蓮子心配方顆粒工藝及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

★ 丘花花 李海兵 楊金火（.鷹潭一八四醫(yī)院 江西 鷹潭 335000；.江西康恩貝天施康藥業(yè)有限公司 江西 鷹潭 335000）

蓮子心來源于睡蓮科植物蓮Nelumbo nucifera Gaertn.的成熟種子中的干燥幼葉及胚根，功效清心安神、交通心腎、澀精止血。用于熱入心包，神昏譫語，失眠遺精，心腎不交，血熱吐血［1］。主要含有生物堿類［2-3］、黃酮、甾醇、揮發(fā)油等成分［4］。其原植物蓮為多年生水生草本，廣布于我國南北各地［5］，研究采用藥材來源于蓮子心主產(chǎn)區(qū)江西廣昌，以保證產(chǎn)品療效。

中藥配方顆粒是由中藥飲片經(jīng)水提、濃縮、干燥、制粒而成，在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，經(jīng)臨床處方調(diào)配、使用。中藥配方顆粒在保留傳統(tǒng)湯劑辨證論治、隨證加減的基礎(chǔ)上，同時具有制備、攜帶、服用、儲存等多方面的優(yōu)勢［6］。現(xiàn)代臨床及藥理研究顯示，中藥配方顆粒在成分保留、藥理藥效、臨床療效等方面優(yōu)于傳統(tǒng)湯劑或基本相當(dāng)［7-9］。本文對蓮子心配方顆粒制備工藝及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究，為企業(yè)進(jìn)入配方顆粒市場提供技術(shù)參考。

1 儀器和試藥

Agilent 1200 高效液相色譜儀（美國Agilent 科技）、Dikma-C18（250 mm×4.6 mm）色譜柱（北京迪馬科技有限公司）、AB265-S 分析天平（METTLER TOLEDO）、DZF-6050 型減壓干燥箱(太倉精宏)、KQ3200DE 型數(shù)控超聲儀（昆山市超聲儀器）、蓮心堿高氯酸鹽對照品（批號：111696-201502，中檢院）、蓮子心對照藥材（批號：121423-200702，中檢院）、蓮子心飲片（批號：YZ-150901，安徽紀(jì)淞堂中藥飲片有限公司，經(jīng)江西省藥檢院袁桂平老師鑒定）、乙腈（TEDIA Company）。

2 方法與結(jié)果

2.1 蓮子心配方顆粒制備工藝考察

2.1.1 提取工藝考察 采用水煎煮法提取蓮子心飲片，設(shè)定考察指標(biāo)：蓮心堿轉(zhuǎn)移率。考察加水量（A）、煎煮時間（B）、煎煮次數(shù)（C）3 個因素。見表1。取蓮子心飲片18 份，每份約50 g，按L9（34）正交表的方案試驗，計算蓮心堿轉(zhuǎn)移和方差分析。見表2、表3。

表1 正交試驗因素水平表

表2 蓮子心提取正交試驗結(jié)果（n=2）

表3 蓮子心蓮心堿轉(zhuǎn)移率方差分析

因素B、C 對蓮心堿轉(zhuǎn)移率有顯著性影響，結(jié)合實際大生產(chǎn)，確定提取工藝為A1B3C2，即水煎煮2 次，每次1.5 h，加水量為8 倍量飲片。

2.1.2 提取工藝驗證 取蓮子心飲片3 份，每份約50 g，按照選定的工藝進(jìn)行驗證，測得3 份樣品蓮心堿轉(zhuǎn)移率分別為31.0%、31.4%、32.6%，均值31.67%，RSD為2.63%，說明提取工藝重現(xiàn)性較好。

2.1.3 濃縮、干燥工藝考察 試驗對濃縮溫度進(jìn)行了考察，結(jié)果顯示，60 ℃和80 ℃濃縮對蓮心堿含量沒有影響，折算為藥材里的含量分別為0.91 mg/g和0.90 mg/g，由于80 ℃濃縮效率更高，故選擇80 ℃，真空度-0.06 MPa 至-0.08 MPa 條件下濃縮。干燥選擇80 ℃，-0.1 MPa 條件下帶式干燥。

