食用菌液體菌種防霉劑輔助精簡生產技術初探

方向東

（湖南省桂東縣農業產業發展服務中心，湖南 桂東 423500）

菌種培育作為食用菌生產的基礎在食用菌產業中尤為重要。相對于固體菌種，液體菌種是指通過液體培養基經無菌培養得到的菌絲體或菌種。而液體菌種具有純度高、活力強，接種后萌發點多，發菌快，縮短菌種發菌時間，成本低，可增加栽培批次，為食用菌集約化、標準化生產創造了條件等優點，隨著食用菌產業的發展及技術的提升越來越突出，因此液體菌種被越來越多的生產企業所接受。但同時液體菌種技術推廣存在培養基配制設備、搖瓶菌種設備、液體菌種培養設備及接種設備等設備投入大對小規模生產農戶存在一定的困難；人員素質要求相對較高；技術標準高及品質鑒定難等不足。為克服和解決食用菌液體菌種生產技術上諸多制約因素與困難，降低液體菌種生產技術門坎，便于液體菌種在食用菌生產上廣泛推廣與應用，筆者在對本地野生牛肝菌（桂東黃菌、內緣牛肝菌）馴化栽培試驗中，開展了大量液體菌種培養試驗。然而，在牛肝菌馴化栽培液體菌種制備與生產中，常因設備簡陋滅菌消毒不徹底造成雜菌感染而失敗，為破解因設備不足、滅菌消毒操作達不到要求等問題，受張宗舟、張揚等人的啟發，及借鑒貴州宏寶食用菌科技開發有限公司開發的“食用菌簡易液體菌種制作新模式”（液體菌種簡易制作新技術_騰訊視頻 https://v.qq.com/x/page/t3227wjx1tm.html），設想是否可以通過在液體菌種培養液中添加防霉劑，探尋出一種新型的精簡食用菌液體菌種生產技術。經過多批次試驗，在食用菌液體菌種培養液中添加山梨酸、苯甲酸鈉、丙酸鈣、富馬酸、富馬酸二甲酯等防霉劑多配方方案進行液體菌種培養試驗后，得出了在食用菌液體菌種培養液中添加0.02%富馬酸二甲酯進行液體菌種培養時，內緣牛肝菌菌種發育良好、雜菌率低的結果。此試驗的成功，可以在食用菌液體菌種生產中達到發揮液體菌種優勢、彌補液體菌種缺點的效果，該技術既降低了液體菌種生產設備、生產技術、資金投入等準入門坎，簡化了生產流程，降低了生產成本，又可以實現滿足批量或小型種植戶自繁自用的需求，在食用菌科研與生產中頗具現實意義，現將有關技術操作與要點作簡要介紹，供廣大食用菌科研生產工作者參考。

1.材料與方法

1.1 采用的設備及工具。采用的設備主要來源于家庭日常用具，包括：不銹鋼鍋、電磁爐或燃氣灶、壓力鍋、天平、秤、量杯、油桶等窄口液體容器、魚缸增氧氣泵、漏斗、長40cm左右木棒、接種刀等常用接種工具、酒精燈、220V定時插座等。

1.2 備用材料。2mm厚度土工布、紙巾、紗布、6mm膠管及調節閥、高錳酸鉀、碘伏、新鮮內緣牛肝菌子實體等。

1.3 培養液基礎材料及配方。水86.6%，馬鈴薯8%，紅糖1.2%，葡萄糖0.8%，麥麩2.4%，蛋白胨0.12%，磷酸二氫鉀0.12%，硫酸鎂0.06%，維生素B10.08%，白醋0.4%，消泡劑0.2%。

1.4 添加防霉劑試驗方法。將山梨酸、苯甲酸鈉、丙酸鈣、富馬酸、富馬酸二甲酯等防霉劑按不同劑量添加到上述培養液中，進行液體菌種培養，使用同樣的處理方式設置三次重復進行試驗，在室溫24-28℃下培養15天后對培養液進行過濾，采用量杯對過濾出來的液體菌種菌絲數量進行統計分析，不同防霉劑及不同劑量見表1。

