IL-17、IL-23 及Eotaxin-2 水平檢測在大皰性類天皰瘡病情評估中的應用

楊貝貝 鄭小菊 韓義明

大皰性類天皰瘡屬于自身免疫性皮膚病，在65 歲以上的老年人中高發，部分年輕人及兒童也可發病，影響患者生活質量［1］。白細胞介素-17（Interleukin -17，IL-17）及白細胞介素-23（Interleukin-23，IL-23）均由CD4+T 淋巴細胞亞群中的Th17細胞分泌而來［2］。已有較多研究發現IL-17、IL-23在類風濕性關節炎、過敏性鼻炎、銀屑病等慢性炎癥疾病中呈異常表達狀態［3］。近年來有研究發現，IL-17、IL-23 可能在大皰性類天皰瘡的發病過程中發揮至關重要的作用，可能通過多種激酶途徑，促進炎癥細胞釋放，引發炎癥反應，加重病情［4］。嗜酸性粒細胞趨化因子（Eotaxin-2）是CC型趨化因子家族的成員，是目前發現的具有超強嗜酸性粒細胞趨化活性作用的因子，其與支氣管哮喘、變應性鼻炎等疾病的發生密切相關［5］，但Eotaxin-2 與大皰性類天皰瘡的關系研究較為缺乏。本研究旨在探討IL-17、IL-23 及Eotaxin-2 水平檢測在大皰性類天皰瘡病情評估中的應用，現將研究報告整理如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2014 年3 月至2020 年3 月于信陽職業技術學院附屬醫院進行治療的大皰性類天皰瘡患者的臨床資料。納入標準：①存在皮膚紅斑、水皰、皰壁厚、不易破等臨床癥狀，均經病理組織檢查證實為大皰性類天皰瘡［6］；②納入研究前一個月內無大劑量糖皮質激素和/或免疫抑制劑治療史。排除標準：①合并嗜酸性粒細胞增多癥、哮喘、蕁麻疹者；②患有寄生蟲病、濕疹、特異性皮炎的患者；③合并腫瘤、血液病或相關性皮膚病者。

本研究最終納入104 例患者，設為觀察組：其中男49 例，女55 例；年齡32～85 歲，平均年齡（73.83±9.54）歲。選取同期在本院進行健康體檢的健康者110 名設為對照組，男52 名，女58 名；年齡35～87 歲，平均年齡（74.25±9.84）歲。兩組一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05）。本研究經本院醫學倫理委員會批準，患者已簽署知情同意書。

1.2 方法

觀察組于入院后次日采集空腹肘前靜脈血5 mL，對照組于體檢當日采集空腹肘前靜脈血5 mL，將標本放入4℃冰箱內進行凝血反應0.5 h，以3 000 r/min 離心15 min（r=10 cm），提取上層血清凍存于-80℃冰箱待測。統一將凍存樣品取出，預先置入4℃冰箱緩慢融化12 h，測試前0. 5 h 再將其與試劑盒一同放入室溫環境進行溫度平衡。IL-17、IL-23 及Eotaxin-2 水平測試均應用酶聯免疫吸附法進行檢測。試劑盒購自貝克曼庫爾特商務（中國）有限公司。具體操作步驟參見試劑盒說明書。

1.3 觀察指標

比較各組間IL-17、IL-23 及Eotaxin-2 水平，并分析IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平與臨床嚴重程度評分（Autoimmune bullous skin disorder intensity score，ABSIS）［7］的相關性。由1 名皮膚科醫師對ABSIS 評分進行評定：0～1 分，基本無活動；2～3分，輕度活動；4～5 分，中度活動；6～7 分，重度活動。根據ABSIS 評分將觀察組分為輕度40 例、中度例33 例、重度31 例。通過ROC 曲線分析IL-17、IL-23、Eotaxin-2 及三者聯合檢測對大皰性類天皰的診斷價值。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0 統計軟件進行統計分析，計量資料采用（±s）表示，組間比較采用t檢驗，多組間比較采用F檢驗；采用Pearson 直線相關分析IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平與ABSIS 評分的相關性；繪制ROC 曲線，計算AUC，分析IL-17、IL-23、Eotaxin-2 及三者聯合檢測對大皰性類天皰的診斷價值；以P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平比較

觀察組IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平均顯著高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組IL-17、IL-23、Eotaxin-2水平比較［（±s），（pg/mL）］Table 1 Comparison of the levels of IL-17，IL-23 and Eotaxin-2 between the two groups［（±s），（pg/mL）］

表1 兩組IL-17、IL-23、Eotaxin-2水平比較［（±s），（pg/mL）］Table 1 Comparison of the levels of IL-17，IL-23 and Eotaxin-2 between the two groups［（±s），（pg/mL）］

組別觀察組對照組t 值P 值n 104 110 IL-17 139.32±25.89 23.67±3.10 46.505＜0.001 IL-23 55.89±4.61 31.54±2.36 48.842＜0.001 Eotaxin-2 288.01±56.52 26.45±5.24 48.324＜0.001

2.2 不同病情嚴重程度的患者IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平比較

3 組IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平比較：輕度組＜中度組＜重度組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同病情嚴重程度的患者IL-17、IL-23、Eotaxin-2水平比較［（±s），（pg/mL）］Table 2 Comparison of IL-17，IL-23 and Eotaxin-2 levels in patients with different disease severity［（±s），（pg/mL）］

