貴州地區(qū)581 例男性人乳頭瘤病毒疑似患者感染狀況及基因型別分析

耿見忠

貴州安康醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，貴州貴陽(yáng) 550016

人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）屬乳頭瘤病毒科，是一種通過(guò)直接或間接接觸污染物品或性傳播感染的人類雙鏈脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）病毒，不但具有宿主特異性，且具有組織特異性，能通過(guò)感染人類的皮膚及黏膜上皮細(xì)胞，引起人類皮膚的各種乳頭狀瘤或疣和生殖道上皮增生性損傷。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有一百多種基因型[1]，其中感染人類生殖道及肛門的人乳頭瘤病毒可根據(jù)基因型別、致病力大小或致癌危險(xiǎn)性大小分為低危型HPV 和高危型HPV。持續(xù)性的高危型HPV 感染是男性和女性感染相關(guān)癌癥的主要原因[2]。低危型HPV 感染與尖銳濕疣或低度鱗狀上皮內(nèi)病變等良性病變相關(guān)[3]。由于HPV 與宮頸癌的相關(guān)性，關(guān)于HPV 感染與女性生殖疾病的關(guān)系有大量報(bào)道，而針對(duì)男性HPV 感染流行情況的關(guān)注較少。大多數(shù)HPV 感染患者無(wú)臨床癥狀或表現(xiàn)為亞臨床感染狀態(tài)，男性成為HPV 重要的傳染源。本研究回顧性分析581 例男性的HPV 基因分型，為貴州地區(qū)男性預(yù)防治療HPV 感染及分析其亞型分布情況提供科學(xué)依據(jù)，也為國(guó)內(nèi)HPV 疫苗研制提供數(shù)據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2016 年1 月至2020 年4 月送檢至貴州安康醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心的581 例疑似尖銳濕疣男性患者樣本，患者來(lái)自貴州省不同地區(qū)的48 家醫(yī)院性或皮膚門診等科室，按照不同年齡分為五組：年齡＜21 歲61例（10.50%），21～＜31 歲247 例（42.51%），31～＜41 歲154 例（26.51%），41～＜51 歲84 例（14.46%），≥51歲35 例（6.02%）。所有送檢樣本均由臨床醫(yī)生采集，患者自愿接受HPV23 分型檢測(cè)，未排除女方因素所引起的HPV 感染。本研究經(jīng)貴州安康醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)：[2021]L001）。

1.2 儀器和試劑

Hema9600 基因擴(kuò)增儀由珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司提供；亞能生物技術(shù)（深圳）有限公司提供的人乳頭瘤病毒基因分型（23 型）檢測(cè)試劑盒，該試劑盒同時(shí)檢測(cè)23 種HPV 亞型，包括18 種高危型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83；5 種低危型：6、11、42、43、81。

1.3 方法

1.3.1 HPV DNA 提取 充分?jǐn)噭?dòng)擠壓宮頸刷，將宮頸刷上的脫落細(xì)胞洗脫下來(lái)，然后將1 ml 含有脫落細(xì)胞的保存液轉(zhuǎn)移到1.5 ml 離心管中。以轉(zhuǎn)速13 000 r/min、離心半徑8.5 cm 離心10 min。棄上清，保留管底細(xì)胞，加入50 μl 裂解液懸浮沉淀，沸水浴加熱10 min 后，取出離心管，置于高速離心機(jī)中以轉(zhuǎn)速13 000 r/min、離心半徑8.5 cm 離心10 min，上清即為標(biāo)本DNA 溶液。

1.3.2 HPV DNA 擴(kuò)增及雜交 取DNA 提取物上清液5 μl，陰性質(zhì)控品和陽(yáng)性質(zhì)控品同步處理，反應(yīng)總體系為25 μl。PCR 反應(yīng)條件：50℃15 min；95℃10 min；94℃30 s，42℃90 s，72℃30 s，共40 個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸5 min。擴(kuò)增完成后95℃變性10 min，將變性產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至全自動(dòng)核酸分子雜交儀上進(jìn)行雜交、孵育和顯色。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用率（）表示，多組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher 精確概率法，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，組間兩兩比較以P＜0.005 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV 檢測(cè)結(jié)果

