細胞周期檢測點激酶1、2 及T 細胞免疫球蛋白黏蛋白分子3 和癌胚抗原對子宮腫瘤轉(zhuǎn)歸結(jié)局的預(yù)測價值分析

蘆 杰，胡海霞，佟學(xué)穎*

（1.吉林省臨床檢驗中心/吉林省醫(yī)療機構(gòu)質(zhì)量監(jiān)測評價中心質(zhì)量控制科，吉林長春 130021；2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院胃腸結(jié)直腸外科，吉林長春 130033）

子宮腫瘤多發(fā)生于圍絕經(jīng)期與絕經(jīng)后女性，因其性激素水平偏低，且隨著年齡增長、不良生活方式及飲食習(xí)慣導(dǎo)致其免疫功能低下，易引起婦科疾病[1-3]。免疫功能障礙可能導(dǎo)致惡性腫瘤患者單純手術(shù)、放化療或使用抗癌藥物等被動治療也不能完全阻止癌細胞的遷移和侵襲，部分良性腫瘤也具有復(fù)發(fā)或惡化的風險[4-5]。因此，評估子宮腫瘤的轉(zhuǎn)歸結(jié)局以降低疾病對患者的不良影響至關(guān)重要。癌胚抗原（CEA）為臨床常用的腫瘤標記物，細胞周期檢測點激酶1（Chk1）、細胞周期檢測點激酶2（Chk2）是細胞周期檢查點，可以阻滯細胞周期運行，而抑制T 細胞免疫球蛋白黏蛋白分子3（Tim3）的表達可提高抗癌T 細胞反應(yīng)[6-7]。因此，本研究探求Chk1、Chk2、Tim3 聯(lián)合CEA 對子宮腫瘤患者轉(zhuǎn)歸結(jié)局的預(yù)測價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019 年1 月至2020 年1 月吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院收治的160 例子宮腫瘤患者為研究對象進行回顧性分析，根據(jù)患者病理學(xué)檢查結(jié)果的不同分為良性組（73 例）和惡性組（87 例）。良性組患者年齡40~65 歲，平均年齡（55.14±5.18）歲；體質(zhì)量指數(shù)（BMI）18~24 kg/m2，平均BMI（21.97±1.03）kg/m2；病程1~7 年，平 均病程（4.71±1.54）年；Karnofsky 功能狀態(tài)量表（KPS）[8]評分70~85 分，平均KPS 評分（78.16±3.69）分；美國東部腫瘤協(xié)作組（ECOG）[9]評分0~2 分，平均ECOG 評分（0.97±0.29）分。惡性組患者年齡41~65 歲，平均年齡（54.45±4.34）歲；BMI 18~25 kg/m2，平 均BMI（21.99±1.17）kg/m2；病程2~7 年，平均病程（4.69±1.28）年；KPS 評分71~85 分，平均KPS 評分（77.76±3.51）分；ECOG評分0~2分，平均ECOG評分（0.99±0.32）分。兩組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），組間具有可比性。本研究經(jīng)吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準。納入標準：①符合《子宮肉瘤診斷與治療指南（第4 版）》[10]中子宮腫瘤的診斷標準，并經(jīng)病理學(xué)檢查確診為子宮腫瘤；②ECOG 評分在0~2 分；③KPS 評分≥60 分；④預(yù)計生存期超過研究時間。排除標準：①惡性腫瘤腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（TNM）分期[11]為 Ⅲ~Ⅳ期；②近期接受過腫瘤疾病系統(tǒng)性治療；③合并嚴重實質(zhì)性器官功能損傷、嚴重凝血造血障礙、嚴重自身免疫性疾病；④合并認知障礙、精神疾病。

1.2 研究方法 將兩組患者手術(shù)切除下的腫瘤病理及周圍組織分別使用10%甲醛（國藥化學(xué)試劑有限公司，規(guī)格：500 mL/瓶）固定，進行包埋處理，切至呈厚度約為4 μm 切片，隨后進行免疫組化染色。染色過程包括烤片、乙醇順濃度水化處理、微波修復(fù)抗原、磷酸鹽緩沖液（北京Solarbio 公司，規(guī)格：500 mL/瓶）洗滌、牛血清白蛋白封閉切片。每位患者的病理組織和病理周圍組織樣本切片任選一個做陰性對照；其余組織與來源切片依次滴加一抗、二抗、鏈霉親和素-生物素復(fù)合物，每次滴加后在37 ℃下靜置1 h。兩種切片用聚丁二酸丁二醇酯（PBS）（上海源葉生物科技有限公司，規(guī)格：25 g/瓶）沖洗3 次，3 min/次，隨后進行下一步操作；最后滴加細胞增殖檢測（DAB）染色液進行顯色反應(yīng)，蘇木素復(fù)染后乙醇逆濃度脫水，用樹膠封片，放至顯微鏡（日本OLYMPUS，型號：DSX1000）下觀察。步驟中的一抗分別為抗Chk1 抗體、抗Chk2 抗體、抗Tim3抗體和抗CEA 抗體，二抗為生物標記羊抗兔IgG。Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 免疫組化試劑盒購于上海雅吉生物科技有限公司。

