藍莓果實色素含量的分析

戴翔，劉偉偉，林光號

(常山縣農業農村局，浙江 常山 324200)

常山縣位于浙江省西南部、錢塘江上游，地形以丘陵為主，有“八山半水分半田”之稱，處亞熱帶地區，四季分明，雨量充沛。年平均氣溫17.7 ℃，年降水量1 760.1 mm，年平均相對濕度76%，年無霜期279 d，年日照時數1 731.2 h。氣候條件適合藍莓等經濟作物種植。常山縣對發展藍莓產業高度重視，將藍莓作為常山“新三寶”之一，在《關于加快鄉村振興產業高質量發展的若干政策意見(試行)》中，單獨列出“藍莓產業扶持政策”等為產業園建設提供補助、配套政策，推動藍莓產業發展。經過近幾年發展，在常山縣天馬街道、同弓鄉、芳村鎮、球川鎮等地藍莓種植面積發展迅猛，藍莓產業正成為常山縣的新興產業之一。

常山縣作為浙江山區26縣之一，正在實現跨越式發展。2018年以來，根據浙江省委的部署，在“千企結千村、消除薄弱村”行動的推動下，浙江省供銷社(興合集團)與常山縣球川鎮6個村(芙蓉、棋盤山、三溪、黃泥畈、九都、東坑)結對形成山海協作，以“藍莓種植、產業扶持”為路徑，探索實踐出一條以發展藍莓產業壯大集體經濟之路。目前已種植藍莓面積超過80 hm2，產量預計在30 t以上，已然形成“一村一品”發展態勢[1]。近幾年來，藍莓產業園除了帶動周邊農戶增收外，還吸收了23名低收入村民入園勞動，人均年增收9 000元，富民效果已顯現。

藍莓，學名越橘，屬于杜鵑花科越橘屬植物，是具有較高經濟價值和廣闊開發前景的新興果樹樹種。藍莓的栽培最早始于美國，全世界約有400多個品種，屬于多年生灌木，樹體大小因品種不同而差異較大。長白山地區的野生藍莓，學名為篤斯越橘，俗稱藍漿果、甸果子，樹高50～80 cm，樹體叢生，屬于落葉小灌木，花冠壇狀，花為綠白色，果實呈藍紫色，酸甜可口，性耐陰，在我國主要分布于長白山及大興安嶺部分水濕沼澤地帶。

藍莓是一種新興果樹，其果實與加工產品很受消費者歡迎。在英國權威營養學家列出的全球15種健康食品中藍莓位居首位。在聯合國糧農組織列出的人類五大健康食品中藍莓食品是其中之一[2]。藍莓果實中含有大量有利于視網膜的花青素[3]，以及豐富的維生素A、維生素E、類胡蘿卜素、鉀和鋅[4]等營養成分，它不僅具有良好的營養保健作用，還具有防止腦神經老化、強心、抗癌、軟化血管、增強人機體免疫、抗氧化、清除自由基[5]等功能。在2004年國際長壽會議(International Conference on Longevity)上，研究者釋放出一項研究的細節，顯示藍莓中一些特定化合物(以及一些相似植物，例如小紅莓)對于腦功能退化的抑制有強烈影響，相關疾病包括了阿茲海默癥。美國羅格斯大學的研究者也展示了藍莓可能可以防止泌尿道感染。40 g新鮮藍莓包含膳食纖維3 g、維生素C 14 mg[6]。

本次試驗目的為篩選出營養價值高、適合常山栽培種植的藍莓。藍莓的色素含量對于其營養價值和外觀品質具有非常重要的意義。本試驗通過對目前在常山縣種植的2個南高叢藍莓品種美藍和維爾，以及3個北高叢藍莓品種美青、萊格西、布里吉塔進行色素分析，篩選出營養價值較高、品質較優的藍莓品種，為衢州常山地區的藍莓生產提供一定的理論指導。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料為北方高叢藍莓品種(美青、布里吉塔、萊格西)、南方高叢藍莓品種(維爾、美藍)共5個品種。取5個品種的成熟果，在8：00—10：00選取大小基本一致的100～200個藍莓果(具體數目由果實大小而定)，每個品種重復3次，放入冰盒內，迅速帶回實驗室保存在-70 ℃的條件下待用。

