肋柱花的研究進(jìn)展

劉學(xué)良，石春蘭，王永晶，祁彥凱，陳 鵬，年永琪，牛貴姍，汪永明，劉海青

(青海省藥品審評(píng)核查中心，青海 西寧 810007)

肋柱花(蒙文名：哈比日根-地格達(dá)，亦稱(chēng)特木爾-地格達(dá))為龍膽科植物肋柱花(Lomatogoniumcarinthiacum(L.)Fries ex Nym.)的全草，現(xiàn)收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)蒙藥分冊(cè)。蒙醫(yī)認(rèn)為肋柱花味苦，性寒、鈍、糙、輕、燥；具有平息“協(xié)日”、清熱、健胃、愈傷的功效。蒙醫(yī)將其以“地格達(dá)”入藥，用于“協(xié)日”熱、瘟疫、流感、傷寒、中暑頭熱、肝膽熱、黃疸、胃“協(xié)日”、傷熱等[1-2]，也是蒙醫(yī)治療肝膽疾病的主要傳統(tǒng)藥物。同時(shí)，肋柱花也作為藏藥“蒂達(dá)”(藏茵陳)的來(lái)源之一，被藏醫(yī)用于治療肝膽系統(tǒng)疾病[3]，臨床療效顯著。目前，人們對(duì)肋柱花的研究較多，本文根據(jù)近30年的研究文獻(xiàn)，對(duì)其化學(xué)成分分離鑒定、質(zhì)量控制、藥理研究等方面進(jìn)行了系統(tǒng)綜述，為今后深入研究、開(kāi)發(fā)、利用肋柱花提供參考。

1 化學(xué)成分研究

2 質(zhì)量控制研究

2.1 鑒別

王振旺等[11]、陳常蓮等[12]對(duì)肋柱花的粉末及莖的橫切片進(jìn)行顯微鑒別研究，觀(guān)察到了不定式氣孔、花粉粒、 非腺毛、螺紋導(dǎo)管、纖維；在莖橫切片均可見(jiàn)角質(zhì)層、表皮、皮層、韌皮部、木質(zhì)部和髓部；后者還對(duì)葉橫切面進(jìn)行了研究。沙日娜[13]也對(duì)肋柱花莖、葉橫切面進(jìn)行了研究，用理化顯色反應(yīng)對(duì)黃酮類(lèi)成分進(jìn)行了鑒別。巴根那等[14]采用薄層色譜法建立了肋柱花中木犀草素、獐牙菜苦苷的定性鑒別方法。白翠蘭等[15]分別取肋柱花全草、花、葉、根，采用薄層色譜法建立了熊果酸的定性鑒別方法。研究結(jié)果穩(wěn)定可靠，操作簡(jiǎn)便，具有專(zhuān)屬性，可用于肋柱花的的定性鑒別。

