新型冠狀病毒疫情下臨床微生物實習生生物安全的思考

王淑玲，張 震，徐蘭蘭，顏 令，廖 璞

(重慶市人民醫(yī)院檢驗科，重慶 400014)

生物安全風險普遍存在于臨床實驗室的各個領域，臨床實驗室人員已經(jīng)習慣于接受這些風險。當一種新病原體出現(xiàn)時，人們的擔憂就會加劇。新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)暴發(fā)以來，醫(yī)院檢驗科成為檢測疑似或確診患者各類標本的重要場所。COVID-19確診患者的臨床標本可檢測出新型冠狀病毒核酸[1]。相對于新型冠狀病毒核酸和抗體檢測，微生物培養(yǎng)標本不可滅活，傳統(tǒng)手工操作多，產(chǎn)生氣溶膠的機會多，在操作過程中難免會接觸到病原微生物及危險因子，增加了生物安全風險。雖然高校臨床微生物教學中包含生物安全教學，但涉及內容少，學生掌握參差不齊，因此必須對實習生進行生物安全培訓，提高生物安全意識，防止實驗室內感染，避免對社會造成危害。

1 醫(yī)學檢驗實習生生物安全教育現(xiàn)狀

醫(yī)學檢驗本科學生在校期間，必修教材《醫(yī)學微生物學》與《臨床微生物學檢驗技術》上有一節(jié)關于實驗室生物安全的課程，僅對病原微生物分類、實驗室生物安全分級和風險評估進行簡單介紹，缺少實驗室生物安全實驗課[2-3]。實習是將專業(yè)理論知識應用到臨床檢驗的實踐階段，從教室進入真實醫(yī)院實戰(zhàn)環(huán)境，檢驗科實習生對現(xiàn)實的實驗室生物安全意識狀態(tài)會顯現(xiàn)出來，職業(yè)暴露不良事件時有發(fā)生，更加凸顯出檢驗科實習期間生物安全培訓與實戰(zhàn)的重要性。

2 病原微生物實驗室現(xiàn)狀

實驗室工作人員每天都面臨職業(yè)暴露風險，如果沒有適當?shù)姆雷o標準和必要的防護意識，可能會威脅他們的健康和安全。實習生參與任何涉及標本的工作之前，應熟悉實驗室工作條件。實驗室應根據(jù)自身硬件與軟件現(xiàn)狀對學生進行針對性的培訓。自 2014 年出現(xiàn)埃博拉病毒以來，美國生物安全實踐取得了進展，但公共衛(wèi)生實驗室協(xié)會最近的一項調查表明，臨床實驗室沒有為當前和新出現(xiàn)的生物安全挑戰(zhàn)做好準備[4]。COVID-19疫情初期，重慶市臨床檢驗中心調查了26家重慶市醫(yī)療綜合實力相對較好的臨床實驗室生物安全，發(fā)現(xiàn)在應對COVID-19疫情時存在人員不足、實驗室安全設施不能有效控制污染、儀器設備未按要求檢定、防護用品無法滿足高致病微生物檢測工作需要、培訓方式不能保證效果等問題[5]。隨著疫情期間衛(wèi)生部門對實驗室安全監(jiān)管力度逐漸加大，病原微生物實驗室硬件設施配套建設、管理制度和人員培訓逐步完善。

3 實習生生物安全培訓

3.1法律法規(guī) 學生在校期間對生物安全法律法規(guī)知曉較少。實習生應與時俱進，熟悉掌握生物安全法律法規(guī)。隨著人們對COVID-19的認知不斷更新，各種法律法規(guī)相應出臺，防控和診療方案多次修正。COVID-19納入乙類傳染病，按甲類傳染病管理[6]；新型冠狀病毒按照第二類病原微生物進行管理[7]。醫(yī)護人員應該合理使用醫(yī)用防護用品，做好防控中的個人防護工作[8]。廣泛新型冠狀病毒疫苗預防接種后會產(chǎn)生抗體，COVID-19診療工作的科學性、規(guī)范性和有效性進一步提高[9]。2021年5月14日，我國進入常態(tài)化疫情防控和局部聚集性疫情處置階段，修訂了《新型冠狀病毒感染的肺炎防控方案(第八版)》[10]。對實習生進行實時培訓，熟悉防控新要求，培訓形式采取多種形式，一般采取線上和線下培訓，進行理論考核或實地演練考核。

3.2科室生物安全制度 學生入科前進行專業(yè)技能培訓和科室生物安全制度培訓。要求學生遵守以下準則：聽安全講座、正確穿戴個人防護用品、廢棄物正確處理、參加突發(fā)事件緊急預案演練等，考核合格后進入實習崗位。

3.3實驗室相關生物安全緊急預案 實習生在操作中難免會發(fā)生一些突發(fā)事件，為了及時、有效地做好實驗室生物安全事件預防、應對和控制工作，最大限度地減輕危害、降低損失、保護實驗人員及財產(chǎn)安全，結合實驗室制定應急預案，并對預案進行定期演練。預案包括日常工作中可能遇到的安全意外，如：疑似新冠標本污染生物安全柜、標本傾覆造成實驗室污染、污染物清理等[11]。實習生定期演練后熟悉掌握處理流程，在實際工作中遇到類似事件才能正確應對。

