鹽酸拉貝洛爾片仿制制劑與參比制劑溶出曲線相似性研究*

郝麗娟，徐艷梅，苗會娟，王春霞，高燕霞

（河北省藥品醫療器械檢驗研究院·仿制藥質量控制與評價重點實驗室，河北 石家莊 050227）

鹽酸拉貝洛爾收錄于2018年版《國家基本藥物目錄》，用于治療高血壓和心絞痛，同時具有α1受體和β受體拮抗作用，因其不進入母胎循環，廣泛用于治療妊娠期高血壓［1-2］，與其他藥物聯用可取得較好妊娠效果［3-5］，因此對其安全性和有效性均有更嚴格的要求。國家藥品監督管理局（NMPA）網站顯示，我國有8家企業具備生產鹽酸拉貝洛爾片仿制制劑的資格，但均未開展該藥的一致性評價工作，不符合“十三五”規劃要求，亟須改進。本研究中以NMPA發布的仿制藥參比制劑目錄（第十批）為依據，按《普通口服固體制劑溶出度試驗技術指導原則》［6］，采用高效液相色譜（HPLC）法測定鹽酸拉貝洛爾片仿制制劑和參比制劑（Aspen Japan K.K.公司）在4種溶出介質（水、pH1.2鹽酸溶液、pH4.0醋酸鹽緩沖液和pH6.8磷酸鹽緩沖液）中的溶出度，采用相似性因子（f2）法［7-9］評價仿制制劑與參比制劑溶出曲線的相似性，為鹽酸拉貝洛爾片仿制制劑的質量一致性評價工作提供參考。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-20AT型高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）；EDT-14Lx型智能溶出試驗儀（上海儀真分析儀器有限公司）；Logan UDT-814型智能溶出度試驗儀（美國Logan公司）；XS105型電子分析天平（梅特勒-托利多國際貿易＜上海＞有限公司，感量為0.01 mg）；PB-20型酸度計（德國Sartorius公司）。

1.2 試藥

鹽酸拉貝洛爾對照品（美國TLC公司，批號為1744-096A1，含量99.8%）；鹽酸拉貝洛爾片（參比制劑，A廠，批號為2W4J，規格為每片50 mg）；鹽酸拉貝洛爾片（仿制 制 劑，B廠，批 號 分 別 為08181102，20170304，08180502；C廠，批號分別為180901，180201，180601；規格均為每片50 mg）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純；水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（25∶75，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：230 nm；柱溫：40℃；進樣量：20μL。

2.2 溶出條件

依據日本橙皮書［10］、《普通口服固體制劑溶出曲線測定與比較指導原則》［11］、原國家食品藥品監督管理總局藥品審評中心藥品體外溶出試驗信息庫［12］，以槳法測定溶出度，條件為，轉速50 r/min，溶出介質900 mL，溫度（37±0.5）℃；選擇的4種溶出介質分別為pH 1.2鹽酸溶液（精密量取鹽酸7.65 mL，加水稀釋至1 000 mL混勻制成）、水、pH 4.0醋酸鹽緩沖液（精密稱定醋酸鈉1.22 g，加2 mol/L醋酸溶液20.5 mL，加水溶解并定容至1 000 mL，搖勻制成）、pH 6.8磷酸鹽緩沖液（精密量取0.2 mol/L磷酸二氫鉀試液250 mL，置1 000 mL容量瓶中，再加入118 mL的0.2 mol/L氫氧化鈉溶液，用水定容至1 000 mL制成）；選擇的取樣時間分別為5，10，15，30，45，60，90，120 min。

2.3 溶液制備

對照品溶液：取鹽酸拉貝洛爾對照品適量，精密稱定，分別加4種溶出介質溶解并稀釋制成質量濃度為1 mg/mL的對照品貯備液；再分別以4種溶出介質稀釋成每1 mL中約含50μg的溶液，即得。

供試品溶液：取鹽酸拉貝洛爾片仿制制劑和參比制劑樣品各1片，分別平行12片，再分別以pH 1.2鹽酸溶液、水、pH 4.0醋酸鹽緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液為溶出介質，按2.2項下溶出條件進行溶出度試驗。分別于2.2項下各時間點，取樣10 mL（每次取樣后均向溶出杯中補加相同體積相同溫度的溶出介質），濾過，取續濾液作為供試品溶液。

空白對照溶液：以4種溶出介質為空白對照溶液。

2.4 方法學考察

系統適用性試驗：取2.3項下對照品溶液、供試品溶液和空白對照溶液各適量，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結果鹽酸拉貝洛爾色譜峰形較好，供試品溶液在與對照品溶液色譜相同保留時間處有相應色譜峰，且空白對照無干擾。詳見圖1。

圖1 高效液相色譜圖1.Labetalol hydrochloridea.Blank control solution b.Reference solution c.Test solutionA.Water B.pH 1.2 hydrochloric acid solution C.pH 4.0 acetate buffer solution D.pH 6.8 phosphate buffer solutionFig.1 HPLC chromatograms

線性關系考察：精密量取2.3項下對照品貯備液0.1，0.2，0.5，1.0，5.0，10.0 mL，分別置10 mL容量瓶中，再分別以4種溶出介質定容，取適量，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以峰面積（Y）為縱坐標、鹽酸拉貝洛爾溶出量（X，μg/mL）為橫坐標進行線性回歸。結果在4種溶出介質中，鹽酸拉貝洛爾溶出量均在10.11～1 011.00μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。詳見表1。

表1 不同溶出介質線性關系考察結果（n=6）Tab.1 Results of linear relation test of different dissolution media（n=6）