表2 不同病情嚴重程度的患者IL-17、IL-23、Eotaxin-2水平比較［（±s），（pg/mL）］Table 2 Comparison of IL-17，IL-23 and Eotaxin-2 levels in patients with different disease severity［（±s），（pg/mL）］

注：與輕度組比較，aP＜0.05；與中度組比較，bP＜0.05。

組別輕度組中度組重度組F 值P 值n 40 33 31 IL-17 122.45±19.34 146.69±23.69a 153.24±36.68ab 13.290＜0.001 IL-23 48.41±3.45 52.25±5.07a 69.45±5.62ab 189.300＜0.001 Eotaxin-2 272.48±51.23 287.74±55.69a 308.34±64.23ab 3.490 0.034

2.3 IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平與ABSIS 評分的相關性

經Peɑrson直線相關分析顯示：IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平與ABSIS 評分均呈正相關（R=0.758，P=0.021；R=0.569，P=0.005；R=0.727，P=0.013）。見圖1。

圖1 IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平與ABSIS 評分的相關性分析Figure 1 Correlation analysis of IL-17，IL-23，Eotaxin-2 levels and ABSIS score

2.4 聯合IL-17、IL-23、Eotaxin-2 檢測對大皰性類天皰的診斷價值

聯合IL-17、IL-23、Eotaxin-2 靈敏度（0.923）、特異度（0.943）、AUC（0.998）均高于單一指標檢測（P＜0.05）。見表3、圖2。

表3 聯合IL-17、IL-23、Eotaxin-2 檢測對大皰性類天皰的診斷價值分析Table 3 Analysis of the diagnostic value of combined IL-17，IL-23 and Eotaxin-2 detection for bullous pemphigoid

圖2 預測價值Figure 2 Predictive value

3 討論

大皰性類天皰瘡病理表現為表皮下水皰，可伴有多種炎性細胞浸潤，患者常伴有不同程度的皮膚瘙癢。對大皰性類天皰瘡患者實施有效的、早期的治療，控制患者病情，促進預后意義重大。目前，大皰性類天皰瘡發病機制尚未明確，但有學者發現多種細胞因子及嗜酸性粒細胞與免疫性疾病之間的關系錯綜復雜，T 細胞介導的免疫學說參與大皰性類天皰瘡的發病機制已被證實［8］。IL-17是Th17 細胞中最重要的細胞因子之一，大多數為CD4+T 細胞分泌，但部分IL-17 也可由嗜中性粒細胞等多數固有免疫細胞產生，其表達于肝腎、成骨細胞等多種組織中［9］。本研究發現，大皰性類天皰瘡患者血清中IL-17 表達水平較高，且隨著患者病情的加重IL-17 水平逐漸升高，考慮原因為：隨著病情的發展，機體Th 免疫系統逐漸活躍，其中Th2 細胞活化、嗜酸性粒細胞聚集，促進慢性炎癥的發生，從而導致IL-17 水平升高，最終促使皮損中水皰形成。

國外研究發現，IL-23 具有獨特的免疫調節作用，可誘導幼稚CD4+T 細胞新型Th 細胞分化，通過不同T 細胞亞群發揮作用，產生大量促炎因子IL-17，同時可通過促進多種炎癥介質的分泌和釋放而參與炎癥損傷［10-11］。既往研究顯示，IL-23 在急性感染早期機體細胞與微生物接觸幾小時內便產生，細胞因子迅速聚集于感染病灶以控制感染，若IL-23 免疫調節功能異常，會破壞大皰性類天皰瘡患者免疫耐受功能，加重病情［12-13］。本研究中，大皰性類天皰瘡患者血清IL-23 水平較對照組明顯升高，且因病情程度不同，輕度組、中度組、重度組之間表達存在明顯差異，由此認為，IL-23 介導的免疫通路可能參與了大皰性類天皰瘡致病過程，且與疾病活動性關系密切。

程秀芳等［14］報道，Eotaxin-2 能促進嗜酸性粒細胞與內皮細胞黏附，Eotaxin-2 表達水平上調會使嗜酸性粒細胞快速在炎癥部位聚集，且文章中進一步分析Eotaxin-2 與患者病情輕重的關系發現：Eotaxin-2 與疾病早期活動密切相關。而本文研究數據結果顯示：觀察組Eotaxin-2 水平顯著高于對照組，且觀察組中輕度組＜中度組＜重度組，進一步證實了上述程秀芳等學者的研究觀點。提示Eotaxin-2 可作為標志性實驗室指標來監測大皰性類天皰瘡患者病情變化，指導臨床治療，以改善患者生活質量。ABSIS 評分是評價大皰性皮膚疾病病情嚴重程度的有力工具［15］。本文研究結果發現，IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平與ABSIS評分呈正相關，證實三者表達水平可反應大皰性類天皰瘡病情的嚴重程度。進一步ROC 曲線結果 顯 示：聯 合IL-17、IL-23、Eotaxin-2 靈 敏 度（0.923）、特異度（0.943）、AUC（0.998）均高于單一指標檢測，表明加強三項指標聯合檢測能有效診斷大皰性類天皰瘡。

綜上所述，IL-17、IL-23 及Eotaxin-2 大皰性類天皰瘡發生、發展的關系密切，三者聯合檢測可為臨床診斷該疾病、判斷病情、評估預后提供更好的理論依據。