羅布麻茶改善睡眠功能實驗研究

何 偉 王 莉 劉 磊 黃景鳳 李治建

(1 阿勒泰戈寶茶股份有限公司，阿勒泰，836500；2 阿勒泰戈寶茶股份有限公司烏魯木齊分公司，烏魯木齊，830015；3 新疆羅布麻工程技術研究中心(紅麻)，阿勒泰，836500；4 新疆維吾爾自治區維吾爾藥研究所，烏魯木齊，830049)

羅布麻(ApocynumvenetumL.)屬夾竹桃科植物，《中華人民共和國藥典》記載，用鮮葉加工成的羅布麻茶功能主治“平肝安神、清熱利水、高血壓、神經衰弱”等[1-2]。近幾年，具有保健功效的純天然產品受到亞健康人群的青睞，羅布麻作為天然草本藥物，隨著人們對其研究的日益深入，其保健功效也逐漸被人們所接受。羅布麻葉中含黃酮、有機酸、鞣質、脂肪酸醇酯、氨基酸、礦物元素及其他物質[3-5]。國內外研究發現，羅布麻葉中的有效成分具有降血壓、降血脂、抗氧化、防抑郁、利尿、保護腎臟和保護心血管等作用[6-7]。目前國內外對羅布麻茶中有效物質改善睡眠功能的研究尚未見報道。

本研究所用羅布麻生長在東經87°33′；北緯47°42′的新疆阿勒泰阿拉哈克鄉東戈壁。本實驗以小鼠為觀察對象，觀察羅布麻茶改善睡眠的功效，為產品的進一步開發提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 選用新疆醫科大學實驗動物中心提供的美國癌癥研究所(Institute of Cancer Research，ICR)雄性小鼠192只[實驗動物生產許可證號：SCXK(新)2018-0002，實驗動物使用許可證號：SYXK(新)2018-0001]，5～6周齡，飼養室溫度(23±3)℃、濕度40%～70%、噪聲<85 dB，12 h/12 h白天和黑夜循環照明，本實驗方案交由實驗動物管理(倫理)委員會審查、批準后實施完全按國家相關實驗動物福利法規規定執行(倫理審批號：nGLP-2019015)。

1.1.2 藥物 羅布麻茶，袋泡茶，內容物為由羅布麻葉、五味子提取物、酸棗仁提取物組成的顆粒狀物質，由阿勒泰戈寶茶股份有限公司生產提供，批號：20181116。推薦成人日攝入定型產品量9 g/60 kg(開水泡服，2次/d，1袋/次，4.5 g/袋)，以廠家提供的濃縮液(褐色膏狀，1 g定型產品相當于0.7 g濃縮液)作為受試物，則濃縮液的日攝入量為6.3 g/60 kgBW，即0.105 g/kgBW。

1.1.3 試劑與儀器 戊巴比妥鈉(北京化學試劑公司，批號：AM00469)、巴比妥鈉(成都康弘藥業集團股份有限公司，批號：190305)，2種試劑均現配現用。電子天平(德國賽多利斯股份公司，型號:BT-124S)、電熱蒸餾水器(北京市永光明醫療儀器廠，型號:HS.Z68.10)、超聲波加濕器(北京亞都室內環保科技股份有限公司，型號:YC-D209)。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 分別選取48只體質量為18.7～21.5 g的小鼠并分為4組，每組12只，進行直接睡眠實驗、延長戊巴比妥鈉睡眠時間實驗、戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗和巴比妥鈉催眠潛伏期實驗[8]。

1.2.2 給藥方法 以成人(體質量按60 kg計)每天攝入濃縮液的量(0.105 g/kg)的10、20和30倍設置劑量組，則羅布麻茶高劑量組、羅布麻茶中劑量組、羅布麻茶低劑量組的劑量分別為3.15 g/kg、2.10 g/kg、1.05 g/kg。精確稱取7.88 g、5.25 g、2.63 g濃縮液于50 mL容量中，加入蒸餾水，充分溶解后定容，陰性對照組為蒸餾水，每組12只。各劑量組小鼠每天灌胃給予濃縮液1次，灌胃量為0.2 mL/10 g，陰性對照組小鼠給予等體積的蒸餾水，各劑量組持續灌胃30 d。小鼠于末次給藥前1 d給予蒸餾水及不同濃度濃縮液60 min后，檢測各組小鼠自主活動5 min自主活動行為情況，動物須在檢測開始前2 min放入曠場箱內適應后開始測試。

1.2.3 檢測指標與方法

1.2.3.1 直接睡眠實驗 小鼠末次喂予蒸餾水及不同濃度樣品的受試物后，查看受試樣品組及陰性對照組有無入睡表現，以翻正反射消失為標準，記錄陰性對照組與受試樣品組入睡小鼠個數及入睡時間。

1.2.3.2 延長戊巴比妥鈉睡眠時間實驗 正式實驗開始前先做預實驗，找到使小鼠完全入睡，但又不會使其入睡時間過長的戊巴比妥鈉劑量(45 mg/kg)，并以此劑量開展后面實驗。小鼠最后1次給予蒸餾水及不同濃度受試物后，出現峰作用前15 min，給各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉，注射量為0.1 mL/10 g，以翻正反射消失為標準，查看受試樣品能否延長戊巴比妥鈉睡眠時間。

1.2.3.3 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗 正式實驗開始前先做預實驗，確定戊巴比妥鈉最大閾下催眠劑量(26 mg/kg)：85%小鼠翻正反射不消失的戊巴比妥鈉最大閾下劑量。小鼠最后1次給予蒸餾水及不同濃度受試樣品后，出現峰作用前10 min，各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉最大閾下催眠劑量，注射量為0.1 mL/10 g，記錄30 min內入睡個體數(翻正反射消失60 s以上)。