581 例送檢樣本中有445 例HPV 陽(yáng)性，總感染陽(yáng)性率為76.59%（445/581），其中單一低危型HPV 感染陽(yáng)性率為23.41%（136/581）；單一高危型HPV 感染陽(yáng)性率為6.37%（37/581）；高危低危混合型HPV 同時(shí)感染陽(yáng)性率39.59%（230/581），占整個(gè)檢出陽(yáng)性樣本的51.69%。低危型HPV 多重感染陽(yáng)性率和高危型HPV多重感染陽(yáng)性率分別3.44%（20/581）、3.79%（32/581）（表1）。

表1 HPV 感染分布情況

2.2 HPV 感染的基因亞型分析

445 例感染者23 種HPV 亞型均被檢出，檢出率前五位HPV 亞型依次是HPV6 亞型33.91%（197/581）、HPV11 亞型32.53%（189/581）、HPV52 亞型12.91%（75/581）、HPV16 亞型10.84%（63/581）、HPV55 亞型9.47%（55/581）（表2）。

表2 23 種HPV 亞型檢出分布情況

2.3 不同年齡組HPV 亞型感染情況

不同年齡組的單一感染陽(yáng)性率、混合感染陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；＜21 歲年齡組的單一感染陽(yáng)性率低于21～＜31 歲年齡組、31～＜41歲年齡組，混合感染陽(yáng)性率高于31～＜41 歲年齡組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.005）。不同年齡組的HPV 感染陽(yáng)性率、低危感染陽(yáng)性率及高危感染陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表3）。

表3 不同年齡組HPV 感染類型分布情況[n（%）]

2.4 不同年齡組主要HPV 亞型分布情況

不同年齡組的HPV11 型、HPV16 型感染陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；各年齡組的HPV16 型感染陽(yáng)性率兩兩比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.005），其中＜21 歲年齡組和31～＜41 歲年齡組及41～＜51 歲年齡組的HPV16 型感染陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.683、7.410，P=0.006、0.006）；21～＜31 歲年齡組的HPV11 型感染陽(yáng)性率高于31～＜41 歲年齡組及41～＜51歲年齡組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.005）。各年齡段的HPV6 型感染陽(yáng)性率、HPV52 型感染患者陽(yáng)性率及HPV81 型感染陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表4）。

表4 不同年齡組主要HPV 亞型分布情況[n（%）]

3 討論

男性HPV 感染除引起尖銳濕疣外，還可引起男性泌尿系統(tǒng)及其他系統(tǒng)腫瘤，如部分口腔癌及肛門癌、陰莖癌等[4]。有文獻(xiàn)報(bào)道男性HPV 感染可影響男性精液質(zhì)量，導(dǎo)致男性特發(fā)性不育等[5]。由于不同人群和地域HPV 感染分布比較復(fù)雜，本研究采用PCR 擴(kuò)增及反向斑點(diǎn)雜交技術(shù)進(jìn)行HPV23 基因分型檢測(cè)，其中檢測(cè)18 種高危型分別為HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、82，5種低危型HPV6、11、42、43、81，對(duì)貴州省581 例男性疑似尖銳濕疣患者皮損拭子或組織進(jìn)行基因分型檢測(cè)和分析。