2.1.4 制粒工藝考察 蓮子心配方顆粒成型工藝采用一步干法制粒，以干法制粒一次性成型率、顆粒流動性（豪斯納比）、吸濕性（65%相對濕度和93%相對濕度）、溶化性為考察指標(biāo)，對影響蓮子心配方顆粒干法制粒的輔料、干膏粉比例、干法制粒參數(shù)進(jìn)行考察。

2.1.4.1 輔料的選擇 比較可溶性淀粉、糊精對蓮子心干法制粒的影響，取蓮子心干膏粉、糊精、可溶性淀粉分別按照1∶1∶1 的比例，設(shè)置參數(shù)：壓力8 kg/cm2，擠壓速度10 r/min，送料速度10 r/min。

兩種輔料制粒的一次成型率、吸濕率、顆粒流動無明顯差別，考慮到成本問題，生產(chǎn)選用糊精作為蓮子心配方顆粒干法制粒的輔料。見表4。

表4 輔料選擇結(jié)果

2.1.4.2 糊精干膏粉比例選擇 分別按不同輔料比加入干膏粉，設(shè)置制粒參數(shù)為：壓力8 kg/cm2，擠壓速度10 r/min，送料速度10 r/min。

可知，隨著糊精比例降低，成型率升高，同時流動性更差和吸濕性更強(qiáng)，故根據(jù)實際情況選擇30%～50%的輔料，更有利于產(chǎn)品分裝和保存。見表5。

表5 輔料比例選擇結(jié)果

2.1.4.3 制粒參數(shù)的選擇 按照輔料30%的比例，考察擠壓壓力、擠壓速度、送料速度對制粒的影響。試驗1 壓力不夠出現(xiàn)裂片，試驗4 壓力太大片子開始變黑，試驗2、3、5 制粒參數(shù)較合適，壓片能成型又無明顯變色。隨著擠壓速度和送料速度增加，一次性成型率提高，顆粒吸濕性變化不明顯，暫定干法制粒參數(shù)：壓力6～10 kg/cm2，送料速度8～10 r/min，擠壓速度8～10 r/min。見表6。

表6 干法制粒工藝考察結(jié)果

2.2 蓮子心配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

2.2.1 薄層色譜鑒別 取本品2 g，加甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL溶解，作為供試品溶液。取蓮子心對照藥材2 g，加水30 mL 回流提取1 h，濾過，濾液蒸干，自“加甲醇30 mL”起，同法制成對照藥材溶液。另取蓮心堿高氯酸鹽對照品，用甲醇制成濃度1 mg/mL 溶液，作為對照品溶液。取糊精0.2 g，同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗，分別吸取上述溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，展開劑為三氯甲烷-乙酸乙酯-二乙胺（5∶4∶1），展開，取出晾干，噴稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。見圖1。

圖1 蓮子心配方顆粒的TLC圖

2.2.2 檢查 按《中國藥典》2020年版四部通則0104 顆粒劑項下的有關(guān)規(guī)定，對本品3 批樣品的粒度、水分、溶化性、裝量差異、微生物限度等進(jìn)行檢查。測得3 批樣品粒度分別為：7.3%、6.6%、6.4%，水分分別為4.1%、3.7%、4.4%，3 批顆粒粒度、水分、溶化性、裝量差異、微生物限度均符合規(guī)定。

2.2.3 含量測定

2.2.3.1 含量測定方法 （1）色譜條件：色譜柱為Dikma- C18（250 mm×4.6 mm）；流動相為乙腈-0.015 mol/L 十二烷基磺酸鈉溶液-冰醋酸（56∶43∶1）；檢測波長282 nm。