1.3 觀察指標 ①比較兩組患者病理組織和病理周圍組織細胞中Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 陽性情況。結(jié)果判讀：隨機選取每張切片5 個顯微鏡下400 倍視野進行計數(shù)，采用顯微鏡攝像計算機圖像分析系統(tǒng)，計算細胞陽性數(shù)量并計分，總分0~12 分，0 分為陰性，1~4 分為弱陽性，5~8 分為中陽性，9~12 分為強陽性，分數(shù)越高，陽性程度越高[12]。②比較兩組患者腫瘤轉(zhuǎn)歸情況。記錄患者截至2021 年6 月的疾病轉(zhuǎn)歸情況，腫瘤疾病緩解、穩(wěn)定或未復(fù)發(fā)為良好，腫瘤疾病進展或復(fù)發(fā)為惡化[13]。③分析Chk1、Chk2、Tim3和CEA 水平對子宮腫瘤轉(zhuǎn)歸的預(yù)測價值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 21.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)處理。符合正態(tài)分布的計量資料以（±s）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，非正態(tài)分布的計量資料以P50（P25，P75）表示，組間比較采用非參數(shù)秩和檢驗；計數(shù)資料以[例(%)]表示，組間比較采用χ2檢驗；采用受試者操作特征（ROC）曲線分析研究指標對腫瘤患者轉(zhuǎn)歸結(jié)局的預(yù)測價值。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者病理組織及其周圍組織細胞中Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 陽性情況比較 惡性組患者病理與其周圍組織中Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 陽性表達水平高于良性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；兩組患者病理組織中Chk1、Chk2、Tim3 和CEA陽性表達水平高于病理周圍組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組患者病理組織及其周圍組織細胞中Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 陽性情況比較 [分，P50(P25,P75)]

2.2 兩組患者腫瘤轉(zhuǎn)歸情況 良性組患者轉(zhuǎn)歸結(jié)局良好55 例，惡化18 例，惡化率為24.66%；惡性組患者轉(zhuǎn)歸結(jié)局良好37 例，惡化50 例，惡化率為57.47%。良性組患者轉(zhuǎn)歸結(jié)局優(yōu)于惡性組（χ2=4.569，P＜0.05）。

2.3 Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 水平預(yù)測子宮腫瘤轉(zhuǎn)歸結(jié)局的ROC 分析 ROC 分析結(jié)果顯示，病理組織Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 預(yù)測腫瘤轉(zhuǎn)歸的AUC值分別為0.773、0.780、0.792、0.779，病理周圍組織Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 預(yù)測腫瘤轉(zhuǎn)歸的AUC 值分別為0.696、0.677、0.688、0.638，見表2、圖1。

表2 Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 水平預(yù)測子宮腫瘤轉(zhuǎn)歸結(jié)局的ROC 分析

圖1 Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 預(yù)測腫瘤轉(zhuǎn)歸預(yù)測的ROC 曲線

3 討論

CEA 作為一種鑒別惡性腫瘤的廣泛性腫瘤標記物，對惡性、良性腫瘤患者治療后的轉(zhuǎn)歸結(jié)局預(yù)測評估有一定干擾性[14]。研究發(fā)現(xiàn)，病理組織中Chk1表達陰性的腫瘤患者生存期較長，轉(zhuǎn)歸結(jié)局較好[15]，Chk2 也被證實在病理組織中過表達與患者不良腫瘤特征有關(guān)，推測Chk1 和Chk2 還可作為腫瘤預(yù)后評估標記物[16]。另一項研究指出，有高水平Tim3 陽性細胞的腫瘤患者化學(xué)治療效果不佳，推測Tim3 過表達可能阻礙腫瘤治療[17]。

本研究結(jié)果顯示，惡性組患者Chk1、Chk2、Tim3和CEA在病理組織中的表達水平高于良性組，良性組患者轉(zhuǎn)歸結(jié)局優(yōu)于惡性組。這提示隨著子宮腫瘤疾病病情的加重，Chk1、Chk2、Tim3 和CEA在病理組織中的表達水平越高，且過表達的患者治療效果不佳，復(fù)發(fā)風險較高。

本研究通過ROC 曲線分析，病理組織Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 預(yù) 測 腫 瘤 轉(zhuǎn) 歸 的AUC 值 分別為0.773、0.780、0.792、0.779，病理周圍組織Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 預(yù)測腫瘤轉(zhuǎn)歸的AUC值分別為0.696、0.677、0.688、0.638，說明病理組織中Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 陽性表達水平對腫瘤患者轉(zhuǎn)歸結(jié)局的具有較高的預(yù)測價值。Tim3過表達對腫瘤患者轉(zhuǎn)歸結(jié)局有負面影響，通過抑制Tim3 表達，可改善患者轉(zhuǎn)歸結(jié)局。分析原因可能是細胞周期中也存在負反饋調(diào)節(jié)，激活Chk1 而使細胞周期阻滯，為損傷DNA 創(chuàng)造修復(fù)時間，并誘導(dǎo)未修復(fù)成功的細胞凋亡[18]。Chk2 是DNA 損傷反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子和腫瘤抑制因子，也參與促進細胞周期阻滯、凋亡和DNA 修復(fù)。Tim3 可抑制自然殺傷性細胞免疫功能而促進腫瘤細胞發(fā)展，過表達可能抑制嵌合抗原受體T 細胞功能[19]。

綜上所述，Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 在子宮腫瘤患者病理組織中的陽性表達水平越高，腫瘤越容易進一步發(fā)展，可作為子宮腫瘤轉(zhuǎn)歸的預(yù)測指標。