肅南奶牛乳房炎主要致病菌的分離與鑒定

王婭波

（甘肅省肅南縣牧業區劃辦公室，甘肅 肅南 734400）

奶牛乳房炎（bovine mastitis,BM）是一種因機械性刺激、病原微生物侵入及化學物理性損傷等因素引起的奶牛乳房實質和間質的炎癥綜合性疾病[1-2]。不同國家和地區奶牛乳房炎的發病率不同。在我國，因不同地區飼養管理水平差異，導致奶牛隱性乳房炎的發病率為13.41%～71.67%[3-4]。奶牛乳房炎根據奶牛乳汁可否檢出病原菌和乳汁有無肉眼可見變化情況分為臨床型乳房炎和亞臨床型乳房炎（又名隱性乳房炎），同時，也可根據奶牛感染的細菌類型將其分為傳染性乳房炎和環境性乳房炎[5-6]。

臨床型乳房炎憑借肉眼觀察乳房和乳汁的變化即可判定，其中輕癥乳房炎表現為奶牛乳房腫脹，疼痛或疼痛不明顯，乳汁稀薄、清淡，最初擠出的乳汁有絮狀物，食欲和體溫可能都正常，但產奶量略有下降[1]。患有重癥乳房炎的奶牛則表現為一個或多個乳區患病，患病乳區呈不同程度充血、腫脹、溫熱和疼痛，有的還會出現乳頭皮膚塊狀和大片壞死，產乳量減少或停止，乳汁稀薄并混有膿塊，同時還會出現精神不振、食欲減退、心跳加快及全身寒戰，體溫最高可上升到41℃以上，嚴重時會出現眼球下陷、水瀉、大便惡臭、體力衰竭以及臥地不起，直至因敗血癥而亡[1]。亞臨床型乳房炎因癥狀輕微，常被人們忽視，但是該病不僅影響患病牛的產奶量和乳品質，還會延長產后發情和妊娠時間，而且容易在牛群中傳播，給奶牛業造成的損失比顯性乳房炎更大。亞臨床型乳房炎病牛的乳腺組織眼觀上和正常組織雖無明顯差別，但是其奶樣中的許多營養成分和理化性質卻已經發生了改變，必須借助外界設備加以確診[7]。通常以奶樣中體細胞數量上升作為確診的主要依據，當牛奶奶樣中的體細胞數超過30萬/mL時就可以判斷為隱性乳房炎[8]，或者在奶樣中分離出細菌也可以作為確診依據。

奶牛乳房炎的誘發原因復雜，包括機械組織損傷、奶牛自身原因、飼養環境管理和病原微生物感染等，其中病原微生物是誘發該病最主要的原因，也是長期影響奶牛場經濟效益、導致奶牛淘汰率居高不下的主要原因。大部分微生物均能導致奶牛乳房炎，其中細菌侵入奶牛機體是引起奶牛乳房炎發生的主要原因[9-10]，主要致病菌包括金黃色葡萄球菌、鏈球菌及大腸桿菌等。為了解甘肅肅南縣奶牛乳房炎的主要病原菌，本試驗從肅南縣奶牛養殖場及農戶家中采集奶樣，用北京奶牛乳房炎診斷液（BMT）檢測出陽性樣品進行致病菌的分離和鑒定，以便更好地為當地奶牛乳房炎的防控治療提供針對性依據。

1 材料與方法

1.1 奶樣的采集與檢測

選擇甘肅肅南5個規模奶牛養殖場和13戶奶牛散養農戶進行奶樣采集。其中，奶牛場每隔一段時間會做隱性乳房炎檢測，并將陽性奶牛單獨隔離。本試驗樣品來源于養殖場隔離區奶牛。

采集樣品前先對采集者本人的雙手和采集器械進行消毒，然后用1%高錳酸鉀對奶牛乳頭周圍進行擦洗消毒，并用紙巾擦干。采集奶樣時先將前3把奶棄之，每個乳區各取2 mL乳汁，分別加入乳房炎檢驗盤中，再分別加入1∶4倍稀釋的BMT診斷液2 mL，輕輕搖晃10～30 s后判定結果并記錄。將BMT檢測出的陽性奶樣保存至放有冰袋的采樣箱中，迅速送回實驗室進行樣品中細菌的分離鑒定[11]。

1.2 主要致病菌的分離

主要致病菌的分離方法參考文獻[11-12]。

1.3 主要致病菌的藥敏試驗

將已經純化后的細菌吸取100 μL接種于3 mL的BHI培養液體中培養12 h，再根據甘肅肅南奶牛場和基層獸醫的常用藥品種類選擇相應的藥敏試紙片進行試驗。使用Mueller-Hinton（MH）肉湯培養基配成約4 mm厚的平板，將過夜培養好的細菌使用生理鹽水稀釋至濃度1.5×108CFU/mL。用棉簽蘸取菌液后均勻涂布在平板上，用鑷子夾取藥敏試紙片貼在平板上，隨后將貼好藥敏試紙片的平板放進培養箱中培養12～24 h。

1.4 結果判定

BMT檢測判定方法如表1。根據藥敏試驗標準判斷細菌的耐藥情況如表2。

表1 BMT法結果判定

表2 藥敏試驗抑菌圈直徑判定標準

2 結果與分析

2.1 樣品細菌分離結果

運用奶牛隱性乳房炎快速診斷液（BMT）共檢測210份奶樣，得到77份乳房炎陽性奶樣。從77份奶樣當中分離出共計118株菌。由表3可知，其中埃希氏菌屬39株，分離率達到33.05%（39/118）；葡萄球菌屬34株，分離率 28.81%（34/118）；鏈球菌屬 24株，分離率 20.34%（24/118）；腸球菌屬 12株，分離率 10.17%（12/118）；克雷伯氏菌屬 9 株，分離率 7.63%（9/118）。

表3 樣品中主要病原菌分離株鑒定結果

2.2 主要致病菌藥敏試驗結果

表4為藥敏試驗結果，可見甘肅肅南奶牛乳房炎主要致病菌均存在不同程度的耐藥性。

表4 主要致病菌藥敏結果

3 討論

奶牛乳房炎是導致甘肅肅南奶牛淘汰率高、經濟損失嚴重的重要因素之一。造成奶牛乳房炎的原因主要是致病菌感染，致病菌種類較多。因此，在治療時應根據該場奶牛乳房炎中感染細菌的優勢菌群進行治療，才可以盡可能減少經濟損失。

本試驗通過對甘肅肅南奶牛乳房炎細菌的分離和鑒定，發現該地區患病奶牛乳房炎的主要致病菌以埃希氏菌屬、葡萄球菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬以及克雷伯氏菌屬為主，而且均存在不同程度的耐藥性，其主要原因是抗生素濫用。

4 結論

在實際生產生活中，應當減少頻繁單一地使用廣譜抗生素，以避免細菌耐藥情況的出現，定期給奶牛做體檢，并對發病牛的病原進行分離和鑒定。選擇聯合用藥或運用抗生素替代療法（中藥、激素等）治療奶牛乳房炎，不僅能夠減少細菌耐藥性的產生，還能夠提高疾病的治愈率。