羊支原體肺炎防治研究進(jìn)展

劉紅燕，郭亞男，王建東，閆背背，張正剛，何生虎*

（1.寧夏大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，寧夏 銀川 750021；2.寧夏農(nóng)林科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所，寧夏 銀川 750002）

羊支原體肺炎（Mycoplasmal pneumonia of sheep and goats，MPSG），俗稱(chēng)“爛肺病”，羊群一旦發(fā)病難以在短期內(nèi)控制疫情，死亡率較高。即使部分羊能夠通過(guò)藥物治療緩解癥狀，但肺部因受到支原體的侵害，后期難以徹底痊愈，導(dǎo)致飼料利用率降低，羊群增重緩慢，生長(zhǎng)速度不達(dá)標(biāo)，飼養(yǎng)周期長(zhǎng)且成本投入高，常給養(yǎng)殖戶(hù)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。目前，羊支原體肺炎在我國(guó)依然廣泛流行，除養(yǎng)羊集中的西北地區(qū)外，在西南地區(qū)發(fā)生羊支原體肺炎的報(bào)道也屢見(jiàn)不鮮[1]。這可能與跨地區(qū)轉(zhuǎn)運(yùn)羊群有密切關(guān)系，異地調(diào)運(yùn)種公羊、母羊和販賣(mài)羔羊，在運(yùn)輸途中造成羊群應(yīng)激以及體內(nèi)抗體水平降低，極易誘發(fā)本病[2]。應(yīng)加強(qiáng)對(duì)羊支原體肺炎的認(rèn)識(shí)和研究，從而為該病的防治提供參考。

1 病原學(xué)

支原體又稱(chēng)“霉形體”，是一類(lèi)沒(méi)有細(xì)胞壁、高度多形性、能通過(guò)濾菌器、可用人工培養(yǎng)基培養(yǎng)的最小原核細(xì)胞型微生物，大小為0.1～0.3 μm[3]。支原體目下設(shè)一科，為支原體科，科內(nèi)設(shè)兩屬：其一為支原體屬（Mycoplasma），屬內(nèi)有120種；其二為脲原體屬（Ureaplasma），屬內(nèi)有6種，常見(jiàn)的動(dòng)物支原體屬此兩屬，其結(jié)構(gòu)并不復(fù)雜，既沒(méi)有葉綠體，也沒(méi)有細(xì)胞核、細(xì)胞壁[4]。它與同種科其他支原體一樣，繁殖方式不單一，可以在培養(yǎng)基中自我繁殖，一般情況下是二分裂繁殖。支原體的繁殖速度比細(xì)菌緩慢，但是生長(zhǎng)規(guī)律與多數(shù)細(xì)菌相似，分為遲緩期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、平臺(tái)期和衰老期[5]。其平均生長(zhǎng)周期為1～3 h，長(zhǎng)者可達(dá)6～9 h。支原體經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后菌落為直徑125～500 nm的橢圓形，部分呈現(xiàn)出細(xì)長(zhǎng)的柳葉形并伴有細(xì)絲分枝，長(zhǎng)度為1～150 μm，最典型的形態(tài)是近似于圓形、表面順滑、外周圓潤(rùn)、中間厚邊緣薄，俗稱(chēng)“油煎蛋”狀[6]。

羊支原體肺炎病原類(lèi)型多樣，目前常見(jiàn)類(lèi)型有：綿羊肺炎支原體（M.ovipneumonia）[7]、絲狀支原體山羊亞種（M.mycoidessubsp.Capri,Mmc）[8]以及山羊支原體山羊亞種（M.Capricolum subsp.Capricolum,Mcc）[9]。此類(lèi)病原體對(duì)外界環(huán)境的抵抗力不高，臨床常用消毒劑，如75%酒精、燒堿、5%新潔爾滅等都可將它殺滅。此外，它不耐高溫對(duì)紫外線(xiàn)敏感，在50～60 ℃的環(huán)境下40 min即可被殺滅，且對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素、四環(huán)素類(lèi)、氟喹諾酮類(lèi)抗生素高度敏感，對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素、鏈霉素不敏感。

2 流行病學(xué)

該病一年四季皆可發(fā)生，尤其在3—5月和12月至次年1—2月較為多發(fā)，羊群感染后發(fā)病率和死亡率高，會(huì)給養(yǎng)殖戶(hù)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[10]。病羊及其分泌物是主要傳染源，通過(guò)呼吸道將胸腔和肺葉中的大量病原體排出體外而感染其他羊只。其傳播途徑為呼吸道和消化道，以呼吸道傳染較為多見(jiàn)，通過(guò)空氣、飛沫、氣溶膠等媒介傳染，傳播時(shí)間長(zhǎng)、波及范圍廣，因此難以防控[11]。綿羊較山羊更易感染，易感性與羊只的性別無(wú)關(guān)。易感動(dòng)物為1歲以下的羊群，以3月齡以下的羊只最易感染，感染率高達(dá)95.3%，病死率為27.5%[12]。如果不及時(shí)發(fā)現(xiàn)，采取嚴(yán)格的隔離措施，就會(huì)對(duì)養(yǎng)殖戶(hù)造成難以估量的危害。此外，外界環(huán)境的驟然改變也會(huì)促使該病暴發(fā)，如養(yǎng)殖密度過(guò)高、環(huán)境寒冷潮濕、排污和通風(fēng)不暢、消毒工作欠缺、距離運(yùn)輸遠(yuǎn)等。