表1 不同防霉劑劑量（占培養液百分比）

1.5 試驗操作工藝流程。清潔用具→配制培養液→培養液高溫高壓滅菌→培養液冷卻→灌裝混合液到油桶→接種箱及接種工具滅菌消毒→新鮮食用菌子實體制作接種菇塊。（可以采用食用菌母種或原種代替，如采用母種或原種接種可以跳過本操作）→接種→靜置培養→增氧泵增氧帶攪動培養。

1.6 操作工藝流程解析

1.6.1 清潔用具。清潔用具時可用自來水、泉水等相對清潔的水清洗，對有污垢的用具要用清洗刷或清潔球進行擦拭，直至無污垢后即可，對有油污的用具要用清潔劑進行清洗，直至無油污即可，清洗后用0.05%高錳酸鉀溶液等消毒液擦拭一遍或浸泡30分鐘-40分鐘，然后倒掉消毒液備用。

1.6.2 配制培養液。先按培養液配方用天平或秤稱取所需物質備用，在配制培養液時先將馬鈴薯切成薄片，倒入事先準備好的不銹鋼鍋中，隨后把麥麩倒入鍋中，按比例加足水，在電磁爐或燃氣灶上煮沸后持續煮30分鐘，用2層醫用紗布捆扎在高壓鍋口上，把煮沸過的土豆、麥麩混合物往高壓鍋里倒，過濾掉土豆、麥麩渣形成棕色清液，然后往高壓鍋內加入其它配料并用棍棒攪拌3分鐘至配料溶化。

1.6.3 培養液高溫高壓滅菌。培養液在高壓鍋內加熱至高壓鍋額定壓力后保持壓力60分鐘實現培養液高溫高壓滅菌。

1.6.4 培養液冷卻。讓高壓鍋內培養液在室溫下自然冷卻至25-30℃備用。

1.6.5 灌裝混合液。將上述培養液用膠管采取虹吸方式灌裝到油桶中，灌裝到油桶容量的60%即可，每灌好一桶即取一段長40cm左右的增氧泵膠管用紙巾卷起制作成油桶瓶塞，塞住油桶口，伸入油桶內的膠管底端要捆扎一個略重的墜子，確保能插到油桶底部而且在增氧充氣時不上浮，紙巾做成的塞子要松緊適度，以肉眼看不到孔洞又能塞在瓶口不往下掉即可，混合液體在灌裝過程中應盡量只揭開高壓鍋蓋一條小縫，避免不必要的混雜空氣進入桶內。注意在材料煮和壓力鍋消毒時損失的水分在灌裝時用30℃左右的溫開水進行補充。

1.6.6 接種箱及接種工具滅菌消毒。接種工具全部移入接種箱，接種箱及接種工具按常規方法進行滅菌消毒，可以采取臭氧法滅菌30分鐘，也可以采取紫外線照射滅菌40分鐘。

1.6.7 新鮮食用菌子實體制作接種菇塊（如采用母種或原種接種可以跳過此操作過程）。選取新鮮無蟲害無腐爛未全開的健壯食用菌作種菇，首先，將新鮮食用菌子實體切除帶泥菇腳和有蟲駐孔部分，移入已消毒的接種箱內后用碘伏浸泡20分鐘，或用棉簽沾碘伏通體擦拭一遍后靜置20分鐘進行滅菌消毒。然后將已滅菌消毒處理過的食用菌子實體用接種刀切成5mm左右大小的塊狀菇塊。

1.6.8 接種。按照常用接種方法進行接種，將裝有培養液的油桶置于接種箱內，揭開瓶塞倒入切好的菇塊10小塊或5mm左右大小的母種（或原種）8小片倒入桶中，塞回瓶塞即可移出接種箱完成接種。