1.2 試驗方法

取5個品種藍莓果實，每個品種分成3份，通過液氮冷凍研磨，分別稱取1 g用于總酚、類黃酮含量測定，1 g用于葉綠素、類胡蘿卜素含量測定，1 g用于花青苷含量測定。

1.2.1 藍莓果實總酚和類黃酮含量的測定

前處理。1 g果實中加入8 mL 80%的乙醇，振蕩混勻，置于4 ℃ 24 h浸提。4 ℃下10 000 r·min-1離心20 min，得粗提液。

總酚。吸取0.1 mL上清液和0.4 mL 80%乙醇于新管中，按順序分別加入4.0 mL蒸餾水、0.5 mL FCR試劑(從Sigma買來的原液稀釋4倍，1 mL原液加3 mL水)、1 mL 7% Na2CO3溶液，置于30 ℃恒溫水浴2 h，在725 nm下測定吸光值(空白對照為以80%乙醇代替上清液)。標樣為沒食子酸。

類黃酮。吸取0.5 ml上清液于新管中，按順序分別加入0.3 mL 8% NaNO2(1∶20)，搖勻，放置5 min后加入0.3 mL 10% Al(NO3)3(1∶10)、6 min后再加入2 mL 2 mol·L-1NaOH，搖勻，再加4.9 mL蒸餾水，靜置10 min后，在510 nm下測定吸光值(空白對照為以80%乙醇代替上清液)。標樣為蘆丁。

1.2.2 藍莓果實葉綠素和類胡蘿卜素含量的測定

1 g果實中加入80%的丙酮6 mL，置室溫下避光浸提24 h。10 000 r·min-1下離心10 min。上清液倒入光徑1 cm的比色杯內，以80%丙酮為空白，分別在波長663、645和440 nm下測定光密度，D值代入公式計算。

葉綠素含量=20.2D645+8.02D663；

類胡蘿卜素含量=4.7D440-0.27×葉綠素總量。

1.2.3 藍莓果實花青苷含量的測定

花青苷的含量測定采用李穎暢[7]的pH示差檢測法。由于花青苷對光、高溫比較敏感，所以花青苷含量的提取與測定均在避光的條件下進行。果皮加液氮研磨后，稱取1 g，加入10 mL 70%乙醇溶液，4 ℃下避光浸提12、24 h后，在100 000 r·min-1、4 ℃離心20 min后進行測定。1 mL提取液加2 mL緩沖液(pH 1.0和pH 5.0)進行稀釋，搖勻，靜置10 min后，在510、700 nm下比色。

花青苷含量(mg·100 g-1)=ΔD×3×0.010×1 000×445.2/(30 200×1)。

式中，ΔD=(D510-D700)1.0-(D510-D700)4.5；3為稀釋倍數；0.010為浸提液體積(L)；445.2為矢車菊素-3-半乳糖苷(Cy-3-gla)分子的摩爾質量；30 200為矢車菊素-3-半乳糖苷的摩爾比吸收系數；1為果皮質量(g)；花青苷含量的單位最后表示為mg·100 g-1。重復3次。

1.2.4 數據記錄與分析

對試驗數據進行記錄、整理，用DPS統計軟件進行數據統計分析。

2 結果與分析

2.1 藍莓果實總酚和類黃酮含量

2.1.1 總酚含量

由圖1可知，不同品種果實總酚含量存在顯著性差異，每100 g參試樣品的總酚含量在17.97～35.70 mg。其中，美藍的總酚含量最高，為35.70 mg，與其他品種間差異達到極顯著水平。2個南高叢藍莓品種美藍和維爾總酚含量居前2位。由此可知，南高叢藍莓果實總酚含量高于北高叢藍莓，美藍在南高叢藍莓品種中總酚較高，萊格西在北高叢藍莓品種中總酚較高。

柱上無相同小寫字母者表示組間差異顯著(P<0.05)。圖2～6同。

2.1.2 類黃酮含量

由圖2可知，不同品種果實類黃酮含量存在顯著性差異。每100 g參試樣品的類黃酮含量在19.73～40.00 mg。其中，美藍的類黃酮含量最高，為40.00 mg，與其他品種間差異達到極其顯著水平。由圖1和2可知，美藍果實總酚和類黃酮2種色素含量最高，同時，南方高叢藍莓類黃酮和總酚含量高于北方高叢藍莓。

