LncRNA MALAT1 對非小細胞肺癌患者腦轉移的預測價值

俞岑明 石佑萌 劉怡 邰國梅

復發與轉移是影響非小細胞肺癌（nonsmall cell lung cancer，NSCLC）預后不良的主要原因，腦轉移是NSCLC 發生轉移的常見部位，發生率可達25%～35%，是導致患者死亡的重要原因，早期診斷NSCLC 腦轉移對于治療與改善預后具有重要意義［1］。長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）在調節腫瘤的復發與轉移過程中發揮重要作用，LncRNA 通過調控腫瘤細胞增殖、遷移與侵襲，促進腫瘤生長與轉移［2］。LncRNA MALAT1在膀胱癌、乳腺癌、顱內動脈瘤等腫瘤中高表達，且與顱內動脈瘤血管內治療后復發有關［3］。已有報道顯示，LncRNA MALAT1發生腦轉移的患者肺癌組織中表達水平顯著高于沒有發生腦轉移患者的肺癌組織，且與患者預后有關，體外研究顯示，LncRNA MALAT1通過誘導上皮間質轉化促進肺癌的腦轉移［4］。病理學與影像學診斷NSCLC 的轉移具有一定的創傷性，血清標志物可有效避免此項缺陷［5］。本研究探討血清LncRNA MALAT1對NSCLC 患者發生腦轉移的診斷價值，以期為NSCLC 的治療提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019 年6 月至2021 年9 月南通大學附屬腫瘤醫院收治的100 例NSCLC 患者作為觀察對象，其中男58 例，女42 例，平均年齡（62.20±10.70）歲，其中發生腦轉移患者34 例（腦轉移組）與未發生腦轉移患者66 例（非腦轉移組）。納入標準：①經病理診斷為原發性NSCLC；②初次確診；③患者臨床資料完整。腦轉移診斷標準［6］：出現顱高壓癥狀如頭痛、惡心及嘔吐等，運動、感覺、視力及認知功能障礙，局灶性無力、語言缺失、注意力下降等，有一種或同時出現幾個癥狀，經頭部CT 或MRI 檢查提示腦轉移者，無癥狀者由2 名以上腫瘤專科醫生根據CT 或MRI 確認。排除標準：①合并其部位原發性惡性腫瘤患者；②合并支氣管擴張等其他呼吸系統疾病患者；③血液系統疾病及免疫系統疾病患者；④妊娠哺乳期女性。選擇同期在本院健康體檢人員50 名作為對照組，其中男28名，女22 名，平均年齡（61.50±10.20）歲。本研究通過醫院倫理委員會批準，患者簽署知情同意書。

1.2 研究方法

實時熒光定量PCR 法（Real-time quantification PCR，RT-qPCR）檢測血清LncRNA MALAT1表達：采集患者入院時空腹靜脈血5 mL，以3 500 r/min 的轉速離心10 min 后（離心半徑10 cm），分離血清-80℃保存待測，采用qRT-PCR 實驗檢測血清LncRNA MALAT1表達水平，RNA 提取試劑（R0016，上海碧云天生物科技有限公司）提取血清總RNA，分析RNA 濃度與純度后，取2 μg RNA 逆轉錄合成cDNA，再進行PCR 反應，其中逆轉錄合成試劑盒（D7168M）、SYBR Green qPCR Mix 試劑（D7260）均購自上海碧云天生物科技有限公司，LncRNA MALAT1及GAPDH 引物購自上海生工生物工程有限公司，LncRNA MALAT1上游引物（5′-3′）：GACGGAGGTTGAGATGAAGC，下游引物（5′-3′）：ATTCGGGGCTCTGTAGTCCT；GAPDH 上游引物（5′-3′）：AACGGGAAGCTTGTCATCAATGGAAA，下游引物（5′-3′）GCATCAGCAGAGGG GGCAGAG。反應結束后，以GAPDH為內參，采用2-ΔΔCt法計算LncRNA MALAT1相對表達量。

1.3 統計學分析

采用SPSS 25.0 統計分析；實驗數據符合正態分布以（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間比較采用LSD-t檢驗；計數資料使用n（%）表示，組間比較行卡方檢驗；ROC 曲線分析血清LncRNA MALAT1對NSCLC 患者發生腦轉移的預測價值；Cox 回歸模型分析影響NSCLC 患者發生腦轉移的危險因素；以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 腦轉移組與非腦轉移組NSCLC 患者臨床資料比較

腦轉移組有吸煙史、病理類型為腺癌、TNM 分期為Ⅲ+Ⅳ及有EGR突變的患者比例顯著高于非腦轉移組患者，差異有統計學意義（P＜0.05），腦轉移與非腦轉移組患者年齡、性別、腫瘤直徑比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 腦轉移與非腦轉移組NSCLC 患者臨床資料比較［n（%）］Table 1 Comparison of clinical data of NSCLC patients with brain metastases and non-brain metastases［n（%）］

2.2 對照組、腦轉移與非腦轉移NSCLC 患者血清LncRNA MALAT1 表達水平比較

與對照組比較，腦轉移組與非腦轉移組患者血清LncRNA MALAT1表達水平顯著升高，差異有統計學意義（t=30.912，、21.718，均P＜0.001）；與非腦轉移組比較，腦轉移組患者血清LncRNA MALAT1表達水平顯著升高，差異有統計學意義（t=30.912、21.718，均P＜0.001）。見表2。