1.6.9 靜置培養。將接種好的裝有培養液的油桶放置在溫度24-30℃的室內靜置培養24-48小時，觀察接種的菌種長出絨毛狀菌絲后即已完成靜置培養階段。

1.6.10 增氧泵增氧及氣流攪動培養。靜置培養后觀察油桶內菌種已萌發新菌絲出來后，即可接入增氧泵通氣增氧了，增氧充入空氣過程中形成對流可對培養液形成攪動作用，把增氧泵放入60cm見方的水果框中，用2mm厚的無紡布包裹圍實水果框，對吸入的空氣進行過濾，此流程應提前1天打開增氧泵對水果框內空間進行預凈化，增氧泵插頭連接在定時插座上，定時插座設置開20分鐘停30分鐘循環狀態，培養環境溫度在24-30℃為宜，最適宜溫度27℃，若環境溫度低于24℃或高于30℃應采取一些增溫或降溫措施，增氧攪動培養一般在15天左右即可完成。

2.結果與分析

2.1 不同劑量防霉劑對雜菌和食用菌菌絲生長影響結果

不同防霉劑不同劑量在液體菌種培養中，表現出對抑制雜菌、食用菌菌絲生長表現各異，其作用主要通過培養出的食用菌菌絲數量多少來鑒定，培養15天后的三次重復的測定結果見表2、表3、表4。

表2 一次重復不同防霉劑劑量培養的食用菌菌種數量

表3 二次重復不同防霉劑劑量培養的食用菌菌種數量

表4 三次重復不同防霉劑劑量培養的食用菌菌種數量

2.2 分析

2.2.1 從表2、表3、表4的數據可以很直觀地看出，添加富馬酸二甲酯的處理與其它處理表現出極其明顯的差異性，添加防霉劑富馬酸二甲酯的處理隨著添加劑量的增加抑制雜菌能力增強，在添加劑量為占培養液的0.02%時表現非常突出，富馬酸二甲酯有效抑制了雜菌生長，凈化與維護了食用菌菌絲生長環境，食用菌菌絲得以實現正常生長，隨著劑量繼續增加時對食用菌菌絲生長影響也明顯增強。

2.2.2 在未嚴格進行滅菌消毒的培養液中進行食用菌菌絲培養時，食用菌菌絲與雜菌是共存的，食用菌菌絲與雜菌是一種競爭關系，相互之間是此消彼長的關系，從三次重復試驗結果可以明顯看出，不同防霉劑對雜菌和食用菌都有一定的抑制作用，在添加低劑量防霉劑或不添加防霉劑的對照處理中，雜菌繁殖能力與增殖速度快，而食用菌菌絲生長能力與增殖速度遠不及雜菌，在雜菌沒有得到有效抑制的情況下食用菌菌絲難以生長甚至接種萌發不成功。

2.2.3 在添加高劑量防霉劑的培養液中，食用菌菌絲將完全被抑制生長。

3.討論

3.1 食用菌液體菌種培養中在某些藥劑適當劑量的輔助作用下，是可以實現較粗放滅菌情況下食用菌菌絲正常生長的。在內緣牛肝菌液體菌種培養中，添加占培養液0.02%比例的富馬酸二甲酯，由于富馬酸二甲酯的抑菌作用，雜菌得到有效抑制，內緣牛肝菌液體菌種菌絲生長良好，雜菌率很低對大田生產影響甚微，可以在該食用菌試驗與生產中加以應用。

3.2 本試驗不同之處，一是在食用菌液體菌種生產中利用富馬酸二甲酯獨特的抑菌效果，在食用菌液體菌種培養液中添加適當劑量的富馬酸二甲酯抑制雜菌生長的同時為食用菌生長提供了有利的生長環境；二是簡化了液體菌種生產流程，如在食用菌液體菌種生產中可以直接使用食用菌子實體進行接種，使用的用具和材料及所處環境無需進行嚴格滅菌消毒等方面；三是在食用菌液體菌種生產中可以充分利用家庭常用設備和用具，無需購置搖床、培養罐等專用食用菌液體菌種生產設備，大大降低了食用菌生產設備、技術與投入門坎和生產成本，生產規模也可以依據生產者需求自主可控，有利于有適宜條件有發展食用菌產業意愿的廣泛農戶參與到食用菌產業中來，為提高農民收入多了一些可選擇的產業發展路子。

3.3 不同的食用菌對藥劑的選擇及劑量要求有待進一步試驗，除了在食用菌液體菌種試驗與生產上之外，在固態食用菌菌種生產及大田生產中也有一定借鑒意義。