5 195例孕婦珠蛋白生成障礙性貧血篩查結(jié)果及基因類型分析*

嚴(yán)關(guān)平，劉武林，何廷德，雷 余，劉 洋，龔 倬，謝家寧

1.重慶市涪陵區(qū)婦幼保健院檢驗科，重慶408000；2.重慶市涪陵區(qū)婦幼保健院婦產(chǎn)科，重慶 408000；3.重慶市中醫(yī)院檢驗科/重慶市中醫(yī)感染性疾病中西醫(yī)結(jié)合診治實驗室，重慶 400021

珠蛋白生成障礙性貧血(原名地中海貧血，簡稱地貧)是由于一組珠蛋白基因突變或缺失導(dǎo)致肽鏈合成障礙而引起的溶血性貧血的單基因遺傳性疾病，也是危害最嚴(yán)重的血紅蛋白病。全球有近7%的人口為地貧基因攜帶者，每年有30萬～50萬患地貧和鐮刀細(xì)胞貧血的新生兒出生[1]。目前，醫(yī)學(xué)對重型地貧尚無有效治療方案，只有通過孕前遺傳檢測、B超檢查、孕期篩查和產(chǎn)前診斷，可使出生缺陷率減少40%～50%。本研究對2020年1月至2022年3月就診于重慶市涪陵區(qū)婦幼保健院的5 195例孕婦血液學(xué)表型[紅細(xì)胞計數(shù)(RBC)、血紅蛋白(Hb)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)]等進(jìn)行檢測，結(jié)合堿性Hb電泳對Hb成分進(jìn)行分析，然后采用單管多重聚合酶鏈反應(yīng)法(GSPCR)結(jié)合反向斑點膜條雜交技術(shù)(RDB)進(jìn)行地貧基因檢查和基因診斷，就Hb成分分析結(jié)果和地貧基因分型結(jié)果進(jìn)行探討，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 對2020年1月至2022年3月到重慶市涪陵區(qū)婦幼保健院接受孕早期檢查的5 195例孕婦進(jìn)行地貧基因篩查。5 195例孕婦年齡19～47歲，平均(25.1±4.32歲)，孕周6～15周，平均(12.5±2.18)周，均簽署了知情同意書。

1.2儀器與試劑 SYSmex ltd XN-1000(B3)型全自動血液細(xì)胞分析儀由希森美康醫(yī)用電子有限公司提供，HBNP-480型全自動核酸提取儀由廣東凱普生物科技有限公司提供，HBHM-3000S型自動核酸分子雜交儀由廣東凱普生物科技有限公司提供，7500型實時熒光定量PCR擴增儀由美國ABI提供。地貧Hb成分分析采用Helena SPIFE 3000全自動電泳分析系統(tǒng)及試劑，α、β-地貧基因檢測試劑盒由廣州凱普醫(yī)藥科技有限公司提供。

1.3方法

1.3.1電泳及基因檢測 采用堿性Hb電泳檢測HbA2、Hb(A+F)，結(jié)合外周血的RBC、Hb、MCV、MCH、MCHC進(jìn)行Hb成分及異常Hb帶檢測，采用GSPCR結(jié)合RDB技術(shù)(即PCR+導(dǎo)流雜交法)進(jìn)行α、β-地貧基因檢測。各項實驗及結(jié)果判斷均按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.2地貧基因篩查診斷標(biāo)準(zhǔn) (1)MCV檢測結(jié)果異常標(biāo)準(zhǔn)：<80 fL或>100 fL。MCH檢測結(jié)果異常標(biāo)準(zhǔn)：<27 pg。(2)堿性Hb電泳時，HbA2<2.5%行α-地貧基因分析，HbA>3.5%行β-地貧基因分析。

1.4數(shù)據(jù)處理 采用描述性的方法對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，并對地貧基因篩查結(jié)果及基因型別分布情況進(jìn)行描述。

2 結(jié) 果

2.1地貧基因篩查結(jié)果 5 195例受檢孕婦中， MCV檢測結(jié)果異常2 077例(其中MCV<80 fL為803例，MCV>100 fL為1 274例)， MCH檢測結(jié)果異常(<27 pg)為1 008例，Hb檢測結(jié)果異常為384例。

2.2堿性Hb電泳結(jié)果 Hb(A+F)堿性電泳實驗結(jié)果：陽性307例，其中HbF降低102例，為β-地貧可疑，可疑陽性率為1.96%(102/5 195)；HbA2降低205例，為α-地貧可疑，可疑陽性率為3.95%(205/5 195)。Hb成分電泳分析結(jié)果正常4 888例，正常率為94.09% (4 888/5 195)。5 195例受檢孕婦未檢測到異常Hb帶。

2.3地貧基因檢測結(jié)果 5 195例孕婦確診為地貧基因攜帶者(包括α-地貧基因缺失型和突變型及β-地貧基因突變型)300例，陽性率5.78%(300/5 195)，其中α-地貧基因攜帶者198例，陽性率3.82%，β-地貧基因攜帶者102例，陽性率1.96%。