2.2 含量測(cè)定

肋柱花中有效成分、指標(biāo)性成分的含量測(cè)定，主要集中在獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、當(dāng)藥黃素、當(dāng)藥醇苷、苦龍苷、木犀草素、異葒草苷、芹菜素、鹽酸小檗堿等成分。巴根那等[14]采用HPLC法以甲醇-水(25∶75)為流動(dòng)相，Diam onsil C18色譜柱( 250 mm×4.6 mm，5 μm)，檢測(cè)波長(zhǎng)為237 nm，柱溫為50 ℃，測(cè)定橢圓葉花錨中獐牙菜苦苷的含量，獐牙菜苦苷對(duì)照品進(jìn)樣量在 0.313～1.563 μg范圍內(nèi)具有良好的線(xiàn)性關(guān)系，回收率為99.50%，RSD為0.92%。席海山等[16]采用HPLC法以乙腈-0.34%磷酸二氫鉀溶液(30∶70)為流動(dòng)相，Xterra色譜柱，檢測(cè)波為345 nm，柱溫為25 ℃，測(cè)定肋柱花中鹽酸小檗堿的含量，鹽酸小檗堿在6.25～50 μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線(xiàn)性關(guān)系，平均回收率為97.7%，RSD為0.94%。包同力嘎[17]、王秀梅等[18]通過(guò)對(duì)提取時(shí)間、流動(dòng)相等條件進(jìn)行考察，采用HPLC法，分別以甲醇-0.1%磷酸溶液( 25∶75)、甲醇-水(25∶75)為流動(dòng)相，色譜柱為Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，檢測(cè)波長(zhǎng)為238 nm、237 nm，柱溫為25 ℃、50 ℃，測(cè)定肋柱花中獐牙菜苦苷的含量；后者測(cè)定的4批不同產(chǎn)地樣品中獐牙菜苦苷含量范圍為1.493%～10.954%，差異較大。張召華等[19]采用HPLC法以甲醇-0.04%磷酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，色譜柱為Kromasil-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，柱溫為30 ℃，測(cè)定肋柱花中當(dāng)藥黃素、當(dāng)藥醇苷、苦龍苷的含量，獐牙菜苦苷在0.675 0～4.050 0 μg、0.005 5～0.330 0 μg、0.027 5～0.165 0 μg范圍內(nèi)具有良好的線(xiàn)性關(guān)系，平均回收率分別為99.90%、99.15%、99.88%，RSD分別為0.42%、0.42%、0.11%。王秀梅等[20]采用HPLC法以甲醇-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，色譜柱為Dia-monsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，檢測(cè)波長(zhǎng)為350 nm，柱溫為 35 ℃，測(cè)定肋柱花中木犀草素的含量，木犀草素在0.052～ 0.312 μg范圍內(nèi)具有良好的線(xiàn)性關(guān)系，平均回收率為98.13%，RSD為1.04%。王振旺等[21]采用HPLC法以甲醇-0.4%磷酸溶液(55∶45)為流動(dòng)相，色譜柱為Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，檢測(cè)波長(zhǎng)為237 nm，柱溫為25 ℃，測(cè)定肋柱花中獐牙菜苦苷、當(dāng)藥黃素的含量。獐牙菜苦苷、當(dāng)藥黃素分別在0.27～5.40 mg、0.165～3.30 mg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線(xiàn)性關(guān)系，加樣回收率分別為 98.49%、97.35%，RSD分別為1.06%、1.45%。丁文雅等[22]采用HPLC法以乙腈-0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，色譜柱為L(zhǎng)ichrospher C18，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，柱溫為28 ℃，測(cè)定肋柱花等7種龍膽科藥材中龍膽苦苷的含量，結(jié)果顯示，龍膽苦苷在0.26～26.12 μg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線(xiàn)性關(guān)系，肋柱花中龍膽苦苷含量為0.45%，低于其他藥材。呂穎等[23]采用HPLC法以甲醇-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，色譜柱為Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，檢測(cè)波長(zhǎng)為237 nm，柱溫為25 ℃，測(cè)定肋柱花等3種“地格達(dá)”類(lèi)蒙藥材中獐牙菜苦苷、當(dāng)藥黃素的含量，含量分別在0.27～5.40 mg、0.16～3.30 mg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線(xiàn)性關(guān)系，加樣回收率分別為 98.49%、97.35%，RSD分別為1.06%、1.45%。研究認(rèn)為三種藥材中因種類(lèi)和產(chǎn)地不同而差異較大，臨床用藥需斟情使用。孫興姣等[24]采用HPLC法對(duì)15批不同產(chǎn)地的肋柱花進(jìn)行指紋圖譜研究，色譜柱為YMC C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈-0.4%磷酸水-甲醇，梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，柱溫30 ℃，共確定15個(gè)共有峰，指認(rèn)獐牙菜苦苷、 異葒草苷、當(dāng)藥黃素、芹菜素、木犀草素5個(gè)共有峰，15批肋柱花與對(duì)照指紋圖譜的相似度在0.881～0.997之間，為肋柱花質(zhì)量控制提供了科學(xué)依據(jù)。

