血清干擾素調(diào)節(jié)因子1對(duì)初治肺結(jié)核患者療效的影響

白璽 王萍 丁成智 白豐璽

肺結(jié)核是由于結(jié)核分支桿菌感染肺部引起的傳染性疾病，在世界衛(wèi)生組織2020 年統(tǒng)計(jì)結(jié)果中肺結(jié)核是導(dǎo)致人群死亡的十大原因之一［1-2］。我國(guó)是結(jié)核病大國(guó)，有較大的結(jié)核病患者群體，且患者普遍存在營(yíng)養(yǎng)狀況差、治療依從性低等特點(diǎn)［3］，雖然結(jié)核病宣傳和防治消耗了巨大的人力和物力，但仍有較多結(jié)核病患者在初次接受治療后出現(xiàn)復(fù)發(fā)的情況［4］，對(duì)患者預(yù)后產(chǎn)生不良影響。肺結(jié)核疾病復(fù)發(fā)受到多種因素調(diào)控和影響，干擾素作為單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的多功能蛋白質(zhì)［5］，在同種細(xì)胞上可產(chǎn)生廣譜抗菌、抗病毒效果，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、調(diào)節(jié)免疫等多個(gè)生物學(xué)過(guò)程產(chǎn)生影響［6］。干擾素調(diào)節(jié)因子-1（interferon regulatory factor-1，IRF-1）可通過(guò)激活相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路刺激機(jī)體產(chǎn)生干擾素，并進(jìn)一步調(diào)節(jié)結(jié)核菌誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡過(guò)程［7-8］，從而對(duì)肺結(jié)核患者病情產(chǎn)生影響，但對(duì)初治肺結(jié)核患者而言，IRF-1 與其抗結(jié)核療效臨床關(guān)聯(lián)尚不明確，本研究對(duì)此進(jìn)行探討，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 對(duì)象及方法

1.1 研究對(duì)象

2018 年1 月至2021 年1 月河南省胸科醫(yī)院連續(xù)收治新診斷肺結(jié)核患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡18～60 周歲。②符合肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)［9］，且為初次接受治療。③均為本地戶口，持續(xù)接受治療6 個(gè)月以上。④相關(guān)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①治療中途失訪或轉(zhuǎn)院者。②合并艾滋病、病毒性肝炎。③合并惡性腫瘤。④對(duì)治療藥物不耐受或中途更改治療方案。所有患者均接受血清中IRF-1 水平檢測(cè)，并根據(jù)結(jié)果進(jìn)行分組，研究對(duì)象均簽署知情同意書，研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

1.2 血清IRF-1 和外周血T 淋巴細(xì)胞水平檢測(cè)

所有患者均在開始治療前1 d 采集外周靜脈血標(biāo)本2 份，其中一份常規(guī)分離為血清后采用酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA）檢測(cè)血清中IRF-1 水平，試劑盒購(gòu)自上海紀(jì)寧生物公司（人干擾素調(diào)節(jié)因子-1ELISA 試劑盒，貨號(hào)：JN19646）。根據(jù)IRF-1 檢測(cè)結(jié)果，將患者平均分為高IRF-1 組和低IRF-1 組。另一份血樣使用人外周血單個(gè)核細(xì)胞分離液將其分離為單個(gè)核細(xì)胞并將細(xì)胞調(diào)至1×106個(gè)/mL 后，以流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血中CD4+、CD8+、Th17 和Treg 細(xì)胞水平，其中Th17 細(xì)胞以CD4+IL-17+標(biāo)記，Treg 細(xì)胞以CD4+IFN-y+標(biāo)記，并自動(dòng)計(jì)算得出CD4+/CD8+，所用NAVIOS 10 流式細(xì)胞儀由美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司生產(chǎn)，所有抗體均在避光條件下依次加入。