1.2.3.4 巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗 正式實驗開始前先做預實驗，確定小鼠完全入睡，但又不會使其入睡過長時間的巴比妥鈉的劑量(260 mg/kg)，并以此劑量開展后面實驗。

1.3 統計學方法 采用SPSS 22.0軟件進行數據處理，采用方差分析法進行均值比較，方差齊性，各組間比較用LSD法；方差不齊性，各劑量組間用Tamhane，s法比較。用方差分析小鼠體質量、入睡時間、入睡動物數、潛伏期的單因素實驗數據；用χ2檢驗分析入睡動物發生率的實驗數據。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 羅布麻茶對小鼠體質量的影響 小鼠最后1次喂予蒸餾水及不同濃度受試物后，對小鼠實驗前后體質量進行方差分析，結果說明，各劑量組實驗前后小鼠體質量與陰性對照組比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。小鼠最后1次喂予蒸餾水及不同濃度受試物后，對小鼠實驗前后體質量方差分析，結果說明，各劑量組實驗前與實驗后小鼠體質量與陰性對照組比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。各劑量組實驗前后小鼠體質量與陰性對照組比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。小鼠最后1次喂予蒸餾水及不同濃度受試物后，對小鼠實驗前后體質量進行方差分析，結果說明，各劑量組實驗前后小鼠體質量與陰性對照組比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表4。

表1 羅布麻茶對直接睡眠實驗小鼠體質量的影響

表2 羅布麻茶對延長戊巴比妥鈉睡眠時間實驗小鼠體質量的影響

表3 羅布麻茶對戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗小鼠體質量的影響

表4 羅布麻茶對巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗小鼠體質量的影響

2.2 羅布麻茶對直接睡眠實驗入睡小鼠數及入睡時間的影響 與陰性對照組比較，各劑量組入睡動物只數及入睡時間均為0，差異無統計學意義(P>0.05)。

2.3 羅布麻茶對戊巴比妥鈉入睡時間的影響 各組的入睡時間差異有統計學意義(P<0.05)，與陰性對照組比較，高劑量組小鼠入睡時間顯著增長(P<0.01)，中劑量組小鼠入睡時間增長(P<0.05)，劑量低的觀察組小鼠入睡時間無明顯變化(P<0.05)。見表5。

表5 羅布麻茶對戊巴比妥鈉入睡時間的影響

2.4 羅布麻茶對戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗入睡發生率的影響 與陰性對照組比較，各劑量組小鼠的入睡發生率差異無統計學意義(P>0.05)。見表6。

表6 羅布麻茶對戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗小鼠入睡發生率的影響(n=12)

2.5 羅布麻茶對戊巴比妥鈉潛伏期的影響 與陰性對照組比較，羅布麻茶高劑量組小鼠睡眠潛伏期明顯變短，差異有統計學意義(P<0.01)，羅布麻茶中劑量組、羅布麻茶低劑量組小鼠睡眠潛伏期差異無統計學意義(P>0.05)。見表7。

表7 羅布麻茶對戊巴比妥鈉潛伏期的影響

3 討論

目前，失眠已成為社會普遍現象，嚴重影響人們的正常生活。西醫認為睡眠主要是因為大腦神經系統調節功能發生障礙；中醫認為是人體陰陽失衡。常見安眠藥的作用機制是抑制神經系統，降低神經興奮性。因此，它在幫助失眠患者改善睡眠的同時，會嚴重減低神經系統的調節功能。長期服用，易形成藥物依賴，甚至發生慢性中毒及戒斷綜合征等[9-13]。羅布麻茶以平肝安神，補腎寧心為法，選用羅布麻葉，輔以酸棗仁提取物，再配以五味子提取物共同組方，改善睡眠。現代研究表明：羅布麻葉對戊巴比妥的鎮靜催眠作用有協同作用；酸棗仁具有延長大鼠慢波睡眠深睡階段的功效；五味子能延長睡眠時間，鎮靜安神，同時具有提高機體免疫力的功效。羅布麻茶作為一種天然安全的保健食品不僅可以改善睡眠還不會生產依賴性，其中含有的黃酮類等物質使其保健功效更為明確。

通過羅布麻茶小鼠實驗說明，對小鼠經口連續灌胃給予高劑量、中劑量、低劑量的羅布麻茶30 d，與陰性對照組比較，戊巴比妥鈉誘導的小鼠睡眠時間高劑量組顯著延長,睡眠潛伏期明顯減短；中劑量組小鼠睡眠時間延長；直接睡眠實驗入睡動物個數、睡眠時間及戊巴比妥鈉入睡發生率羅布麻茶高劑量組、羅布麻茶中劑量組、羅布麻茶低劑量組與陰性對照組比較無顯著性差異；各項實驗小鼠體質量羅布麻茶高劑量組、羅布麻茶中劑量組、羅布麻茶低劑量組與陰性對照組比較無顯著性差異，根據《保健食品檢驗與評價技術規范》(2003版)中的評價標準，認為羅布麻茶具有改善睡眠的功效[14-21]。經過實驗比較，羅布麻茶可使小鼠的體質量有一定程度的降低，羅布麻具有清熱利尿及增加腸蠕動的作用，進而促進新陳代謝，降低體質量，引起動物腦系數的升高，即小鼠腦組織中樞神經遞質5-羥色胺、多巴胺的水平，羅布麻改善睡眠的機制可能在于促進5-羥色胺的生物合成過程，從而幫助患者改善睡眠[22]。