圖2 藍莓果實類黃酮的含量

2.2 藍莓果實葉綠素、類胡蘿卜素含量

2.2.1 葉綠素含量

由圖3可知，不同品種果實葉綠素含量存在顯著性差異，每100 g參試樣品的葉綠素含量在3.10～5.35 mg。其中，美藍的葉綠素含量最高，為5.35 mg，與其他品種間差異達顯著水平。萊格西和維爾的葉綠素含量間差異不顯著，但顯著低于美青，高于布里吉塔。

圖3 藍莓果實葉綠素含量

2.2.2 類胡蘿卜素含量

由圖4可知，不同品種果實類胡蘿卜素含量存在顯著性差異，每100 g參試品種類胡蘿卜素含量在0.57～3.02 mg。其中，美藍類胡蘿卜素含量最高，為3.02 mg，與其他品種間差異達到顯著水平。美青的類胡蘿卜素含量稍低于美藍，但高于其他3個品種，維爾、萊格西2個品種間胡蘿卜素含量差異不顯著。由圖3～4可知，美藍果實所含葉綠素和類胡蘿卜素的含量是最高的，并達到顯著水平。

圖4 藍莓果實類胡蘿卜素的含量

2.3 藍莓果實花青苷含量

由圖5可知，不同品種果實花青苷含量存在顯著性差異，每100 g參試品種花青苷含量在44.34～98.83 mg。其中，美藍花青苷含量最高，為98.83 mg，與其他品種間差異達極顯著水平。萊格西的花青苷含量低于美藍，但高于其他3個品種，維爾、美青、花青苷含量差異不顯著。由上可知，美藍花青苷含量最高，花青苷存在很高的藥用價值。因此，美藍可以帶來更高的營養價值。

圖5 藍莓果實花青苷的含量

2.4 藍莓果實花青苷與葉綠素含量的比值

圖6顯示，由花青苷與葉綠素比值看出，參試品種顏色的深淺有差異。其中，美藍花青苷與葉綠素的比值最大，布里吉塔花青苷與葉綠素的比值最小，故參試品種中美藍的顏色最深，布里吉塔的顏色最淺。

圖6 藍莓果實花青苷與葉綠素的比值

3 小結與討論

本試驗結果表明，不同品種藍莓果實的色素含量有著明顯的差異。在參試的5個藍莓品種中，葉綠素和類胡蘿卜素含量相對較低，總酚、類黃酮和花青苷含量相對較高。美藍的總酚、類黃酮、葉綠素、類胡蘿卜素和花青苷含量均為最高，布里吉塔所含色素的含量均為最低，維爾、萊格西、美青間色素含量差異不顯著。總體來說，南方高叢藍莓的色素含量高于北方高叢。南北高叢藍莓品種花青苷含量低于兔眼藍莓[8]。因此，在以后的生產當中，在需要色素提取時，美藍是最好的選擇，同時，美藍花青苷含量最高，營養價值也相應較高。總體來說，南高叢藍莓和兔眼藍莓適宜在我國長江以南地區種植[9]。

本試驗中，美藍的花青苷/葉綠素比值最高，說明美藍在5種參試品種中顏色最深。由于藍莓不耐貯藏，22 ℃下放置2～4 d即開始腐爛。且在不同的貯藏溫度下，藍莓果實中總酚、類黃酮、葉綠素、類胡蘿卜素和花青苷的含量隨溫度的不同而不同[10]。而且南方高叢藍莓、北方高叢藍莓所要求的生長環境也不同[11]，因此，也不排除外界環境因子帶來的影響。此外，本次試驗要求避光處理，試驗步驟要求迅速，同時試驗操作過程中也存在一定的試驗誤差，導致最終測得的結果可能也有偏差。

下一步，將以本次試驗結論為依據，更好地指導周邊藍莓種植戶生產，并進一步向特色農業、高效農業、高質量農業轉型。通過試點示范帶動，輻射推動形成“一村一品”“三產融合”的藍莓全產業鏈經濟，更利于農村產業結構調整，發展特色經濟、美麗經濟，形成支柱產業，促進鄉村振興，擴大農民就業創業，促進農民增收致富。