貴港地區男女珠蛋白生成障礙性貧血基因型特點與血液學表型分析

李 騰，李 燕，郭 靜，江梅平，譚超莉，黃家亮

貴港市婦幼保健院遺傳實驗室，廣西貴港 537100

珠蛋白生成障礙性貧血(原名地中海貧血，簡稱地貧)是人類珠蛋白基因遺傳缺陷所致的慢性溶血性貧血，是由于珠蛋白基因的缺陷或點突變使血紅蛋白(Hb)中的珠蛋白肽鏈有一種或多種合成減少或不能合成，導致紅細胞壽命縮短的遺傳性溶血性貧血[1]。地貧是一組嚴重威脅人類健康的遺傳性血液病，目前全世界尚缺乏有效的治療方法，阻斷患兒出生、減少遺傳病患的數量成為當下最有效的預防措施。因此，研究地貧遺傳特點和分布情況對開展有效的預防有重要作用。本研究收集廣西貴港地區38 625例來本院行地貧基因檢測的成年男女靜脈全血標本，對貴港地區的常見地貧基因型分布情況和血液學特點進行分析。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年1月至2021年7月貴港地區38 625例來本院做地貧基因檢測的成年男女作為研究對象，其中男18 684例，女19 941例。

1.2儀器與試劑 BC6800血液分析儀及配套試劑；法國希比亞Sebia 2毛細管電泳儀；廈門至善Lab-Aid 824核酸提取儀及配套試劑；美國ABI9700 PCR擴增儀；深圳益生堂生物有限公司缺失型α試劑；亞能生物技術有限公司非缺失型α、β試劑。

1.3方法

1.3.1血液常規檢測及Hb電泳 取2 mL 乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝靜脈全血進行血常規及Hb電泳以檢測各項指標。

1.3.2常見的地貧基因檢測 取200 μL EDTA-K2抗凝靜脈全血進行核酸提取，取提取后的DNA標本4 μL于缺失型和非缺失型試劑中，采用ABI7900擴增后，采用跨越斷裂點的PCR(Gap-PCR)結合瓊脂糖凝膠電泳檢測4種常見的缺失性基因( --SEA、-α3.7、-α4.2、--THAI)；采用單管多重PCR-反向斑點雜交(PCR-RDB)檢測3種α-地貧點突變基因(αCSα、αQSα、αWSα)和我國常見的17種β-地貧點突變基因(CD41-42、βE、IVS-Ⅱ-654、CD71-72、CD31、CD43、-32、CD27-28、-29、-30、CD14-15、IntM、IVS-Ⅰ-5、Cap、IVS-Ⅰ-1)檢測。

2 結 果

2.1貴港地區α、β-地貧基因分布情況 貴港地區男女均以α-地貧基因為主，見表1。在α-地貧中，男女檢出率最高的前4位基因型均是 --SEA/αα、-α3.7/αα、-α4.2/αα、αCSα/αα，且均以 --SEA/αα為主，見表2。在β-地貧中，男女檢出率最高的前4位基因型均是β41-42M/βN、β17M/βN、β28M/βN、β654M/βN，且均以β41-42M/βN為主，見表3。在αβ-復合型地貧中，男女檢出率最高的前4位基因型均是 --SEA/αα合并β41-42M/βN、-α3.7/αα合并β41-42M/βN、 --SEA/αα合并β17M/βN、 --SEA/αα合并β28M/βN，且均以 --SEA/αα合并β41-42M/βN為主，見表4。

表1 α、β-地貧基因檢出率

表2 男女α-地貧前6位基因型分布情況

表3 男女β-地貧前6位基因型分布情況

表4 男女αβ-復合型地貧前四位基因型分布情況

2.2α、β-地貧男女Hb、MCV、MCH、HbA2對比分析 在α-地貧中，靜止型和輕型男女的Hb、MCV、MCH差異有統計學意義(P<0.05)，靜止型男女HbA2差異無統計學意義(P>0.05)，見表5、6。中間型和重型只有男女Hb的差異有統計學意義(P<0.05)，見表7、8。在β-地貧中，β0雜合和β+雜合只有Hb男女血液學表型的差異有統計學意義(P<0.05)，見表9、10。

