癌臨床診療指南（2019 版）》中肺癌的診斷標準，均進行影像學診斷，并確診為肺癌；（2）均有病理診斷結果；（3）均首次確診為肺癌。排除標準：（1）均為原發性肺癌；（2）術前進行過放療或輔助化療；（3）精神類疾病；（4）凝血功能障礙；（5）免疫系統疾病；（6）既往有肺部疾病手術史。男69 例，女61 例，年齡40～80 歲，平均（66.57±7.87）歲，臨床分期：Ⅰ期33 例，Ⅱ期33 例，Ⅲ期64 例，病理類型：鱗癌64 例，腺癌46 例，小細胞癌20 例。本研究已經醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 方法（1）FOXF1、USP3 表達情況：采用免疫組化法檢測FOXF1、USP3 的表達，切片中出現棕褐色或棕黃色顆粒視為陽性細胞，無色、黃色、棕黃色及棕褐色分別為0～3 分：陽性細胞占0～25%、26%～50%、51%～75%、76%～100%分別為1～4 分，總分≥3 分視為陽性表達，＜3 分視為陰性[8]。（2）E-cadherin 陽性：切片中出現棕黃色顆粒為陽性細胞（細胞膜或細胞漿），陽性細胞占比≥10%，視為表達陽性。Vimtemin 陽性：切片中出現棕黃色顆粒為陽性細胞（細胞膜或細胞漿），500 個細胞中，陽性細胞占比≥10%，視為表達陽性[9-10]。

1.3 統計學處理 應用SPSS 22.0 分析，計量資料用（x-±s）表示，比較采用t檢驗；計數資料以率（%）表示，比較采用χ2檢驗；等級資料比較采用秩和檢驗；采用Spearman 分析USP3、FOXF1 表達與EMT 標識物的相關性。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 USP3、FOXF1 在肺癌及癌旁組織中的表達情況 肺癌組織的USP3 及FOXF1 陽性表達率均高于癌旁組織（P＜0.05），見表1。

表1 USP3、FOXF1在肺癌及癌旁組織中的表達情況[例（%）]

2.2 肺癌組織中USP3 及FOXF1 表達與臨床特征的關系 不同USP3 及FOXF1 表達情況患者的性別、年齡及病理類型比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。不同USP3 及FOXF1 表達情況患者的臨床分期比較，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表2、3。

表2 USP3表達與臨床特征的關系[例（%）]

表2 （續）

表3 FOXF1表達與臨床特征的關系[例（%）]

表3 （續）

2.3 肺癌組織EMT 標識物表達情況 130 例肺癌組織樣本中Vimentin 陽性81 例，陽性表達率為62.31%，E-cadherin 陰性90 例，陰性表達率為69.23%。

2.4 USP3、FOXF1 表達與EMT 標識物的相關性分析經Spearman 相關分析，USP3、FOXF1 與Vimentin 均呈正相關，USP3、FOXF1 與E-cadherin均呈負相關（P＜0.05），見表4。

表4 USP3、FOXF1表達與EMT標識物的相關性分析

3 討論

近年來，肺癌的發病率呈上升趨勢，導致其死亡率不斷升高，有研究顯示，約80%的死亡病例均發生了不同程度的癌細胞轉移，因此了解肺癌轉移機制對于肺癌的早期診斷、治療及其預后均有積極作用[11]。目前關于肺癌細胞轉移的機制尚無確切定論，由于EMT 參與癌細胞轉移，其逐漸成為肺癌細胞轉移機制研究的熱點[12]。近年來，研究發現FOXF1 與結直腸癌及乳腺癌的疾病發展密切相關，有研究顯示，FOXF1 通過SNAI1 的轉錄激活誘導EMT 在結直腸癌細胞轉移中起關鍵作用[13]。USP3則在胃癌的發展及預后，膠質母細胞瘤的EMT 中發揮重要作用，因此推測FOXF1、USP3 在肺癌的發展及EMT 中具有一定作用[14-15]。目前關于USP3、FOXF1 的表達與肺癌細胞EMT 關系的研究較少，本文對此進行探究，以期為肺癌的治療提供新的研究方向。

130 例肺癌組織標本中USP3 及FOXF1 陽性表達率分別為92.31%、86.15%，癌旁組織中分別為31.54%、29.23%，其中肺癌組織的USP3 及FOXF1陽性表達率均高于癌旁組織，提示USP3 及FOXF1在肺癌組織中表達明顯。不同USP3 及FOXF1 表達情況患者的臨床分期比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）。表明USP3、FOXF1 表達與肺癌的臨床分期具有相關性。分析原因為，USP3 具有促進細胞凋亡，調節細胞增殖、發育等作用，USP3在胃癌、肝癌等多種癌癥中均呈異常高度表達[16]。FOXF1 是叉頭基因的一種，通過轉錄因子對多種靶向基因進行調控，并參與腫瘤的形成。E-cardherin是EMT 相關蛋白的一種，有研究顯示，E-cardherin是FOXF1 的靶點之一，FOXF1 沉默后，E-cardherin表達上調，同時Vimtemin 蛋白表達下調，從而抑制EMT 形成，抑制癌細胞的侵襲能力[17-18]。本研究結果顯示USP3 及FOXF1 在肺癌組織中表達明顯，且與臨床分期有關，而EMT 則在癌細胞的轉移中發揮重要作用，因此推測USP3、FOXF1 與肺癌細胞EMT 存在某種聯系。為進一步探究USP3、FOXF1與肺癌細胞EMT 的關系，本研究對130 例肺癌組織樣本中EMT 指標進行檢測，其中Vimentin 陽性表達率為62.31%（81/130），E-cadherin 陰性表達率為69.23%（90/130），經Spearman 相關分析，USP3、FOXF1 與Vimentin 均呈正相關，USP3、FOXF1 與E-cadherin 均呈負相關（P＜0.05）。由于Vimtemin表達陽性且E-cadherin 表達陰性視為EMT，因此USP3、FOXF1 的表達與EMT 密切相關。部分研究也得到類似的結論，如在口腔癌中，FOXF1 與E-cadherin 呈負相關，與本研究結果相符[19-20]。

綜上所述，USP3、FOXF1 在肺癌組織中表達明顯，與肺癌患者臨床分期具有一定的聯系，同時USP3、FOXF1 與Vimtemin 和E-cadherin 具有明 顯的相關性，與肺癌的發展密切相關。本研究結果顯示，USP3、FOXF1 有可能是肺癌藥物治療的新靶點，為肺癌的藥物研究提供新的研究思路。