2.3 微量元素測(cè)定

袁元園等[25]采用硝酸-微波消解肋柱花樣品，結(jié)合ICP-OES方法檢測(cè)微量元素，檢出18種礦質(zhì)元素，結(jié)果顯示肋柱花中鈣、鎂、鐵元素含量較高，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)在0.999 0～1.000 0，檢出限低于0.004 0 mg·kg-1，各元素加標(biāo)回收率在88%～106%，其中12種元素在95%～104%。肋柱花中銅元素含量低于相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，鎘、砷、鉛含量均高于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，認(rèn)為部分重金屬元素含量超標(biāo)的原因可能與藥材采集地土壤生態(tài)環(huán)境的影響有關(guān)。該研究?jī)H對(duì)1份樣品進(jìn)行了測(cè)定，樣品不具有代表性，但其測(cè)定方法值得借鑒。

3 藥理研究

3.1 保肝作用

包明蘭等[26]以 CCl4致體外肝細(xì)胞損傷模型為研究對(duì)象，觀(guān)察肋柱花水提物、含肋柱花血清、獐牙菜苦苷對(duì)損傷的體外肝細(xì)胞保護(hù)作用。結(jié)果顯示，隨藥物濃度增加，Hela細(xì)胞的抑制作用增強(qiáng)、增殖活力下降；在安全濃度下部分實(shí)驗(yàn)藥物表現(xiàn)出不同程度的抗CCl4所致體外肝細(xì)胞損傷作用。同時(shí)研究證明，肋柱花抗急性肝損傷的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，除了獐牙菜苦苷以外，還與其他體內(nèi)移行成分有關(guān)，但有待進(jìn)一步研究。包明蘭等[27]另以CCl4和D-GlaN誘導(dǎo)小鼠急性肝損模型為研究對(duì)象，給藥后通過(guò)檢測(cè)比較正常組、2個(gè)模型組、陽(yáng)性對(duì)照組等小鼠血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶活性及膽堿酯酶的含量，計(jì)算肝臟指數(shù)，對(duì)肝組織病理形態(tài)進(jìn)行觀(guān)察并評(píng)分。研究結(jié)果表明，肋柱花水提物對(duì)CCl4和D-GlaN致小鼠急性肝損傷有一定保護(hù)作用。白梅榮等[28]將肋柱花粉劑作用于HepG2.2.15細(xì)胞系，通過(guò)測(cè)定樣品對(duì)上述細(xì)胞的毒性，檢測(cè)細(xì)胞上清中HBsAg、HBeAg的變化，同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞與其上清中總 HBVDNA含量。研究結(jié)果顯示，肋柱花對(duì)該細(xì)胞毒性較低，對(duì)該細(xì)內(nèi) HBVDNA拷貝數(shù)有一定的抑制作用，對(duì)該細(xì)胞分泌HBsAg、HBeAg無(wú)抑制作用。認(rèn)為肋柱花在體外具有抗乙肝病毒作用，其機(jī)制可能是通過(guò)抑制HBVDNA、誘導(dǎo)感染乙肝病毒的 HepG2.2.15細(xì)胞凋亡，而發(fā)揮抗乙肝病毒活性。

3.2 抗菌作用

孫建軍等[29]先后用75%乙醇和水提取肋柱花藥材，將提取液濃縮成浸膏，再依次用不同極性的溶劑(石油醚、乙酸乙酯、正丁醇)分別萃取得到不同部位，加水溶解后，以平皿鋼管法測(cè)定肋柱花不同部位對(duì)金黃色葡萄球菌等6種菌的抑菌活性都較強(qiáng)。結(jié)果顯示，乙酸乙酯萃取部位對(duì)金黃色葡萄球菌等6種菌株具有較強(qiáng)抑菌作用。

4 討論

肋柱花的藥效顯著，在蒙醫(yī)、藏醫(yī)臨床應(yīng)用較為廣泛，但若無(wú)合適的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)來(lái)控制其質(zhì)量，則難以保證其有效性和安全性。本文在結(jié)合前期肋柱花研究的基礎(chǔ)上，對(duì)其研究現(xiàn)狀與進(jìn)展進(jìn)行總結(jié)，旨在為肋柱花及其制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)量控制研究提供參考，探明肋柱花的藥效與物質(zhì)基礎(chǔ)的關(guān)系，建立完備的質(zhì)量控制體系。

5 建議