2.3.1α-地貧基因缺失型 α-地貧基因缺失型雜合子179例，未檢出α-地貧基因缺失型純合子。見表1。

表1 α-地貧基因缺失檢測結(jié)果

2.3.2α-地貧基因突變型 檢出α-地貧基因突變型雜合子19例，未檢出α-地貧基因突變型純合子。見表2。

表2 α-地貧基因突變檢測結(jié)果

2.3.3β-地貧基因突變型 β-地貧基因突變型雜合子102例，未檢出β-地貧基因突變型純合子。檢測結(jié)果見表3。

表3 β-地貧基因突變檢測結(jié)果

3 討 論

地貧的發(fā)病機制為編碼珠蛋白的基因缺失、突變或調(diào)控異常使肽鏈出現(xiàn)一種或幾種合成障礙，導(dǎo)致Hb組分發(fā)生常改變的常染色體隱性遺傳病，呈進(jìn)行性貧血[2]。地貧患者遍布全球，主要高發(fā)于地中海周邊國家及亞洲、南太平洋、中美洲等地區(qū)。據(jù)我國的流行病學(xué)調(diào)查：長江以南(廣西、廣東、海南、臺灣、香港、四川、重慶、云南、貴州)為地貧的多見地區(qū)。地貧在臨床上根據(jù)基因不同的表現(xiàn)類型，劃分為α-地貧、β-地貧、異常Hb病等。地貧具有一定致殘性和致死性，因可導(dǎo)致出生缺陷或死亡而備受人們的重視[3]。若夫妻為同型地貧基因的攜帶者，每次妊娠，其子女有1/4的概率為重型地貧患兒。

重慶由于歷史原因，多由湖廣移民遷入，有著復(fù)雜的遺傳基因背景，而廣西、廣東地區(qū)是地貧的主要高發(fā)地，余永熊等[4]報道顯示，廣西地貧基因攜帶率高達(dá)24.78%，因此從地域遷徙因素上來推斷重慶存在很高的地貧基因陽性率。本研究對5 195例孕早期檢查孕婦進(jìn)行地貧基因篩查，結(jié)果顯示， MCV檢測結(jié)果異常的2 077例， 通過血清鐵蛋白測定，排除缺鐵性貧血；MCH檢測結(jié)果異常(<27 pg)的1 008例；堿性Hb電泳結(jié)果異常的307例，其中有102例HbF降低(為β-地貧可疑)，有205例HbA2降低(為α-地貧可疑)。對MCV結(jié)果異常者進(jìn)行地貧基因檢測，檢出300例陽性，地貧基因檢出率為14.44%(300/2 077)。 這與謝建渝等[5]報道的重慶孕婦地貧基因陽性率(14.14%)和杜偉等[6]報道的重慶地貧基因陽性率(13.92%)基本一致。

本研究采用GSPCR技術(shù)結(jié)合RDB 法同時進(jìn)行α、β-地貧基因檢測，數(shù)據(jù)統(tǒng)計結(jié)果顯示:在5 195例孕婦早期地貧基因檢測中，α-地貧基因缺失型、突變型及β-地貧基因突變型共陽性300例，陽性率5.78%(300/5 195)。地貧基因檢出率高于全國2.64%的平均水平[7]，略高于謝建渝等[5]報道的重慶地區(qū)孕婦地貧篩查的陽性率(4.25%)，這可能與孕婦所在地域等不同有關(guān)。基因檢測確診的300例孕婦中，孕婦α-地貧基因攜帶者有198例(α-地貧基因缺失型有179例，α-地貧基因突變型有19例)，β-地貧基因突變有102例。198例α-地貧基因攜帶者中最高的基因型是-α3.7/αα，其次是東南亞缺失型--SEA/αα，再次是-α4.2/αα基因型，第四位是αCSα/αα基因型，最后是αWSα/αα基因突變型。在102例β-地貧基因突變型攜帶者中，檢測出9種常見的地貧等位基因，以CD17型最多，其次是CD41-42型，再次是IVS-Ⅱ-654型。

從本研究數(shù)據(jù)得出，α-地貧基因攜帶者以-α3.7/αα基因型為常見，β-地貧基因突變型攜帶者CD17型最多。與國內(nèi)的相關(guān)報道基本相同[8]，α-地貧基因和β-地貧基因突變型的型別種類及頻率分布與我國南方地區(qū)基本一致[9]。有研究提示，α-地貧與低出生體重等明顯相關(guān)[10]。這說明在孕婦的產(chǎn)前檢查中要高度重視并加強孕早期的地貧的檢測與篩查。在300例孕婦地貧基因攜帶者中，α-地貧基因陽性率明顯高于β-地貧基因，與地貧高發(fā)區(qū)的廣東[11]、廣西[12]相關(guān)報道基本吻合。

本研究數(shù)據(jù)說明：重慶市涪陵區(qū)孕婦有較高的地貧基因陽性率和地貧基因篩查陽性率。該地區(qū)α-地貧基因攜帶者以-α3.7/αα基因位點和--SEA/αα基因位點為常見，β-地貧基因突變型攜帶者以CD17型基因位點多見。近期的研究報道顯示，我國地貧患兒的出生率是2.4‰[13]。因此，及早行地貧基因篩查及基因分析，對地貧基因攜帶的孕婦進(jìn)行出生缺陷的干預(yù)，有助于防控重度地貧新生兒的出生，這對提高人口素質(zhì)具有重要意義。