3 致病機(jī)理

研究者對(duì)支原體致病結(jié)果進(jìn)行分析后，推測(cè)羊肺炎支原體借助空氣流動(dòng)，從鼻腔、咽喉和氣管進(jìn)入呼吸器官，然后利用細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)吸附在呼吸道上皮細(xì)胞纖毛隱窩內(nèi)開(kāi)始定植，或者定植在氣管細(xì)胞膜表面，其作用是抵抗纖毛的清理作用以及吞噬細(xì)胞的吞噬作用，利用宿主細(xì)胞成分釋放出有毒代謝產(chǎn)物，如過(guò)氧化氫、溶血素等。通過(guò)呼吸途徑，形成過(guò)氧化物損害纖毛以及上皮細(xì)胞膜，導(dǎo)致呼吸道纖毛脫落，從而阻礙宿主細(xì)胞清除炎性滲出物質(zhì)，最終引起呼吸道疾病。另外，羊肺炎支原體能吸附到氣管絨毛和肺泡細(xì)胞表面，從而致使部分肺小葉發(fā)生病變，隨后肺部組織發(fā)生一系列病理變化，造成肺機(jī)能失調(diào)，引起羊發(fā)生漿液性、纖維素性炎癥，逐步侵襲到整個(gè)肺臟，引起肺臟出現(xiàn)病變，發(fā)生纖維化[13]。此外，動(dòng)物機(jī)體感染后會(huì)出現(xiàn)一系列復(fù)雜的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)理，產(chǎn)生特異性與非特異性抗體。特異性抗體具有免疫保護(hù)功能和抵御能力，抵抗機(jī)體發(fā)生各類(lèi)感染反應(yīng)；非特異性抗體極易成為致病性因素，有可能導(dǎo)致過(guò)敏反應(yīng)，從而引起皮疹、哮喘等病癥。與此同時(shí)，其他部分抗體被激活后，與某些抗原形成免疫復(fù)合物，如果不能及時(shí)分解或清除，就容易積聚起來(lái)激活補(bǔ)體或巨噬細(xì)胞，引發(fā)器官炎癥反應(yīng)[14]。

4 免疫預(yù)防

疫苗接種是許多國(guó)家防控MPSG的主要措施。目前在生產(chǎn)實(shí)際中廣泛應(yīng)用的支原體疫苗是弱毒疫苗和滅活疫苗，從疫苗使用后的反饋信息來(lái)看，弱毒疫苗的預(yù)防效果比滅活疫苗好。20世紀(jì)50年代，中國(guó)獸藥監(jiān)察所率先研制出山羊爛肺病的組織滅活苗，對(duì)我國(guó)防控山羊支原體肺炎起到了重要作用。但由于該病的致病菌類(lèi)型多樣且病原復(fù)雜，該疫苗只針對(duì)其中2種病原體，對(duì)剩余的病原體不具備防治效果，其余病原體依然嚴(yán)重危害著養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展。韓笑等[15]選取臨床分離株Mo SC02株待培養(yǎng)菌液達(dá)到109CCU/ml時(shí)，將其濃縮20倍后用甲醛滅活，按1∶1加入油佐劑進(jìn)行乳化制成Mo滅活疫苗，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的保護(hù)率為100%。馮廣余[16]篩選最典型的Mo菌株經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)、膜分離機(jī)濃縮，測(cè)定濃縮液的蛋白含量為1.348 mg/ml，濃縮液為2.25×107CFU/ml后加入甲醛滅活，按54∶46加入油相和水相，制成Mo滅活疫苗，對(duì)10～15日齡的羔羊攻毒后均能產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答反應(yīng)，能有效減弱Mo菌株的致病性。高媛[5]利用氫氧化鋁佐劑和其他佐劑分別制備了不同滅活疫苗，經(jīng)過(guò)動(dòng)物臨床試驗(yàn)和免疫效價(jià)評(píng)估，證明用氫氧化鋁為佐劑制成的滅活苗的免疫保護(hù)效果更好，為畜禽肺炎支原體滅活苗的研制提供了參考借鑒。Ziegler等[17]為降低羊感染支原體的風(fēng)險(xiǎn)，采取了控制宿主體內(nèi)病原體的措施，通過(guò)采用不同含量的全菌蛋白制作疫苗，最后用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)評(píng)價(jià)免疫原性。結(jié)果表明，大劑量的抗原結(jié)合佐劑制作疫苗免疫母羊，母羊能夠產(chǎn)生強(qiáng)烈的人工主動(dòng)免疫效果，羔羊能夠獲得天然被動(dòng)免疫。但因支原體具有高度的抗原變異性，其膜蛋白容易變動(dòng)，隨之抗原表位也就發(fā)生改變。動(dòng)物接種疫苗后，機(jī)體產(chǎn)生的抗體與抗原表型不匹配，導(dǎo)致支原體傳統(tǒng)疫苗效果不佳。因此，科學(xué)家們逐步將重心轉(zhuǎn)移到新型疫苗研發(fā)上，尤其是基因疫苗的研發(fā)。Barbosa等[18]運(yùn)用生物信息學(xué)方法分析PG2型蛋白質(zhì)，明確其細(xì)胞定位，確定其B細(xì)胞線(xiàn)性和構(gòu)象表位，篩選出3種抗原表面蛋白（MAG-1560、MAG6130和P40），將它們作為支原體疫苗研發(fā)的新靶點(diǎn)。

