山西某地區(qū)由出血性大腸桿菌引發(fā)麋鹿死亡的分析報告

張 卓，李金邦，孫樂天，霍占鎖

（太原動物園，山西 太原 030009）

大腸埃希氏菌（E.coli）通常稱為大腸桿菌，是埃希菌屬中的一類，為革蘭氏陰性無芽孢的直桿菌，兩端鈍圓、周身鞭毛，為兼性厭氧菌，常見于溫血生物的下腸。大腸桿菌廣泛分布在自然界，大多數(shù)是不致病菌，附生于腸道內(nèi)為正常菌群。某些血清型的致病性強(qiáng)，大致分為5類：致病性大腸桿菌（EPEC）、腸產(chǎn)毒性大腸桿菌（ETEC）、腸侵襲性大腸桿菌（EIEC）、腸出血性大腸桿菌（EHEC）和腸黏附性大腸桿菌（EAEC）。其中，腸出血性大腸桿菌（Enterohemorrhagic E.coli，EHEC）是一種人畜共患病，被感染的病人、帶菌動物等均可傳播本病，較常見的易感動物為牛、羊、雞、狗、豬等家畜，也有從鵝、馬、鹿的糞便中分離出此菌的報道。出血性腸炎在我國大部分鹿類園區(qū)時有發(fā)生，成為對我國養(yǎng)鹿業(yè)威脅較大的傳染病之一[1]。

麋鹿（Elaphurus davidianus）隸屬偶蹄目（Artiodacty）鹿科（Cervidae）鹿亞科麋鹿屬，原產(chǎn)于中國長江中下游沼澤地帶。2021年2月份，山西某養(yǎng)殖鹿場死亡2只麋鹿，通過臨床癥狀和病理變化的分析，以及實驗室診斷等，明確死因，為今后麋鹿的飼養(yǎng)和疾病預(yù)防工作提供參考。

1 發(fā)病情況

該鹿區(qū)共飼養(yǎng)20頭麋鹿，分3個圈，發(fā)生疾病的是其中一個圈舍，內(nèi)飼養(yǎng)有6頭麋鹿。據(jù)該場人員介紹，2021年2月12日上午突然發(fā)現(xiàn)兩只麋鹿?fàn)顟B(tài)不佳，其中一只♂7歲麋鹿走路時出現(xiàn)跛行的癥狀；一只♀6歲麋鹿出現(xiàn)精神沉郁、少食的癥狀。后于13日及15日這兩只麋鹿先后出現(xiàn)不食，精神不振、頭垂地常臥、拉血便的癥狀，排泄物為帶有黏液和暗紅色血液的坨狀糞便。15日上午♀麋鹿死亡，20日上午♂麋鹿死亡。發(fā)病期間圈內(nèi)剩余4只麋鹿精神狀態(tài)一般，采食較平日減少，但未發(fā)現(xiàn)拉血便情況。

2 剖檢情況

對病死的兩只麋鹿病理解剖時發(fā)現(xiàn)：

心臟明顯腫大、心冠脂肪處有少量出血點(diǎn)、心房內(nèi)壁有出血點(diǎn)（圖1A）；

肝臟邊緣鈍圓，輕微腫大（圖1B）；

肺臟表面輕微出血；腎臟包膜不易剝離，質(zhì)脆（圖1C），皮質(zhì)與髓質(zhì)間的邊界不清；腸系膜廣泛性點(diǎn)狀出血，淋巴結(jié)腫大；

小腸彌漫性出血壞死，內(nèi)有血性內(nèi)容物；部分腸段脹氣，小腸內(nèi)容物呈暗紅色液體（圖1D）。

圖1 麋鹿尸體剖檢結(jié)果

3 實驗室診斷

3.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)及鏡檢

在超凈工作臺內(nèi)，無菌操作，使用接種環(huán)在心、肝、腎和腸道等病變組織取樣，劃線接種于血平板和中國藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（購于上海廣銳生物科技有限公司），于 37℃需氧條件下培養(yǎng)18～24 h，觀察菌落形態(tài)，相互對照后發(fā)現(xiàn)，菌落在血平板和中國藍(lán)培養(yǎng)基上均生長良好，血平板上出現(xiàn)圓形，稍凸，灰白色不透明菌落，在中國藍(lán)平板上出現(xiàn)藍(lán)色菌落，挑取單個菌落進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢后，顯微鏡下可見細(xì)菌為革蘭氏陰性，菌體中等大小、兩端鈍圓短桿菌，基本符合腸出血性大腸桿菌的特點(diǎn)。

3.2 細(xì)菌生化特性鑒定

在超凈工作臺內(nèi)，利用細(xì)菌微量生化反應(yīng)管，對所分離的菌株進(jìn)行生化指標(biāo)測定。結(jié)果表明該細(xì)菌能分解葡萄糖乳糖與靛基質(zhì)、鳥氨酸、賴氨酸、衛(wèi)矛醇反應(yīng)；不與苯丙氨酸、枸櫞酸鹽、尿素、硫化氫反應(yīng)。這些生化鑒定結(jié)果與大腸桿菌生物學(xué)特征相符，表明該菌極有可能是出血性大腸桿菌。

3.3 藥敏試驗

3.3.1 方法

采用紙片擴(kuò)散法，按K-B法要求操作，35℃溫箱中培養(yǎng)18～24h后，測抑菌圈直徑。判斷標(biāo)準(zhǔn)，參照K-B法藥敏試驗標(biāo)準(zhǔn)，抑菌圈直徑≧18mm者為敏感（S）；抑菌圈直徑13～17mm者為中敏（M）；抑菌圈直徑＜12mm者為耐藥（R）。