表5 α靜止型男女性血常規及電泳結果

表6 α輕型男女性血常規及電泳結果

表7 α中間型男女性血常規及電泳

表8 --SEA/αCSα重型男女性血常規及電泳結果

表9 β0雜合男女血常規及電泳結果

表10 β+雜合男女血常規及電泳結果

3 討 論

通過地貧基因攜帶率分析，本研究發現貴港地區α-地貧的檢出率(43.99%)遠大于β-地貧檢出率(19.27%)，與廣西[2]、廣東[3]地區α-地貧陽性率大于β-地貧陽性率一致，而與何建維等[4]報道的重慶地區β-地貧陽性率大于α-地貧陽性率不一致。

從α-地貧基因類型分析，廣西貴港地區男女α-地貧基因類型主要為 --SEA/αα、-α3.7/αα、-α4.2/αα，檢出率分別為25.14%、6.94%、3.57%占據α-地貧的前3位，且以 --SEA/αα為主。這與重慶[5]、貴陽[6]、福建[7]地區的α-地貧基因構成相同，同時與廣東[8]、廣西[2]地區同樣一致，但與莫亞虹等[9]報道海南地區育齡夫婦常見的α-地貧基因為-α3.7/αα、 --SEA/αα的結果不一致。這表明α-地貧基因存在地域性差異，但整體差異性不大。

從β-地貧基因類型分析，貴港地區男女β-地貧基因類型居前6位的分別為CD41-42(-TCTT)、CD17(A→T)、IVS-Ⅱ-654(C→T)、-28(A→G)、CD71-72(+A)、βE，檢出率分別為9.66%、3.92%、2.52%、1.24%、0.88%、0.50%，這與國內報道中國人最主要的6種β-地貧基因CD41-42(-TCTT)、IVS-Ⅱ-654(C→T)、CD17(A→T)、-28(A→G)、CD71-72(+A)、CD26(G→A)不完全一致，但均以CD41-42(-TCTT)為主。與重慶[5]、貴陽[6]地區的β-地貧基因突變類型以CD17(A→T)為主，CD41-42(-TCTT)次之，姚莉琴等[10]報道的云南地區婚檢人群常見的β-地貧基因型為βE、CD17(A→T)、CD41-42(-TCTT)為主不同。與廣東[11]、廣西[12]β-地貧基因突變類型一致，均以CD41-42(-TCTT)為主，CD17(A→T)次之，這表明β-地貧基因存在地域性差異,但在廣西、廣東地區差別不大。男性檢出率大于女性，一定程度上是因女性易受生育期[13]、月經期[14]等導致血常規異常的影響，從而使篩查上出現假陽性較多。

本研究通過比較分析α靜止型、α輕型、α中間型、α重型、β0雜合、β+雜合的男女Hb、MCV、MCH、HbA2，發現除了α靜止型、α輕型血液學表型Hb、MCV、MCH均存在較大差異外，其他幾項差異基本均表現在Hb上，考慮主要與不同類型的地貧發生溶血時，Hb的分解產物刺激造血系統存在差異有關[15-16]。

綜上所述，貴港地區成年男女性人群α-地貧均以--SEA/αα為主，β-地貧均以β41-42M/βN為主，αβ復合型均以 --SEA/αα合并β41-42M/βN為主，基因類型具有多樣性，類型分布具有區域性差異，且男性檢出率高于女性。α靜止型、α輕型男女間的血液學表型差異有統計學意義(P<0.05)，而α中間型、α重型、β0雜合、β+雜合的血液學表型差異無統計學意義(P>0.05)。因此，針對貴港地區男女地貧基因檢測制訂不同的血液學表型篩查標準，能有效地提高檢出率，減少資源浪費。