（2）對照品溶液的制備：取蓮心堿高氯酸鹽對照品，加甲醇制成每1 mL 含25 μg 的溶液，即得。

（3）供試品溶液的制備：取本品約1.0 g，精密稱定，精密加入2%鹽酸甲醇溶液25 mL，稱定重量，回流30 min，放冷，再稱定重量，用2%鹽酸甲醇溶液補(bǔ)足重量，搖勻，濾過，精密量取濾液5 mL，置10 mL 量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

（4）陰性對照溶液的制備：取糊精0.2 g，同法制備成陰性對照溶液，即得。

（5）測定法：分別精密吸取上述溶液各10 μL，檢測、分析。

2.2.3.2 專屬性試驗 按照選定的方法分別制備供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶液，按照以上色譜條件，分別進(jìn)樣，結(jié)果顯示，目標(biāo)成分分離度良好，陰性無干擾。見圖2。

圖2 蓮子心配方顆粒HPLC圖譜

2.2.3.3 線性與范圍 精密稱取蓮心堿高氯酸鹽對照品，用甲醇配制成濃度為0.033 76 mg/mL 的對照品溶液。吸取上述對照品溶液，照選定的色譜方法，分別進(jìn)樣2.5，5，10，20，30 μL，進(jìn)行RP-HPLC 分析，測得峰面積分別為63.4、126.6、239.0、478.3、721.7，以蓮心堿高氯酸鹽峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：Y=706.7X+3.645，r=0.999 0。表明蓮心堿高氯酸鹽在0.084 4 μg～1.012 8 μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.3.4 儀器精密度試驗 取蓮子心配方顆粒，依據(jù)選定的方法制備供試品溶液，連續(xù)檢測分析6 次，測得蓮心堿高氯酸鹽峰面積分別為146.0、145.9、145.9、145.8、145.5、145.9，RSD為0.12%（n=6）。說明儀器精密度良好。

2.2.3.5 重復(fù)性試驗 取蓮子心配方顆粒，依據(jù)選定的方法制備6 份供試品溶液，檢測分析，測定6 份樣品含量分別為0.78、0.78、0.76、0.77、0.78、0.77 mg/g，平均含量為0.77 mg/g，RSD為0.82%（n=6）。

2.2.3.6 回收率試驗 取已知蓮心堿含量的蓮子心配方顆粒，共6 份，精密稱定，分別按表7加入對照品，自“精密加入2%鹽酸甲醇溶液25 mL”起同供試品制備方法制備樣品，按選定的色譜方法進(jìn)行操作與分析，測定蓮心堿的含量，計算6 份樣品中蓮心堿的加樣回收率均值為98.46%，RSD=1.42%，說明該方法準(zhǔn)確性好。見表7。

表7 加樣回收率試驗

2.2.3.7 成品含量測定 取蓮子心配方顆粒，依據(jù)選定的方法制備供試品溶液，并以選定的色譜條件檢測，測得三批蓮子心配方顆粒蓮心堿含量分別為0.77、0.79、0.76 mg/g。

3 討論

生物堿為蓮子心的主要藥效成分，現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)蓮子心中蓮心堿具有較好的抗炎［10］、降壓［11］、抗心律失常［12］、抗氧化［13］、抗腫瘤［14］以及抑制血小板聚集［15］等作用，試驗以蓮心堿為蓮子心配方顆粒的指標(biāo)成分優(yōu)化了其制備工藝，優(yōu)化后的工藝穩(wěn)定可行。同時建立了成品的質(zhì)量控制方法，其中蓮心堿含量測定方法經(jīng)驗證，專屬性、精密度、準(zhǔn)確度、線性與范圍均符合相關(guān)要求。成品三批數(shù)據(jù)穩(wěn)定，鑒于產(chǎn)品批次較少，暫定本品含蓮心堿不得少于0.50 mg/g。

綜上，優(yōu)化后的蓮子心配方顆粒制備工藝穩(wěn)定，質(zhì)量控制方法可操作性強(qiáng)，可為配方顆粒企業(yè)生產(chǎn)和檢驗提供參考。