5 防治措施

5.1 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

趙軍[19]應(yīng)用“養(yǎng)重于防，防重于治”的養(yǎng)殖方案，提高了母羊生產(chǎn)效率，保證了羔羊出欄率。因此，養(yǎng)殖戶(hù)要將生物安全措施放在生產(chǎn)計(jì)劃的首位，這樣能最大限度地降低羊群發(fā)病率。李發(fā)杰[20]通過(guò)科學(xué)合理地規(guī)劃羊場(chǎng)及羊舍，為羊群提供適宜的生存環(huán)境，發(fā)現(xiàn)能有效預(yù)防各種疾病，提高羊群出欄量。同時(shí)，在飼養(yǎng)過(guò)程中根據(jù)羊只日齡提供科學(xué)配比、營(yíng)養(yǎng)全面、適口性好的日糧，能夠間接提高羊群免疫力，降低MPSG的發(fā)病率[21]。高仲?gòu)?qiáng)[22]研究發(fā)現(xiàn)日常巡欄必不可少，盡量做到早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。通過(guò)平時(shí)巡欄，可以及時(shí)發(fā)現(xiàn)異常羊只，一旦確診為傳染病，要立刻采取嚴(yán)格的隔離措施，力爭(zhēng)將發(fā)病率降到最低，降低經(jīng)濟(jì)損失。

5.2 接種疫苗

目前，免疫接種是預(yù)防羊支原體肺炎公認(rèn)的最有效措施。當(dāng)前，支原體疫苗獲得新獸藥證書(shū)和專(zhuān)利證書(shū)，是由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所研制成功的山羊支原體肺炎滅活疫苗，該疫苗是二聯(lián)滅活疫苗，可以同時(shí)預(yù)防綿羊肺炎支原體和絲狀支原體山羊亞種的感染，同時(shí)實(shí)現(xiàn)綿羊和山羊的支原體肺炎免疫注射，在此病的防控方面發(fā)揮了一定作用。

5.3 藥物治療

羊支原體肺炎病原體是一種特殊的菌體，它沒(méi)有細(xì)胞壁，對(duì)部分抗生素較為敏感，使用抗生素治療羊支原體肺炎是藥物治療措施之一。Jay M等[23]通過(guò)瓊脂稀釋法評(píng)估最小抑菌濃度，結(jié)果顯示林可酰胺類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、氟苯尼考等藥物的MIC較低，可作為臨床治療藥物，但四環(huán)素的MIC有所增加，推測(cè)是由于核糖體的位點(diǎn)突變導(dǎo)致，與動(dòng)物克隆研究沒(méi)有關(guān)系。Rahman M等[24]通過(guò)肉湯微量稀釋法對(duì)分離菌株進(jìn)行體外藥敏試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)羊支原體肺炎對(duì)四環(huán)素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、氟苯尼考等藥物敏感，環(huán)丙沙星可作為羊支原體感染治療的首選藥物，其最低抑菌濃度為0.039 g/ml。中西藥結(jié)合的治療方法可以有效減少耐藥性的產(chǎn)生。高武成[25]用清瘟敗毒散和健胃散灌服羊只，外加肌肉注射30%替米考星和磺胺對(duì)甲氧嘧啶鈉與板藍(lán)根注射液，治療幾天后飼養(yǎng)場(chǎng)內(nèi)病情逐漸穩(wěn)定，以上研究表明正確選用藥物可有效治療羊肺炎支原體。

6 結(jié)語(yǔ)與展望

近年來(lái)，羊支原體肺炎在養(yǎng)羊業(yè)中廣泛流行，其傳染性強(qiáng)、病死率高、防控難度大，制約著我國(guó)養(yǎng)羊業(yè)的蓬勃發(fā)展。因此，要加強(qiáng)對(duì)羊支原體肺炎的認(rèn)識(shí)，從生產(chǎn)管理中降低該病的發(fā)生和蔓延。同時(shí)，利用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，加強(qiáng)對(duì)羊支原體肺炎新型疫苗和藥物的研發(fā)。