p73基因rs6695978位點基因型與卵巢癌病理特征和預后的相關性分析

袁 淼，蘇 琦，劉竹君

西北婦女兒童醫院：1.婦三科；2.藥劑科，陜西西安 710061

卵巢癌臨床病理分型多樣，且不同臨床病理分型患者在治療、遺傳變異、分子機制方面均存在明顯差異[1]，使卵巢癌的治療難度加大，也是其病死率居婦科惡性腫瘤首位的重要原因。卵巢癌位于盆腔深部，解剖結構復雜，與內分泌和胚胎發育功能密切相關，且惡性程度較高，預后較差[2]。另外，卵巢癌早期癥狀缺乏特異性，被確診時多數已處于中晚期，并且復發率超過50%[3]。長期以來，卵巢癌的診斷和治療備受臨床關注。目前，臨床對卵巢癌發病機制的認識已深入基因分子領域，靶向治療也逐漸在臨床推廣。易感基因在卵巢癌的發生和發展過程中發揮重要作用。p73基因定位于1p36.33，與p53基因具有高度同源性。安錦丹等[4]研究結果顯示，p73基因在卵巢癌組織中呈明顯高表達，提示p73基因可能與卵巢癌的病理進展相關。但目前有關p73基因多態性與卵巢癌病理特征相關性的研究較少。有研究顯示，p73基因rs6695978位點存在富集化現象，可能成為卵巢癌的誘發因素，參與疾病的進展[5]。為進一步證實上述觀點，為今后臨床治療新藥的開發提供依據，本研究觀察了76例卵巢癌患者p73基因型分布情況，并分析其臨床價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年10月至2021年5月本院收治的76例卵巢癌患者作為研究對象，年齡(51.68±14.47)歲；體質量指數(20.72±2.42)kg/m2；腫瘤最大徑(4.18±0.94)cm；病理分期：Ⅰ期16例，Ⅱ期15例，Ⅲ期19例，Ⅳ期26例；分化程度：高分化21例，中分化31例，低分化24例。本研究經本院倫理委員會審批通過，所有研究對象均知情同意并簽署知情同意書。

1.2納入和排除標準

1.2.1納入標準 (1)均經組織病理活檢證實為卵巢癌[6]；(2)均為首次確診，既往未行任何抗腫瘤治療；(3)患者臨床病例資料完整。

1.2.2排除標準 (1)復發性腫瘤患者或合并有其他原發性惡性腫瘤的患者；(2)合并有嚴重心、肺基礎疾病或肝、腎功能不全的患者。

1.3研究方法 所有研究對象均在清晨空腹抽取肘靜脈血3.0 mL，采用氯化鈉鹽析法提取DNA，以聚合酶鏈反應(PCR)-限制性片段長度多態性對p73基因rs6695978位點進行基因分型。引物設計上游：5′-TTCCCACGGGCAAGCAGATG-3′，下游：5′-CAAAGGCACACTGGCTGCTG-3′，擴增片段長度116 bp。PCR反應體系：Taq PCR Master Mix 12.5 μL，模板DNA 7.5 μL，上、下游引物各1.0 μL，加水至25.0 μL。反應條件：95 ℃預變性5 min、95 ℃變性30 s、退火60 ℃ 30 s、延遲72 ℃ 30 s。

1.4觀察指標 患者出院后進行隨訪，記錄76例患者總生存率，以失訪或死亡為隨訪終點。比較不同基因型患者臨床特征指標水平和總生存率，分析影響患者p73基因rs6695978位點基因型分布的相關因素。

2 結 果

2.1不同基因型患者臨床特征比較 76例卵巢癌患者中p73基因rs6695978位點GG基因型32例，GA基因型36例，AA基因型8例。經Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗，76例入組卵巢癌患者p73基因rs6695978位點基因型分布符合遺傳平衡定律(χ2=1.278，P=0.612)，提示入組患者具有群體代表性。不同基因型患者腫瘤最大徑、腫瘤分期、分化程度比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同基因型患者臨床特征指標比較或n)

組別n病理組織分型漿液型黏液型其他家族史有無初診卡氏評分≥60分<60分GG322561824239GA362952531279AA85301762F/χ22.8671.6000.093P0.5800.4490.954