3.3.2 結(jié)果

實驗結(jié)果表明該分離株對頭孢噻肟和慶大霉素中敏，頭孢曲松、奧美拉唑和慶大霉素等敏感，詳見表1。

表1 腸出血性大腸桿菌對抗生素的敏感程度

4 治療

（1）由于病鹿于2月12日發(fā)現(xiàn)少食、精神沉郁，口服健胃消食片（4.8g/次），2次/d。飲水中添加電解多維（5g/10kg），喝完再續(xù)。

（2）母鹿于2月1 3日發(fā)現(xiàn)拉血便后單圈飼養(yǎng)，治療藥物更換為：肌內(nèi)注射酚磺乙胺注射液（1.25g∕次），2次/d；肌內(nèi)注射維生素k1注射液（50mg∕次），2次/d；肌內(nèi)注射鹽酸林可霉素注射液（10mg∕kg），2次/d。由于病情較為嚴(yán)重，在及時治療的同時，采集帶血糞便進(jìn)行實驗室檢查，但因病料從地面采集，污染嚴(yán)重，未培養(yǎng)出有效菌種。

（3）母麋鹿于2月14日，對其進(jìn)行補(bǔ)液治療，靜脈滴注0.9%生理鹽水，輸液中添加鹽酸林可霉素注射液（10mg/kg），2次/d。并肌內(nèi)注酚磺乙胺注射液（1.25g∕次），2次/d；維生素k1注射液（50mg/次），2次/d。

發(fā)現(xiàn)母麋鹿血便后，公麋鹿采取預(yù)防性治療，鹽酸林可霉素注射液（10mg∕kg），2次/d。

（4）母麋鹿病程較快，治療效果不佳，于2月15日死亡。采集心、肝、腎及腸道等病變組織重新進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)和藥敏試驗。

同時，為預(yù)防其他5只麋鹿不受感染，飲水中添加鹽酸土霉素可溶性粉（1g/500ml），飼料中添加電解多維（1g/kg）。也為減少治療期間麋鹿的應(yīng)激反應(yīng)。飼料也將苜蓿顆粒更換為易消化的谷草、槐樹葉和東北草。

2月18日，根據(jù)藥敏結(jié)果治療藥物更換為：肌內(nèi)注射慶大霉素（400mg/次），2次/d；酚磺乙胺注射液（1.25g/次），2次/d；維生素k1注射液（50mg/次）， 2次/d。但治療效果欠佳，公麋鹿1月20日死亡。

5 討論

本病在我國自然保護(hù)區(qū)、野生動物場及動物園的斑馬、象、鹿中均有發(fā)生，被稱為“猝死癥”[3]。因此，早期發(fā)現(xiàn)，及時診斷和治療是控制該病的關(guān)鍵[4]。文中兩只麋鹿發(fā)生死亡，原因分析可能是早期癥狀不典型，未出現(xiàn)水樣腹瀉和出血性腸炎，對其重視程度不夠，錯過了治療的“黃金時期”，也可能是天氣寒冷食欲減退等多種原因混合引發(fā)。圈內(nèi)剩余4只麋鹿由于治療及時，配合良好的飼養(yǎng)管理，均已好轉(zhuǎn)。

在飼養(yǎng)中要以預(yù)防為主，防重于治。具體的發(fā)病機(jī)制大體可以總結(jié)為4點(diǎn)：

多雨季節(jié)，雨水未及時清理，飲到不潔凈水；

季節(jié)溫差較大，氣溫驟變，如寒冷、炎熱、干燥等；

突然大量變換飼料種類或飼喂方法，如在北方冬草和青草的轉(zhuǎn)換上，應(yīng)慢慢遞增或遞減；

有應(yīng)激刺激如換舍，斷奶，換環(huán)境等。盡量避免上述發(fā)病原因，可以有效減少患病的幾率。

在診斷時，也應(yīng)與產(chǎn)氣莢膜梭菌及巴氏桿菌引起的鹿出血性腸炎區(qū)分清楚，避免誤診。由于死亡速度較快，治療時抗生素的選擇需要根據(jù)藥敏試驗的結(jié)果。本報告中，藥敏試驗結(jié)果對頭孢噻肟和慶大霉素中敏，頭孢曲松、奧美拉唑和慶大霉素等敏感，而有些地區(qū)對養(yǎng)殖場送檢的病死動物進(jìn)行細(xì)菌分離之后，阿米卡星的敏感度最高，與本實驗結(jié)果不同，原因分析可能是不同地區(qū)用藥不同導(dǎo)致的敏感性存在差異[5]，或是動物品種的不同導(dǎo)致敏感性也不盡相同。

EHEC主要會通過糞口途徑傳播，動物之間可以通過相互接觸、共食共飲污染的草、水等進(jìn)行相互傳播，鳥類和禽類也是攜帶者。當(dāng)懷疑或診斷出此類疾病后，首先選取針對性的方法進(jìn)行消毒，可以減少患病動物與健康動物之間的傳播；我們使用1%的次氯酸鈉對運(yùn)動場和食槽、水槽、糞便等重污染地區(qū)噴刷消毒，30分鐘后用清水沖洗干凈。因為消毒比較及時所以成效也明顯，對圈內(nèi)剩余麋鹿并沒有造成感染和死亡。其次，將患病2只麋鹿放入隔離圈舍治療，也能有效地控制傳染源，減少動物應(yīng)激，方便治療和投喂藥物。