本研究中，581 例男性患者HPV 陽(yáng)性檢出率為76.59%（445/581），與黃澤棋等[6]報(bào)道佛山地區(qū)陽(yáng)性率77.6%（388/500）基本一致，高于張永樂(lè)等[7]報(bào)道浙江地區(qū)陽(yáng)性率39.18%（228/582）、姜玲波等[8]報(bào)道山東省地區(qū)57.3%（1621/2 830）及袁利群等[9]湖南長(zhǎng)沙地區(qū)23.23%（115/495）。HPV 陽(yáng)性檢出率在不同地域存在差異性，主要原因可能與不同的樣本類型有關(guān)，另外本研究只檢測(cè)常見的23 種亞型，而HPV 亞型數(shù)量有100 多種，取材樣本量少、未能取到足夠量的樣本等均可導(dǎo)致地域分布差異。對(duì)445 例陽(yáng)性患者的感染類型進(jìn)行分析，感染類型以低高危型混合感染檢出為主，感染陽(yáng)性率為39.59%（230/581），略低于戴永剛等[10]報(bào)道的單一感染43.33%（116/269），與張永樂(lè)等[7]報(bào)道的8.61%（50/582）、程連娜等[11]報(bào)道的5.33%（13/244）有較大差異。單一感染（包括單一低危型和單一高危型）感染陽(yáng)性率為29.78%，與程連娜等[11]報(bào)道的31.15%（76/244）基本一致，低于鐘文英等[12]報(bào)道的62.46%（441/706），提示貴州地區(qū)男性HPV 感主要混合感染為主，建議同時(shí)檢測(cè)高危型和低危型，減少漏檢。

貴州地區(qū)男性HPV 檢出率較高的7 種HPV 亞型分別是HPV 6、11、52、16、81、59、42 型，與國(guó)內(nèi)其他地區(qū)[7，13-14]報(bào)道的男性感染率較高的7 種HPV 亞型不一致，對(duì)HPV 感染各亞型進(jìn)行分析，其中低危型依次為：HPV6 型、HPV11 型、HPV81 型。其中HPV6/11 陽(yáng)性率為66.44%（386/581），高于張永樂(lè)等[7]報(bào)道的23.02%（138/582）；低于余雪姣等[15]關(guān)于衢州地域男性尖銳濕疣患者的HPV6/11 陽(yáng)性率81.09%（459/566），雖然不同地區(qū)之間陽(yáng)性率有差異，但男性HPV 感染亞型均以HPV6 和HPV11 感染為主。高危HPV 分別為HPV16型、HPV52 型、HPV59 型。高危型與貴州地區(qū)女性HPV感染亞型比較[16-17]分析，HPV16、52 型排名一致，提示男性HPV 感染與女性感染存在一定關(guān)聯(lián)，但由于本研究未排除女方因素所引起的HPV 感染，其關(guān)聯(lián)性及感染因素有待進(jìn)一步研究。據(jù)報(bào)道四價(jià)疫苗（HPV6/11/16/18 型）可預(yù)防90%的外陰部尖銳濕疣[18]。九價(jià)疫苗（HPVV6/11/16/18/31/33/45/52/58）早在2016年納入美國(guó)國(guó)家免疫規(guī)劃，能減少女性宮頸癌發(fā)病率90%以上[19]，男性接種疫苗可以進(jìn)一步阻斷HPV 的傳播。但國(guó)內(nèi)對(duì)男性HPV 疫苗關(guān)注較少，本研究為男性HPV 感染提供流行病材料。

本研究中按照5 個(gè)年齡段進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各年齡段的HPV 感染陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但是21～＜41 歲的感染率略高于其他年齡段，與國(guó)內(nèi)報(bào)道[4，6-7，20-22]基本一致，與該年齡段性活躍、機(jī)體免疫狀態(tài)等因素有關(guān)[23]。各年齡段單一感染和混合感染陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中＜21 歲年齡組的混合感染陽(yáng)性率（38/61）最高，提示低年齡組更容易發(fā)生混合感染。對(duì)各年齡段主要HPV 亞型分布情況進(jìn)行分析，各年齡段的HPV11 型及HPV16 型感染陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中＜20 歲和21～＜31 歲年齡組高于其他年齡組，提示低年齡段更容易感染HPV11 型及HPV16 型，其原因有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，貴州地區(qū)男性疑似尖銳濕疣患者HPV 感染以低危感染為主，以多重感染和單一低危感染為主要感染類型；HPV 感染主要以低危6、11 型為主，高危HPV 以52、16 和59 型為主。本研究分析本地區(qū)男性HPV 感染狀況及基因分型，加強(qiáng)本地區(qū)HPV 的篩查工作，為HPV 疫苗提供一定流行病學(xué)依據(jù)，為男性自身相關(guān)疾病的防治提供指導(dǎo)性意義。