4 微生物標本檢測

生物安全不限于設施和制度，實驗室行為也有助于實驗室生物安全的實施，實戰(zhàn)與理論課程相結合可使學生獲得更深入的理解。

4.1臨床微生物標本前處理 微生物標本類型常包括呼吸道標本、血液、糞便、尿液、各類無菌體液、病理組織等。根據(jù)醫(yī)囑進行接種培養(yǎng)基、離心和涂片染色。這些標本中可檢測出新型冠狀病毒核酸。每個到達微生物的標本都可能存在潛在的致病性微生物， 按傳染性標本對待處理，微生物工作人員和實習生應在二級個人防護基礎上進行操作。微生物標本不可滅活且類型多樣，手工操作多，容易產(chǎn)生大量的氣溶膠，新型冠狀病毒在氣溶膠中至少可以存活 3 h[12]。打開標本輕柔緩慢，盡可能縮短打開后的持續(xù)時間。微生物標本接收、分揀、接種和涂片等操作應在Ⅱ級生物安全柜中操作，處理疑似、確診患者標本必須在Ⅱ級生物安全柜中操作，個人須三級生物安全防護。疑似、確診患者標本的培養(yǎng)皿接種完用膠帶密封。實驗室具備良好規(guī)范操作：正確開關機(使用前15～30 min開啟風機，使用完畢15～30 min后關閉風機)，臺面物品不過多，執(zhí)行每天功能監(jiān)測(包括流風自檢)、清潔消毒等。生物安全柜以紫外殺菌燈消毒為主，也可以用75%乙醇消毒[13]。涂片必須在生物安全柜內用強度大于90 μW/cm2的紫外線照射30 min，可有效殺滅SARS病毒，涂片方可進行染色[14]。離心疑似或確診患者標本時，操作者須二級生物安全防護。特殊情況(如懷疑灑漏)時，升級為三級生物安全防護。標本離心無意外，離心停止10 min以上，打開離心機蓋用噴霧消毒。如離心過程有異常聲響，則停止離心。改為三級生物安全防護后，停止離心30 min以上，小心開蓋，75%乙醇噴霧消毒后進行處理。盡可能在生物安全柜中將離心管放入和取出轉子。

4.2平板閱讀 標本接種培養(yǎng)平板后，常在溫度為(35±1)℃或(28±1)℃的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。培養(yǎng)箱溫度利于病原體生長，也利于病毒存活。新型冠狀病毒在標本和環(huán)境中有存活潛力和感染風險。新型冠狀病毒可在腹瀉患者的糞便中存活，糞口途徑現(xiàn)在正在成為社區(qū)傳播的主要環(huán)境問題[15]。由新型冠狀病毒感染引起的胃腸道癥狀及病毒 RNA 不僅存在于感染者的糞便中，而且存在于廢水中,作為流行病學的潛在來源[16]。在醫(yī)院和高層塔樓等室內環(huán)境中，消毒不當和有缺陷的管道系統(tǒng)可能會促進攜帶病毒的廢水導致感染[17]。在室溫條件下，新型冠狀病毒可在痰液中存活大于或等于4 d[18]。經(jīng)過24～48 h培養(yǎng)，對平板進行閱讀，需開蓋觀察菌落形態(tài)，挑取病原體進行分純、涂片、鑒定和藥敏試驗。微生物人員和實習生日常工作中開蓋時氣溶膠溢出，易造成污染，處理過程必須在Ⅱ級生物安全柜中操作，且動作輕柔。

4.3標本及廢棄物處理和環(huán)境消毒 病毒污染的物品也可作為傳染源，微生物檢測標本中可分離到新冠病毒，應當注意防止其對環(huán)境的污染，檢測完畢裝入黃色垃圾口袋高壓滅菌處理。工作結束后，室內無人時使用紫外線殺菌，每次消毒時間不少于30 min。注意紫外線有效消毒距離。房屋消毒，必要時可以采用移動方式。定期檢測消毒設備性能，累積使用時間不超過規(guī)定時限。物體表面及地面的消毒：每天實驗后下班前使用含1 000 mg/L有效氯的消毒液進行桌面、臺面及地面擦拭消毒。清潔區(qū)可以使用含500 mg/L有效氯的消毒液。消毒液需要現(xiàn)用現(xiàn)配，24 h內使用，進行氯濃度測試。

5 心理健康

COVID-19疫情暴發(fā)時，醫(yī)務工作者面臨巨大挑戰(zhàn)和沉重壓力，承擔了高強度和高應激的工作，產(chǎn)生一系列心理應激反應，嚴重影響醫(yī)務工作者的心身健康。與病毒的斗爭需要包括實習生在內的醫(yī)務工作者的團結力量。突如其來如此嚴重的公共衛(wèi)生事件，會使實習生產(chǎn)生心理健康問題。一項調查發(fā)現(xiàn)，在 2020 年畢業(yè)的醫(yī)生中，酒精攝入量在大流行演變期間增加[19]。COVID-19暴發(fā)期間，廣州市某綜合性教學醫(yī)院集體隔離的95名護理實習生焦慮和抑郁程度較高，影響了他們的睡眠質量[20]。針對實習生可能出現(xiàn)的心理問題，應及時采取干預措施和心理疏導，改善他們的心理健康和睡眠質量。同樣，應該關注臨床微生物實習生心理健康，及時進行心理援助。

6 小 結

COVID-19雖然具有高傳染性，對實驗室生物安全帶來了新的要求，尤其對剛進入臨床的實習生提出前所未有的生物安全教育要求。適當?shù)纳锇踩珜嵺`和控制措施是實驗室生物安全文化。應該抓住此次疫情機遇，強化安全意識，增強對學生的保護措施和生物安全教育，讓生物安全觀念扎根，避免院內感染，具備畢業(yè)后應對新興生物安全突發(fā)事件的防控能力。