1.3 臨床評(píng)估

患者初治方案均為2HRZE/4HR 為主，其中H 為異煙肼，R 為利福平，Z 為吡嗪酰胺，E 為乙胺丁醇。所有患者均在規(guī)范治療6 個(gè)月后接受臨床療效評(píng)估，且治療期間每個(gè)月進(jìn)行1 次痰涂片和細(xì)菌培養(yǎng)，統(tǒng)計(jì)患者臨床癥狀消失、痰涂片轉(zhuǎn)陰、肺部浸潤(rùn)影消失和臨床治愈情況。臨床治愈標(biāo)準(zhǔn)：連續(xù)兩個(gè)月臨床癥狀消失、肺部浸潤(rùn)影基本吸收且至少連續(xù)3 次痰檢結(jié)果陰性［9］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 21.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用（±s）表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)；采用受試者工作特征曲線（Receiver operating characteristic，ROC）評(píng)價(jià)治療開始前IRF-1 水平對(duì)患者治療6 個(gè)月不同臨床結(jié)局的預(yù)測(cè)效能；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

高IRF-1 組和低IRF-1 組初治肺結(jié)核患者性別、年齡、戶口、體質(zhì)量指數(shù)、合并糖尿病和合并咯血情況比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩組一般資料比較［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of general information between the two groups［n（%），（±s）］

表1 兩組一般資料比較［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of general information between the two groups［n（%），（±s）］

分組高IRF-1 組低IRF-1 組t/χ2值P 值n 55 55性別（男/女）30/25（54.55/45.45）32/23（58.18/41.82）0.148 0.701年齡（歲）40.86±4.55 40.62±4.50 0.278 0.781戶口（農(nóng)村/城市）15/40（27.27/72.73）13/42（23.64/76.36）0.192 0.662體質(zhì)量指數(shù)（kg/m2）23.53±3.28 23.70±3.31 0.271 0.787合并糖尿病（例）6（10.91）5（9.09）0.101 0.751合并咯血（例）10（18.18）12（21.82）0.227 0.634

2.2 兩組細(xì)胞免疫功能和IRF-1 水平比較

高IRF-1組CD4+、CD4+/CD8+、Treg低于低IRF-1組，CD8+、Th17 水平高于高IRF-1 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組細(xì)胞免疫功能和IRF-1 水平比較（±s）Table 2 Comparison of cellular immune function and IRF-1 levels between the two groups（±s）

表2 兩組細(xì)胞免疫功能和IRF-1 水平比較（±s）Table 2 Comparison of cellular immune function and IRF-1 levels between the two groups（±s）

分組高IRF-1 組低IRF-1 組t 值P 值n 55 55 CD4+（%）32.34±3.40 36.53±3.51 6.359＜0.001 CD8+（%）28.40±3.28 24.67±3.10 6.129＜0.001 CD4+/CD8+1.14±0.35 1.48±0.38 4.881＜0.001 Th17（%）8.34±2.01 6.97±1.88 3.692＜0.001 Treg（%）4.34±1.28 5.53±1.32 4.800＜0.001 IRF-1（ng/mL）64.53±18.64 46.34±13.72 5.829＜0.001

2.3 兩組治療6 個(gè)月后臨床結(jié)局比較

高IRF-1 組規(guī)范抗結(jié)核治療6 個(gè)月后臨床癥狀消失率、痰涂片轉(zhuǎn)陰率和肺部浸潤(rùn)影消失率低于低IRF-1 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但兩組臨床治愈率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

表3 兩組治療6 個(gè)月后臨床結(jié)局比較［n（%）］Table 3 Comparison of clinical outcomes between the two groups after 6 months of treatment［n（%）］

2.4 開始治療前IRF-1 水平對(duì)初治肺結(jié)核患者治療6 個(gè)月不同臨床結(jié)局的預(yù)測(cè)效能

ROC 分析結(jié)果顯示，開始治療前IRF-1 水平預(yù)測(cè)初治肺結(jié)核患者治療6 個(gè)月臨床癥狀消失、痰涂片轉(zhuǎn)陰和肺部浸潤(rùn)影消失曲線下面積分別為0.731、0.792 和0.775，截?cái)嘀捣謩e為54.34、56.73 和53.86。見表4。