2.2影響腫瘤基因型分布的相關因素分析 以卵巢癌患者p73基因rs6695978位點基因型作為因變量，以腫瘤最大徑、腫瘤分期及分化程度作為自變量進行多元逐步回歸分析，結果顯示，卵巢癌患者p73基因rs6695978位點基因型分布與腫瘤分期和分化程度均有關(P<0.05)。見表2。

表2 卵巢癌患者p73基因rs6695978位點基因型分布的影響因素分析

2.3不同p73基因rs6695978位點基因型卵巢癌患者總生存率比較 根據p73基因rs6695978位點基因型是否攜帶A等位基因將患者分為GG組(GG基因型，n=32)和GA+AA組(GA基因型+AA基因型，n=44)，GG組中位隨訪時間27.56個月，死亡10例，存活22例，生存率為68.75%，GA+AA組中位隨訪時間28.01個月，死亡24例，存活20例，生存率為45.45%，兩組患者生存率比較，差異有統計學意義(Log-Rankχ2=4.007，P=0.045)。見圖1。

圖1 不同p73基因rs6695978位點基因型卵巢癌患者總生存率比較

3 討 論

卵巢癌早期檢出率較低，化療是卵巢癌重要的治療方法，近年來隨著研究的深入，分子靶向治療備受關注。探討卵巢癌的分子基因機制有助于臨床新藥的開發，提高治療效果。p73基因由13個內含子和14個外顯子構成，與p53具有高度同源性。有研究顯示，在C末端的SAM區域，p73基因可發揮調節細胞生長的作用[7]。ZHANG等[8]研究顯示，p73基因可通過激活Fas/Apol和Bax途徑，阻斷腫瘤細胞生長，誘導腫瘤細胞凋亡，進而達到抗腫瘤的目的；陳燕等[9]研究認為，p73基因陽性表達可增強卵巢上皮細胞癌細胞的侵襲增殖能力。p73基因單核苷酸多態性具有廣泛而穩定的遺傳特征，有研究顯示，p73基因rs6695978位點存在富集現象，這可能成為癌變的誘發因素[10]。但目前有關卵巢癌p73基因rs6695978位點基因型分布與腫瘤病理特征和預后關系的報道較為少見。

microRNA基因芯片將生物信息學、生物遺傳學及分子生物學融為一體，能實現對基因序列和功能的高通量研究[11]，這將為腫瘤分子基因機制的研究提供新思路。單核苷酸多態性可改變microRNAs，進而影響腫瘤的發生。人類基因組關聯分析發現，與卵巢癌發生轉移相關的基因包括MTA1、Ras、CD44、E-Cadherin、KAI1、MHC、KISS-1、BRMS1、HER-2、p16、p53、p73、MSH1及Bax等[12-13]，其中p73基因rs6695978位點在卵巢癌病理進展中均有表達，影響腫瘤生長[14]。本研究Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗顯示，入組患者具有群體代表性。多元逐步回歸分析結果顯示，p73基因rs6695978位點基因型分布與腫瘤分期和分化程度均密切相關，提示p73基因rs6695978位點T→A突變可能增加腫瘤的惡性程度，促進腫瘤生長。因而，本研究進一步比較不同基因型患者的預后，結果顯示，攜帶A等位基因的卵巢癌患者預后更差，說明p73基因rs6695978位點基因型分布與卵巢癌惡性程度相關，進而影響患者預后。

卵巢癌具有遺傳異質性的特點，且卵巢癌的發生和發展受多基因、多因素交互作用的影響[15]。本研究僅分析了p73基因rs6695978一個多態性位點在卵巢癌中的作用，具有一定的局限性，今后應采用表觀遺傳學、生物信息學方法進一步分析不同基因單核苷酸多態性位點基因型分布的特點及其相互作用，以探討其在卵巢癌發病中的作用機制。

綜上所述，p73基因rs6695978位點基因型分布與卵巢癌病理分期和分化程度均相關，并且可影響卵巢癌患者的預后，為今后卵巢癌發病機制的研究提供了新方向。