系統性紅斑狼瘡患者血清TNF-α 表達與T 淋巴細胞亞群的關系

張鐘元 劉姍姍 王凱 田怡安 陳彩云 李鞠★

系統性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種原因不明的伴有多種自身抗體及多系統損害為特征的自身免疫性疾病，其臨床表現復雜，難以治愈。患者可出現不同程度的黏膜及皮膚損害，病情嚴重者可出現狼瘡性腦病、狼瘡性腎炎、肺栓塞、心力衰竭等，預后較差［1］。研究發現，目前發現SLE 患者體內B 淋巴細胞高度活化，T 淋巴細胞數量減少，產生大量抗原抗體復合物，沉積在腎小球、皮膚、關節等部位，引起發病［2］。也有研究顯示［3］，SLE 發病與外周血T 淋巴細胞亞群功能異常及TNF-α 表達異常具有密切聯系，二者在SLE 疾病發生發展中具有重要作用。為明確二者在SLE 患者中的關系，本研究分析TNF-α 與T 淋巴細胞亞群的關系，為臨床SLE 患者病情評估提供一定參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取淮安市第一人民醫院2019 年1 月至2022年1 月收治的94 例SLE 患者（狼瘡組）及同期年齡、性別匹配的60 名健康體檢者（對照組）作為研究對象，檢測所有受試者的外周血T 淋巴細胞亞群（CD3+、CD4+、CD8+）、CD4+/CD8+及血清TNF-α 表達水平。狼瘡組男性12 例，女性82 例，年齡平均（37.31±4.17）歲。對照組男8 名，女52 名，年齡（38.27±5.64）歲。狼瘡組根據SLE 活動性指數（SLE disease activity index，SLEDAI）評分［4］，分為活動組（53 例）和非活動組（41 例），活動組男7 例，女46 例，年齡（37.11±3.26）歲；非活動組男5 例，女36 例，年齡（37.59±5.15）歲。狼瘡組與對照組、活動組與非活動組的一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05）。

納入標準：①參考2021 年美國風濕病學會（American College of Rheumatology，ACR）制定的關于SLE 診斷標準［5］，明確診斷為SLE；②年齡在18 歲以上；③參考SLEDAI 評分［4］，SLEDAI 評分≤9 判定為非活動性SLE，其余判定為活動性SLE；④患者及家屬知情同意。排除標準：①合并其他自身免疫性疾病者；②合并心、肝、肺等重要臟器功能障礙者；③妊娠期或哺乳期女性。本實驗經醫院倫理委員會批準。

1.2 指標檢測方法

抽取受試者外周靜脈血5 mL 于EDTA 抗凝管，使用北京新時代生產的北利DT5-4B 型低速臺式離心機離心（轉速3 000 r/min，半徑為10cm）10 min，分離出外周血單個核細胞，取50 μL 樣本，加入CD3+、CD4+、CD8+單克隆抗體（購自普健生物科技有限公司）20 μL，采用美國貝克曼公司生產的CytoFLEX 流式細胞儀檢測CD3+、CD4+、CD8+水平。

抽取受試者外周靜脈血5 mL，于EDTA 抗凝管，使用北京新時代生產的北利DT5-4B 型低速臺式離心機離心（轉速3 000 r/min，半徑為10 cm）10 min，取上清保存于冰箱待測，使用酶聯免疫吸附法檢測TNF-α 水平，試劑盒購自美國RD公司，所有操作嚴格按照使用說明書進行。

1.3 統計學方法

采用SPSS 22.0 進行數據分析，計數資料則采用率n（%）表示，進行χ2檢驗；計量資料以（±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，組內比較采用配對t檢驗，TNF-α 水平與T 淋巴細胞亞群的相關性采用Spearman 相關性分析，構建受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線分析TNF-α 水平對SLE 病情的評估價值，P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 狼瘡組與對照組各指標的比較

狼瘡組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于對照組，CD8+、TNF-α 高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 狼瘡組與對照組各指標的比較（±s）Table 1 Comparison of each index between the SLE group and the control group（±s）

表1 狼瘡組與對照組各指標的比較（±s）Table 1 Comparison of each index between the SLE group and the control group（±s）

組別對照組狼瘡組t 值P 值n 60 94 CD3+（%）73.02±6.71 62.56±5.04 10.354＜0.001 CD4+（%）43.96±6.22 31.02±4.62 14.769＜0.001 CD8+（%）32.51±5.57 37.62±5.17-5.804＜0.001 CD4+/CD8+1.41±0.43 0.96±0.22 9.440＜0.001 TNF-α（pg/mL）1.45±0.13 4.53±1.09-27.735＜0.001

2.2 活動組與非活動組各指標的比較

活動組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于非活動組，CD8+、TNF-α 高于非活動組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 活動組與非活動組各指標的比較（±s）Table 2 Comparison of the indicators of active vs inactive groups（±s）

表2 活動組與非活動組各指標的比較（±s）Table 2 Comparison of the indicators of active vs inactive groups（±s）

組別活動組非活動組t 值P 值n 53 41 CD3+（%）59.26±2.99 66.83±3.80-10.828＜0.001 CD4+（%）27.92±3.04 35.02±2.92-11.407＜0.001 CD8+（%）40.79±4.16 33.52±3.01 9.442＜0.001 CD4+/CD8+0.89±0.10 1.05±0.13-14.090＜0.001 TNF-α（pg/mL）4.95±0.95 3.99±1.02 4.714＜0.001