表2 對照組、腦轉移與非腦轉移NSCLC 患者血清LncRNA MALAT1 表達水平比較（±s）Table 2 Comparison of serum LncRNA MALAT1 expression levels in control group，brain metastases and non-brain metastases NSCLC patients（±s）

表2 對照組、腦轉移與非腦轉移NSCLC 患者血清LncRNA MALAT1 表達水平比較（±s）Table 2 Comparison of serum LncRNA MALAT1 expression levels in control group，brain metastases and non-brain metastases NSCLC patients（±s）

注：與對照組比較，aP 均＜0.05；與非腦轉移組比較，bP＜0.05。

組別對照組非腦轉移組腦轉移組F 值P 值n 50 66 34 LncRNA MALAT1 1.01±0.15 1.97±0.32a 2.63±0.51ab 254.276 0.000

2.3 血清LncRNA MALAT1 對NSCLC 患者發生腦轉移的預測價值

血清LncRNA MALAT1預測NSCLC 患者發生腦轉移的曲線下面積為0.879（95%CI：0.826～0.921，P＜0.001），截斷值為2.28，敏感度為0.84，特異性為0.83。見圖1。

圖1 預測價值Figure 1 Predictive value

2.4 影響NSCLC 患者發生腦轉移Cox 回歸分析

以NSCLC 患者是否發生腦轉移為因變量（是=1，否=0），將表1 中有差異變量帶入Cox 回歸模型，賦值，吸煙史（有=1，無=0）、病理類型（腺癌=1，鱗癌=0）、TNM 分期（Ⅲ+Ⅳ期=1，Ⅰ+Ⅱ期=0）、EGR突變（是=1，否=0）、LncRNA MALAT1（≥2.28=1，＜2.28=0）Cox 多因素回歸分析，結果顯示，病理類型為腺癌、TNM 分期Ⅲ+Ⅳ期、EGR突變、LncRNA MALAT1≥2.28 是影響NSCLC 患者發生腦轉移的危險因素（P＜0.05）。見表3。

表3 影響NSCLC 患者發生腦轉移Cox 回歸分析Table 3 Cox regression analysis of brain metastases affecting NSCLC patients

3 討論

發生腦轉移的NSCLC 患者預后較差，尋找發生腦轉移的危險因素對于改善患者預后具有重要意義［7］。研究表明，LncRNA 的異常表達與腫瘤的發生、轉移密切相關，LncRNA 可在外周血、組織液中穩定表達，成為腫瘤早期鑒別診斷、預后評估的標志物［8］。LncRNA MALAT1與糖尿病、冠心病、肺動脈高壓、阿爾茨海默病、膿毒癥、腫瘤等多種疾病的發生發展密切相關［9］。研究證實，LncRNA MALAT1在NSCLC 細胞中表達水平升高，抑制LncRNA MALAT1表達可通過調控miR-125a-5p 及其靶基因Rab25 表達，抑制肺癌細胞的增殖，降低細胞對厄洛替尼的耐藥能力［10］。肺癌細胞中，抑制LncRNA MALAT1表達可通過調控miR-205表達，抑制肺癌細胞的增殖與遷移，還可抑制肺癌荷瘤小鼠腫瘤的生長［11］。本研究檢測NSCLC 患者血清中LncRNA MALAT1表達，結果顯示，腦轉移組與非腦轉移組患者血清LncRNA MALAT1表達水平顯著高于對照組，且腦轉移組患者血清LncRNA MALAT1表達水平顯高于非腦轉移組，提示LncRNA MALAT1高表達與NSCLC 患者發生腦轉移有關，可能成為預測NSCLC 患者發生腦轉移的標志物。已有報道顯示，外周血LncRNA MALAT1對NSCLC 有一定診斷價值，血清中LncRNA MALAT1檢測綜合診斷效能高于血漿，且在肺鱗癌中的診斷效能優于腺癌［12］。本研究通過ROC 曲線分析發現，血清LncRNA MALAT1預測NSCLC 患者發生腦轉移的曲線下面積為0.879，截斷值為2.28，敏感度為0.84，特異性為0.83，提示檢測血清LncRNA MALAT1水平在臨床上對NSCLC 患者發生腦轉移的診斷具有一定指導意義。

肺腺癌是NSCLC 患者發生腦轉移的危險因素，肺腺癌主要以浸潤式生長為主，發生轉移的可能性較大，已有研究顯示，腺癌在中樞神經系統轉移的概率較高［13］。EGFR 突變是NSCLC 患者發生腦轉移的另一個危險因素，EGFR 在調控惡性腫瘤細胞的增殖、分化等過程中發揮重要作用，NSCLC患者腫瘤組織存在EGFR 突變，且多見于女性、無吸煙史、肺腺癌患者［14］。另有研究顯示，年齡、性別、吸煙史等也與NSCLC 患者發生腦轉移有關［15］。本研究經Cox 多因素回歸分析結果顯示，病理類型為腺癌、TNM 分期Ⅲ+Ⅳ期、EGR突變是影響NSCLC 患者發生腦轉移的危險因素，與以往報道結果類似。本研究經Cox 回歸分析還顯示，LncRNA MALAT1≥2.28是影響NSCLC患者發生腦轉移的危險因素，推測其可能的原因是LncRNA MALAT1調控肺癌細胞增殖與轉移有關［16］。

綜上所述，NSCLC 發生腦轉移患者血清LncRNA MALAT1表達水平升高，是影響NSCLC 患者發生腦轉移的危險因素，可能成為預測NSCLC患者發生腦轉移的輔助標志物，具有一定臨床應用價值。