表4 開始治療前IRF-1 水平對(duì)初治肺結(jié)核患者治療6 個(gè)月不同臨床結(jié)局的預(yù)測(cè)效能Table 4 Predictive efficacy of IRF-1 level before starting treatment on different clinical outcomes of 6-month treatment-na?ve pulmonary tuberculosis patients

3 討論

隨著卡介苗接種的普及、公共衛(wèi)生措施的推廣以及各種標(biāo)準(zhǔn)化治療手段的完善，肺結(jié)核發(fā)病率在本世紀(jì)已明顯改善［10-11］。近年來(lái)隨著病原學(xué)、影像學(xué)、分子生物學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展，肺結(jié)核診斷技術(shù)有很大提高，但由于TB 清除較為困難，服藥周期往往較長(zhǎng)，在長(zhǎng)時(shí)間的治療過(guò)程中出現(xiàn)毒副作用風(fēng)險(xiǎn)也逐漸加大［12］，為了提高患者的治療和生存體驗(yàn)，有必要對(duì)肺結(jié)核患者的發(fā)病因素進(jìn)行調(diào)查。

T 淋巴細(xì)胞在機(jī)體免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，而免疫功能損傷是患者肺部出現(xiàn)結(jié)核重要原因［13］，研究［14-15］表明，IFN-γ 可誘導(dǎo)IRF-1 表達(dá)，隨后在免疫細(xì)胞的發(fā)育及活化過(guò)程中起重要作用。此外，另有研究［16-17］表明IRF-1 在MHC I 類分子的誘導(dǎo)性表達(dá)及凋亡中起重要作用。CD4+、CD8+水平以及CD4+/CD8+比值可以有效反映機(jī)體免疫功能，其中CD4+細(xì)胞則經(jīng)由分泌各種細(xì)胞因子來(lái)介導(dǎo)機(jī)體免疫反應(yīng)，可以發(fā)揮誘導(dǎo)體液免疫，幫助促進(jìn)T 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為效應(yīng)細(xì)胞作用［18］；CD8+細(xì)胞在機(jī)體中通過(guò)抑制B 細(xì)胞抗體生成以及T 淋巴細(xì)胞活性發(fā)揮抑制免疫功能作用；CD4+與CD8+細(xì)胞在機(jī)體中保持平衡以維持正常機(jī)體免疫狀態(tài)，CD4+/CD8+比值則有效反映了這種平衡狀態(tài)［19］。此外，Th17/Treg 免疫細(xì)胞軸及其釋放細(xì)胞因子在機(jī)體感染及抗感染過(guò)程中免疫作用發(fā)揮重要作用，Th17介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和下游細(xì)胞因子主要發(fā)揮促炎功能［20］，而Treg 介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和下游細(xì)胞因子則主要發(fā)揮抑炎功能［21］。本研究發(fā)現(xiàn)高IRF-1 組CD4+、CD4+/CD8+、Treg 低于低IRF-1 組，CD8+、Th17 水平高于高IRF-1 組，機(jī)體T 淋巴細(xì)胞亞群水平以及CD4+/CD8+比值水平變化顯示機(jī)體成熟T 淋巴細(xì)胞數(shù)量減少，CD4+細(xì)胞免疫誘導(dǎo)作用減弱，CD8+細(xì)胞免疫抑制作用增強(qiáng)，機(jī)體免疫平衡被打破，免疫功能減弱。同時(shí)對(duì)肺結(jié)核患者而言，促炎反應(yīng)失調(diào)可能是病原發(fā)揮免疫逃逸的重要機(jī)制，Th17 細(xì)胞促炎功能受損導(dǎo)致機(jī)體對(duì)結(jié)核桿菌的清除能力下降。

綜上所述，血清IRF-1 水平可反映初治肺結(jié)核患者T 細(xì)胞免疫功能，且與患者規(guī)律治療6 個(gè)月臨床療效有一定關(guān)聯(lián)。