2.3 TNF-α 水平與T 淋巴細胞亞群的相關性分析

TNF-α 與CD3+、CD4+、CD4+/CD8+呈負相關，r值分別為-0.586、-0.611、-0.656（P＜0.05），TNF-α 與CD8+呈正相關，r值為0.564（P＜0.05）。

2.4 TNF-α 對SLE 病情的評估價值

構建TNF-α 評估SLE 病情嚴重程度的ROC 曲線，結果顯示TNF-α 評估活動性SLE與非活動性SLE 的曲線下面積（AUC）為0.758，95%CI（0.659～0.840），最 佳 截 點 為4.35（pg/mL），此時診斷敏感度為81.13%，特異性為65.85%。見圖1。

圖1 ROC 曲線Figure 1 ROC curve

3 討論

SLE 臨床表現復雜，疾病早期患者可出現血管功能異常，隨著病情進展，可出現腎臟、心臟等多臟器受損，患者預后不佳。目前尚未完全闡明SLE 發病機制，多數學者認為［6-7］，其發病與T 淋巴細胞亞群功能紊亂及機體TNF-α 表達水平的異常關系密切。

多數研究顯示［8-9］，在SLE 患者中TNF-α 表達水平顯著升高，在患者腎臟組織中TNF-α 表達水平更高，且與患者腎功能關系密切。研究發現，TNF-α 信號網絡紊亂是SLE 免疫病理學基礎之一，SLE 中免疫復合物刺激單核-巨噬細胞產生TNF-α，直接或通過其他促炎癥因子如IL-1、IL-6等的表達促進炎癥及繼發性組織損傷［10］。同時TNF-α 誘導的炎癥反應可能是SLE 的動脈粥樣硬化和高甘油三酯血癥的關鍵因素［11］。本課題組前期研究發現，系統性紅斑狼瘡模型小鼠表現出抑郁樣行為，腦小膠質細胞明顯激活，促炎細胞因子明顯增加。體外實驗表明TNF-α 通過上調NF-κB 信號通路和促炎細胞因子激活小膠質細胞。NF-κB 抑制劑，可有效降低TNF-α 介導的小膠質細胞炎癥信號傳導。這些結果提示TNF-α誘導的小膠質細胞活化在SLE 伴抑郁的神經炎癥中起重要作用［12］。本研究結果顯示，狼瘡組的TNF-α 表達水平高于對照組，活動組的TNF-α表達水平高于非活動組，提示TNF-α 與SLE 發病及病情嚴重程度具有一定關系，通過監測TNF-α水平對病情進行評估進而指導臨床治療具有一定可行性。

多項研究顯示［13-14］，SLE 發生發展與T 淋巴細胞亞群功能紊亂有關，T 淋巴細胞可介導B 細胞的增殖及高度活化，大量B 細胞提呈抗原，可產生大量的抗原抗體復合物及細胞因子，使機體免疫功能進一步紊亂，導致發病。T 淋巴細胞亞群根據表面CD 分子的表達不同主要分為CD3+T 細胞、CD4+T細胞及CD8+T 細胞，其中CD4+T 稱為輔助性T 細胞，其可輔助機體體液免疫及細胞免疫，反應機體免疫功能。研究顯示［15］，在SLE 患者中CD4+T 細胞出現異常凋亡，其產生的多種細胞因子通過炎癥因子及細胞接觸，可作用于靶細胞及靶器官，在SLE 患者機體損傷中具有重要作用。國外研究顯示［16］，CD4+T 細胞的數量下降通常提示SLE 患者疾病活動，預后不良。CD8+T 細胞是一種免疫抑制細胞，其可促進機體免疫抑制因子的釋放，近年來研究顯示［17］，在SLE 患者中CD8+T 細胞數量顯著升高，同時可觀察到CD4+/CD8+的降低。本研究中對SLE 患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平進行檢測，結果顯示對照組及非活動組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+高于狼瘡組及活動組，CD8+、TNF-α低于狼瘡組及活動組，提示在SLE 患者中存在明顯的T 淋巴細胞亞群功能紊亂，尤其在活動期患者中更為明顯。SLE 中T 細胞異常引起B 細胞多克隆激活，同時引起機體體液免疫異常，介導疾病的發生。本研究中對SLE 患者的TNF-α 水平及T 淋巴細胞亞群水平進行相關性分析，結果顯示TNF-α 與CD3+、CD4+、CD4+/CD8+呈負相關，TNF-α與CD8+呈正相關，提示TNF-α 水平與SLE 患者的免疫功能紊亂關系密切。進一步對TNF-α 評估SLE 患者病情嚴重程度進行分析，結果顯示，TNF-α評估活動性SLE 與非活動性SLE 的曲線下面積（AUC）為0.758，診斷敏感度為81.13%，特異性為65.85%。結果表明TNF-α 水平和狼瘡病情活動度相關，其特異度較低表明TNF-α 水平可能與狼瘡本身原發病之外的因素如器官累及、年齡、是否合并感染等因素相關。本研究表明TNF-α 和SLE 淋巴細胞亞群相關，一定程度上可以反映病情活動度，從而更好地指導臨床治療。

綜上所述，SLE 患者存在TNF-α 及T 淋巴細胞亞群表達異常，在疾病活動期患者中，異常程度更明顯，且SLE 患者中TNF-α 表達水平與T 淋巴細胞亞群水平關系密切，通過檢測TNF-α 水平，可從一定程度上評估SLE 患者疾病嚴重程度。