精密度試驗：取鹽酸拉貝洛爾參比制劑（批號為2W4J）粉末適量，精密稱定，按2.3項下方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件連續進樣測定6次及連續10 d進樣測定，記錄峰面積，測定日內精密度和日間精密度。結果鹽酸拉貝洛爾在pH 1.2鹽酸溶液、水、pH 4.0醋酸鹽緩沖液、pH6.8磷酸鹽緩沖液中日內精密度結果的RSD分別為0.67%，0.41%，0.59%，0.48%（n=6），日間精密度結果的RSD分別為0.74%，0.53%，0.69%，0.71%（n=10），表明方法精密度良好。

穩定性試驗：取鹽酸拉貝洛爾參比制劑（批號為2W4J）粉末適量，精密稱定，按2.3項下方法制備供試品溶液，分別于室溫下放置0，1，2，4，6，8，12 h時，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果鹽酸拉貝洛爾在pH 1.2鹽酸溶液、水、pH 4.0醋酸鹽緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液中結果的RSD分別為0.53%，1.12%，0.70%，1.20%（n=7），表明供試品溶液室溫放置12 h內基本穩定。

重復性試驗：取鹽酸拉貝洛爾參比制劑（批號為2W4J）粉末適量，精密稱定，按2.3項下方法制備供試品溶液，平行6份，再按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果鹽酸拉貝洛爾在pH 1.2鹽酸溶液、水、pH 4.0醋酸鹽緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液的平均含量分別為84.8%，98.1%，91.2%，75.4%，RSD分別為0.95%，0.67%，0.76%，0.86%（n=6），表明方法重復性良好。

2.5 耐用性試驗

取2.3項下對照品溶液、供試品溶液和空白對照溶液各適量，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。分別考察不同的流速、流動相中乙腈比例、柱溫、色譜柱及液相色譜儀等因素對結果的影響。結果供試品溶液中鹽酸拉貝洛爾的峰面積基本一致，表明色譜條件發生一定程度變化時本方法仍可滿足試驗要求，耐用性良好。

2.6 溶出度測定

分別取參比制劑和B廠、C廠仿制制劑（分別記為仿制試劑1，2）各1片，分別平行12片，按2.2項下溶出條件測定各取樣時間點的累積溶出度，以溶出時間為橫坐標、以各時間點12片樣品累積溶出度的平均值為縱坐標繪制溶出曲線。詳見圖2。

圖2 鹽酸拉貝洛爾片仿制制劑與參比制劑在不同溶出介質中的溶出曲線（n=12）A.Water B.pH 1.2 hydrochloric acid solution C.pH 4.0 acetate buffer solution D.pH 6.8 phosphate buffer solutionFig.2 Dissolution profiles of imitative and reference preparations of Labetalol Hydrochloride Tablets in different dissolution media（n=12）

采用f2法評價仿制制劑與參比制劑體外溶出曲線的差異。當f2值為50～100時，認為兩條溶出曲線相似。在4種溶出介質中，分別以時間點5，15，45 min時的累積溶出度計算f2，結果見表2。可見，B廠樣品以pH 1.2鹽酸溶液和pH 6.8磷酸鹽緩沖液為溶出介質時，所得溶出曲線與參比制劑具有相似性；C廠樣品的4種溶出曲線與參比制劑均無相似性。

表2 仿制制劑與參比制劑溶出曲線相似性結果（n=12）Tab.2 Results of the f2 of the imitative preparation and reference preparation（n=12）

3 討論

3.1 溶出方法及其優化

溶出度的測定，法定標準選擇籃法，100 r/min［13］，但美國藥典41版和日本藥局方第17版均采用槳法，50 r/min。籃法較適用于膠囊劑，依照原國家食品藥品監督管理總局要求［11］，對于小劑量片劑，采用槳法較為適宜，且50 r/min的溶出強度與人體內胃腸道蠕動強度更接近。因此，本研究中照此選擇。

3.2 溶出儀選擇

取B廠參比試劑，采用不同品牌溶出儀［儀真EDT-14Lx型智能溶出試驗儀（上海儀真分析儀器有限公司）和UDT-814型智能溶出度試驗儀（美國Logan公司）］進行試驗，結果兩者測定結果基本一致，溶出曲線基本相似。本研究中選擇前者。

3.3 溶出介質選擇

鹽酸拉貝洛爾的解離常數為7.57（＞3.0），視為堿性藥物［7］，選擇溶出介質時應選擇pH分別為1.0或1.2，3.0～5.0，6.8的溶液及水。NMPA推薦的鹽酸拉貝洛爾參比制劑為日本Aspen公司產品，且日本橙皮書中鹽酸拉貝洛爾片溶出曲線測定選擇的溶出介質分別為pH 1.2，4.0，6.8的溶液及水。故本研究在此基礎上，結合文獻［11］，選定文中所用4種溶出介質。

3.4 小結

鹽酸拉貝洛爾片為我院2019年國家評價抽驗品種，目前國內具有鹽酸拉貝洛爾片批準文號的8個廠家均未開展一致性評價工作。本研究中參照相關文獻［14-17］，建立了測定鹽酸拉貝洛爾片溶出度的方法，測定了仿制藥在4種不同pH溶出介質中的溶出曲線。從溶出曲線和f2結果可得，在特定溶出介質中，B廠和C廠的仿制制劑溶出過快或過緩，與參比制劑不具有相似性，結合調研分析，可能是生產中崩解劑的種類和用量不同所致，提示生產企業在配方和工藝方面應予以改進。綜上所述，該方法適用于鹽酸拉貝洛爾片仿制制劑溶出度的測定，靈敏度高、準確度好，可為仿制制劑質量一致性評價提供參考。